INTRODUCCION

La capacidad del ojo humano es limitada a la hora de estudiar lo pequeño. En un mundo

en donde hay una inmensa cantidad de células y microorganismos que influyen
significativamente en la vida del hombre y que, por ello, exigen ser estudiadas en favor de
un mayor conocimiento y mejora en la calidad de vida. Gracias a los avances y el
progreso en el campo de la microscopía, el hombre ha sido capaz de ver organismos y
estructuras que a simple vista serían invisibles y, con ello, efectuar descubrimientos
decisivos en el campo de la microbiología, relacionados con las transformaciones de la
materia orgánica, las causas de las enfermedades o los agentes implicados en los
cambios geoquímicos.
El microscopio es una de las herramientas más valiosas que nos permite descifrar parte
de los misterios de la vida en general. Es un instrumento delicado. Mediante la práctica
de montaje, enfoque y observación, es posible determinar las características cualitativas
y cuantitativas de estructuras muy pequeñas y transparentes con el fin de penetrar al
micro mundo que era casi inexistente hasta antes de su invención.
Como los microscopios son instrumentos ópticos, es necesario obtener el aumento total
de la combinación del aumento del ocular y el aumento del objetivo, y se obtiene de la
siguiente manera: el ocular tiene un determinado aumento, que generalmente es de 10
aumentos o de 10X, los objetivos tienen diferente poder de resolución que puede ser: 4X,
10X, 40X y 100X, el resultado final de número de aumentos se da multiplicando el
aumento del ocular por el aumento del objetivo que se está utilizando; ejemplo: ocular
10X y el objetivo es de 40X, el resultado será 400 aumentos o 400X
MARCO TEORICO
MICROSCOPIO
Un microscopio es un instrumento que amplifica una imagen y permite la observación de
mayores detalles de los posibles a simple vista. El microscopio más simple es una lente
de aumento o un par de anteojos.
El poder de resolución del ojo humano es de 0,2 mm es decir que para ver dos objetos
separados estos deben estar como mínimo a esa distancia.
El microscopio aumenta la imagen hasta el nivel de la retina, para captar la información.
La resolución depende de la longitud de onda de la fuente luminosa, el espesor de la
muestra a observar, la calidad de la fijación y la intensidad de la coloración.
Teóricamente la máxima resolución que se puede alcanzar es de 0,2 µm, dada por una
luz con longitud de onda de 540 nm, la cual pasa por un filtro verde (muy sensible por el
ojo humano) y con objetos condensadores adecuados. El ocular aumenta la imagen
producida por el objetivo, pero no puede aumentar la resolución.
COMPONENTES MECÁNICOS DEL MICROSCOPIO

 El ESTATIVO O SOPORTE
Está formado por un pie pesado que sostiene un brazo inclinado del cual salen
tanto la platina como el tubo del microscopio.
 La PLATINA
es la pieza sobre la que se colocan las diferentes preparaciones que deseamos
observar. La forma de la platina es variada y puede ser tanto fija como móvil.
Prácticamente, todos los microscopios profesionales actuales poseen un carro
 móvil graduado, que hace posible el movimiento y la localización precisa de áreas
de interés en la preparación.
 El TUBO
lleva, en la parte inferior, el revólver con los objetivos, y en la superior, los
oculares cambiables.
 El REVÓLVER
es una pieza que lleva varios objetivos intercambiables y permite adaptar éstos al
tubo del microscopio.
 LOS MANDOS DE ENFOQUE
manejan el enfoque bien sea por el movimiento vertical de la platina o del tubo,
según el tipo de microscopio. Habitualmente se colocan a ambos lados del
estativo. Para una mayor precisión en el enfoque es necesario un mando
micrométrico para ajuste fino, resultando más cómodos si ambos mandos (macro
y micro) actúan sobre el mismo eje (co-axiales). Actualmente los microscopios
profesionales llevan estos mandos graduados, así como control de tensión o
preenfoque rápido.
 LOS OBJETIVOS
constan de un sistema de lentes. Podemos hablar de objetivos secos, que son
aquellos en los que entre el objetivo y la preparación sólo hay aire, y también
podemos hablar de objetivos de inmersión, cuando es necesario colocar entre la
lente y la preparación un elemento líquido, que permite una mayor luminosidad.
Ésta y otras características como: aumento del objetivo, apertura numérica,
longitud del tubo y espesor del cubreobjetos, vienen indicadas mediante unas
marcas en el objetivo.
 LOS OCULARES
están formados por dos lentes que se encuentran separadas por un diafragma.
Para hacer más cómoda la observación, existen microscopios que tienen dos
oculares en lugar de uno. Ello permite observar con los dos ojos a la vez.
Actualmente existen cabezales múltiples, que permiten que varias personas
puedan observar una misma muestra a la vez.
 La FUENTE DE LUZ
es muy importante ya que una correcta iluminación de la preparación que
deseamos observar es una condición necesaria para poder realizar una buena
observación. Podemos obtener la fuente de luz a través de un espejo situado
debajo de la platina, que recoge tanto la luz natural como la luz eléctrica, o a
través de lámparas incorporadas al pie del microscopio.
 El CONDENSADOR
es una lente o sistema de lentes situadas debajo de la platina y que permite
concentrar la luz en la muestra que se observa Existen distintos tipos de
condensadores, dependiendo de las necesidades y requerimientos de nuestra
observación: abbe, de campo oscuro, acromático, etc.
 El DIAFRAGMA
está situado debajo de la platina y del condensador, siendo el encargado de
regular la entrada de luz al condensador. En algunos modelos se acciona por
medio de una palanca y en otros mediante una rueda con orificios de distintos
diámetros.
TIPOS DE MICROSCOPIO Y FUNCIONES
A continuación, ofrecemos a modo de esquema una posible clasificación de los diferentes
tipos de microscopio atendiendo a los últimos avances en el campo de la microscopia, y
tomando como referencia los criterios clásicos de clasificación.
MICROSCOPIA ÓPTICA:
a) M. Simple:
Lupas: monoculares binoculares
b) M. Compuesto:
Estereomicroscopios
· De luz ultravioleta
· De fluorescencia
· De contraste de fases
· De campo oscuro
· De polarización
· Microscopia por luz reflejada
MICROSCOPIA ELECTRÓNICA:
·De Barrido (MEB)
·De Transmisión (TEM)
· Microscopio confocal de barrido láser
USO DEL MICROSCOPIO
Los pasos ha seguir para trabajar con el microscopio son los siguientes:
1) Llevar las manos limpias y secas antes de tocar un microscopio. Limpiar
adecuadamente el lugar donde se ubicará el aparato.
2) Para coger un microscopio, siempre debemos hacerlo por el brazo o por la base con
ambas manos y mucho cuidado.
3) Comprobar el estado general del microscopio. Objetivo de mínimo aumento
seleccionado, limpieza de los objetivos (especialmente el de inmersión y los de gran
tamaño colindantes –de 40 o 60 aumentos-), limpieza del ocular, limpieza de la platina,
limpieza y ubicación del condensador.
4) Verificar la conexión del cable del microscopio a la toma de corriente.
5) Comprobar que la iluminación funciona correctamente.
6) Dejar el condensador lo más cerca de la platina posible, sin que llegue nunca a tocar la
misma o la base de la preparación.
7) Cerrar el diafragma al máximo, con ello obtenemos una imagen menos luminosa, pero
con mayor profundidad de campo, facilitando el enfoque. Si es necesario lo abriremos
luego.
8) Comprobar que el objetivo que está seleccionado (vertical o perpendicular sobre la
platina) es el de menor aumento del aparato.
9) Comprobar que el ocular u oculares instalados son los deseados en esta observación.
10) Verificar a través del ocular (u oculares) que todo el campo visual permanece
uniformemente iluminado.
11) Ajustar la distancia interpupilar y las dioptrías si el microscopio es binocular.
12) Colocar en la platina la preparación. Si tenemos pinzas de sujeción, comprobar que
están adecuadamente ajustadas y bien situadas a los lados de la muestra, sin llegar a
tocar la zona del cubreobjetos. Si tenemos carro cubreplatina,asegurarnos del correcto
centrado de la muestra respecto a la ilumninación (normalmente se regula al centro de la
muestra).
13) Aproximar, mirando desde el lateral –y no a través del microscopio- al máximo posible
el objetivo. Se puede usar como referencia un papelito doblado varias veces para
comprobar el acercamiento en objetivos de mayor aumento.
14) Mirar a través del ocular (u oculares) e ir separando el objetivo de la preparación,
primero con el mando macrométrico y una vez comience a verse enfocada la muestra con
el mando micrométrico, hasta conseguir un enfoque perfecto.
15) Para pasar a un objetivo de más aumento, que suele ser de mayor tamaño, separar al
máximo el objetivo de la preparación y proceder como en los puntos anteriores.
16) Para pasar a un objetivo de menos aumento, que suele ser de menor tamaño –
verificar esto último según el modelo de microscopio-, simplemente girar el revólver
portaobjetivos y proceder como en los puntos anteriores.
17) Una vez acabada la observación, llevar la caja con cuidado, siempre de pie, a la
estantería o lugar donde guardemos los aparatos.
Para utilizar el objetivo de inmersión proceder según los siguientes pasos:
1) Separar al máximo el objetivo que estemos usando de la preparación.
2) Asegurarnos de que el condensador se encuentra lo más próximo posible a la
preparación.
3) Cerrar el diafragma al máximo.
4) Centrar la preparación respecto al haz de luz que atraviesa la muestra. Es decir, el
circulo iluminado debe estar en el centro del cubreobjetos de la preparación
. 5) Girar el revólver hasta situar perpendicularmente el objetivo de inmersión. Si el
objetivo queda muy cerca de la preparación, ladearlo ligeramente para dejar sitio y poder
poner el aceite de inmersión. (El aceite de inmersión posee un índice de refracción –I.R.-
mayor que el aire, facilitando la observación).
6) Poner una gotita de aceite de inmersión (una gotita de dos milímetros de diámetro
puede ser suficiente) centrada sobre el circulo iluminado de la preparación
. 7) Acercar el objetivo de inmersión muy lentamente mirando desde el lateral para evitar
tocar la preparación con el objetivo.
8) Llegará un momento que la gotita de aceite de inmersión parece estirarse y pegarse al
extremo del objetivo. En ese momento ya podemos mirar por el ocular (u oculares) e ir
enfocando con el mando micrométrico, siempre muy despacio y con mucho cuidado.
9) La observación con aceite de inmersión es la última que debemos realizar, pues una
vez hemos puesto aceite sobre el cubreobjetos, el uso de un objetivo de 40 o 60 se hace
imposible porque se pueden ensuciar, y se pierde mucha calidad para regresar a
observaciones con objetivos de 10 o 4 aumentos. Si se trata de una preparación
comercial o sellada, procederemos a limpiarla adecuadamente para posteriores
observaciones, bien con un producto comercial o bien con alguno de los líquidos que
indicamos seguidamente para limpieza de objetivos.
10) Al terminar la observación, separamos el objetivo de la platina al máximo.
11) Girar entonces el revólver hasta dejar seleccionado el objetivo de menor aumento,
con lo cual el objetivo de inmersión (que debe ser el opuesto en el revólver) quedará
hacia fuera del aparato.
12) Proceder a limpiar adecuadamente el objetivo de inmersión con un papelito de
limpieza de lentes (se puede sustituir por papel de filtro o mejor por papel “de fumar”).
Para ello, pasar muy suavemente sin apretar el papelito por la lente del objetivo, siempre
en el mismo sentido y nunca haciendo arrugas en el papel. Se puede acabar la limpieza
con una gamuza especial para lentes (por ejemplo microfibra que no deja pelusa),
asegurándonos primero de que no queda aceite en el objetivo.

13) Si el aceite de inmersión se ha secado en el objetivo, limpiarlo con un disolvente

adecuado para este tipo de limpiezas. Si no hay un producto específico, se puede usar
xilol o bien una mezcla de alcohol y acetona en proporción 7:3 (siete partes de alcohol-
tres partes de acetona). No se debe abusar de estas limpiezas con disolventes, pues
pueden despegar la lente del objetivo o dañarla irremediablemente.
14) Tener siempre presente las precauciones e instrucciones de uso. Tratar con sumo
cuidado el aparato y dejarlo convenientemente limpio, ajustado y guardado.

SISTEMA DE ILUMINACIÓN
El sistema de iluminación está constituido por las partes del microscopio que producen o
captan, reflejan y regulan la intensidad de la luz que se utiliza para la observación
microscópica. Uno de los aspectos críticos a considerar en la microscopía óptica es la
fuente de luz que se emplea para iluminar el espécimen. Si la muestra es iluminada de
manera inadecuada, la calidad de la imagen que se obtiene se verá afectada, aun cuando
se disponga de un excelente sistema óptico. La iluminación óptima debe ser brillante, sin
resplandores y en lo posible debe dispersarse de manera uniforme en el campo de
observación.
Si se emplea luz visible (fotones) es usual que al microscopio se le denomine fotónico. En
sus inicios, la microscopía se practicaba con iluminación por reflexión; se utilizaba un
espejo que se orientaba para recoger la luz solar o en su defecto, luz artificial (la luz de
una vela, mechero a gas, lámparas de aceite o petróleo) y la desviaba hacia la
preparación. Este método se mantuvo durante mucho tiempo, en parte debido al lento
perfeccionamiento de las bombillas incandescentes, que consisten en un globo de cristal
en el que se ha hecho el vacío y dentro del cual va colocado un hilo de metal (platino,
carbón, tungsteno, entre otros) que al paso de una corriente eléctrica se pone
incandescente y sirve para alumbrar.
Con el uso de la bombilla eléctrica se suprime este espejo y los microscopios pueden
utilizarse en cualquier lugar. Sin embargo, algunos modelos de microscopios actuales,
desde los más sencillos y económicos hasta los más sofisticados, aún poseen un espejo
que sirve para desviar la luz producida por la bombilla, en el caso que ésta no se
encuentre alineada con la platina.
El sistema de iluminación está constituido por la fuente de luz, el condensador y un
diafragma o iris. Como regla general, el sistema de iluminación está colocado debajo de
la platina y la finalidad es de iluminar mediante luz transmitida. En la mayoría de los
casos el estudio de las preparaciones histológicas se hace por transiluminación. En otros
casos muy específicos se emplea el método de luz reflejada, en el cual se ilumina la
superficie del espécimen mediante epi-iluminación. La fuente de luz emite una radiación
que es recogida por un dispositivo denominado condensador, que a su vez forma un cono
luminoso necesario para la visualización con objetivos de mayor aumento.

BIBLIOGRAFIA
Autores:Dr. José Molina López Dra. Teresa Uribarren Berrueta

http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/generalidades.html

Autores: N.ARRAIZA, P.M. VIGURIA J.NAVARRO, A. AINCIBURU

Tema: Historia, descripción y uso del microscopio óptico
http://dw.crackmypdf.com/0449866001523420531/manual%20de%20microscopia.pdf
autor: Simón J. Rovira
PEQUEÑO MANUAL BÁSICO DE MICROSCOPÍA 2004
http://iespoetaclaudio.centros.educa.jcyl.es/sitio/upload/manual_microscopio.pdf

Daniel J. Narváez Armas 2007

LA MICROSCOPÍA:HERRAMIENTA PARA ESTUDIAR CÉLULAS Y TEJIDOS
http://www.medic.ula.ve/histologia/anexos/microscopweb/MONOWEB/capitulo3.htm