NORMA CHILENA OFICIAL NCh1620/1.

Of84

Agua potable - Determinación de bacterias coliformes

totales - Parte 1: Método de los tubos múltiples (NMP)

Preámbulo

El Instituto Nacional de Normalización, INN, es el organismo que tiene a su cargo el

estudio y preparación de las normas técnicas a nivel nacional. Es miembro de la
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION (ISO) y de la COMISION
PANAMERICANA DE NORMAS TECNICAS (COPANT), representando a Chile ante esos
organismos.

La norma NCh1620/1 ha sido preparada por la División de Normas del Instituto Nacional
de Normalización, y en su estudio participaron los organismos y las personas naturales
siguientes:

Agua Potable Maipú Camilo Concha S.

Aguas Industriales Ltda., AGUASIN Severino García G.
Alejandra Sandoval H.
Empresa de Agua Potable Lo Castillo
Ltda., EAPLOC Elizabeth Echeverría O.
Empresa de Obras Sanitarias de la V Región, ESVAL José Gorgollón C.
Empresa Metropolitana de Obras
Sanitarias, EMOS Félix Blú P.
Fernando Garcés A.
Lino A. Yelpi P.
Instituto de Ecología de Chile Juan Grau
Instituto de Fomento Pesquero, IFOP Marion Belmonte S.
Instituto de Investigaciones y Control,
Ejército de Chile, IDIC Emilio Lorenzini B.
Instituto de Investigaciones y Ensayes
Farmacológicos, IDIEF Sonia Avendaño V.
Instituto de Salud Pública de Chile Cecilia Venegoni M.

I
NCh1620/1
Instituto Nacional de Normalización, INN Leonor Ceruti M.
Laboratorio Químico Carlos Latorre Teresa Carmona V.
Laboratorio Tecnoanálisis de Alimentos Pedro Cheul G.
Servicio Agrícola y Ganadero, División
Protección Recursos Naturales, SAG-DIPROREN Manuel Cubillos L.
Servicio Nacional de Obras Sanitarias, SENDOS Carlos Morales N.
Zita Ruiz I.
Universidad Católica de Chile, Instituto
de Ciencias Químicas Guido Concha G.
Universidad de Concepción, Facultad de
Ciencias Biológicas y de Recursos Naturales Rolf Kümmerlin R.
Universidad de Concepción, Facultad de
Farmacia Claudio Villegas F.
Universidad de Chile, Facultad de Ciencias
Físicas y Matemáticas, Sección Ingeniería
Sanitaria y Ambiental, SISA Gabriela Castillo M.
Universidad del Norte, Depto. Geociencias Hugo Alonso C.

Esta norma se estudió para establecer un método normalizado para determinar bacterias
coliformes totales en agua potable según el método de los tubos múltiples (NMP).

Esta norma concuerda con el método establecido en Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 15th Ed.

El anexo A forma parte del cuerpo de la norma.

Los anexos B y C no forman parte del cuerpo de la norma, se insertan sólo a título
informativo.

Esta norma ha sido aprobada por el H. Consejo del Instituto Nacional de Normalización,
en sesión efectuada el 22 de junio de 1984.

Esta norma ha sido declarada Oficial de la República de Chile por Decreto N° 285, de
fecha 30 de agosto de 1984, del Ministerio de Salud, publicado en el Diario Oficial
N° 32024 del 17 de Noviembre de 1984.

II
 NORMA CHILENA OFICIAL NCh1620/1.Of84

Agua potable - Determinación de bacterias coliformes

totales - Parte 1: Método de los tubos múltiples (NMP)

1 Alcance y campo de aplicación

1.1 Esta norma establece la determinación del número más probable de bacterias
coliformes totales en agua, mediante la técnica de tubos múltiples.

1.2 Esta norma se aplica al agua potable.

2 Referencias

NCh1175 Alimentos - Material para ensayos microbiológicos - Requisitos

generales.

3 Resumen del método

3.1 Principios

El método se basa en la capacidad que tienen los organismos coliformes de fermentar la

lactosa con producción de gas, al ser incubados a 35 ± 0,5 ºC durante 48 h.

3.2 Requisitos generales

Cumplir las especificaciones generales que se establecen en NCh1175.

1
NCh1620/1
4 Terminología

4.1 bacterias coliformes totales: comprende todos los bacilos Gram negativos, aerobios
o anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con producción de
gas a 35 ± 0,5 ºC dentro de 48 ± 3 h, de acuerdo al método descrito en esta norma.

4.2 técnica de tubos múltiples: método cuantitativo para estimar la concentración de

bacterias presentes en el agua, mediante la inoculación de una serie de tubos en
concentraciones decimales decrecientes de la muestra, en un medio de cultivo
adecuado, las cuales se incuban en condiciones de tiempo y temperatura determinados.

5 Reactivos y medios de cultivo

5.1 Reactivos

5.1.1 Agua destilada

Exenta de sustancias tóxicas o nutrientes que puedan influir en el desarrollo o

supervivencia de microorganismos.

5.1.2 Agua tamponada para dilución

5.1.2.1 Componentes

Solución stock de fosfato monopotásico: disolver 34,0 g de fosfato monopotásico

(KH2 PO4) en 500 ml de agua destilada, ajustar el pH a 7,2 ± 0,5 con solución normal
de hidróxido de sodio (NaOH;1N) y diluir a 1 ! con agua destilada.

Solución stock de sulfato de magnesio: disolver 50 g de sulfato de magnesio (MgSO4)

en 1 ! de agua destilada.

Solución stock de cloruro de magnesio: disolver 38 g de cloruro de magnesio (MgC!2) en

1 ! de agua destilada.

5.1.2.2 Preparación

Agregar 1,25 ml de solución stock de fosfato monopotásico y 5,0 ml de solución stock

de sulfato de magnesio o solución stock de cloruro de magnesio a 1 ! de agua destilada.
Esterilizar en autoclave a 121 ± 2 ºC durante 15 min.

5.1.3 Alcohol etílico de 95%

5.1.4 Solución de alcohol-acetona: mezclar volúmenes iguales de alcohol etílico (5.1.3)

y acetona.

2
 NCh1620/1

5.1.5 Solución de cristal violeta: disolver 2 g de cristal violeta en 20 ml de alcohol

etílico (5.1.3). Disolver 0,8 g de oxalato de amonio en 80 ml de agua destilada (5.1.1).

Mezclar ambas soluciones, dejar reposar durante 24 h y filtrar a través de papel grueso
o algodón.

5.1.6 Solución de lugol: disolver 2 g de yoduro de potasio (Kl) en 5 ml de agua

destilada, agregar 1 g de cristales de yodo (l2 ) y agitar hasta disolver totalmente el
yodo. Agregar 295 ml de agua destilada y mezclar.

5.1.7 Solución de fucsina

Solución stock: disolver 1,0 g de fucsina en 100 ml de agua destilada.

Solución diluida: diluir 10 ml de la solución stock de fucsina en 90 ml de agua destilada.

5.1.8 Solución de safranina

Solución stock: disolver 2,5 g de safranina en 100 ml de alcohol etílico de 95% (5.1.3).

Solución diluida: diluir 10 ml de la solución stock de safranina en 90 ml de agua

destilada.

5.2 Medios de cultivo

5.2.1 Agar eosina azul de metileno, modificado según Levine:

5.2.1.1 Composición del medio basal:

peptona 10,0 g

lactosa 10,0 g

fosfato dipotásico (K2HPO4) 2,0 g

agar 15,0 g

eosina 0,4 g

azul de metileno 0,065 g

5.2.1.2 Disolver en 1 ! de agua destilada y esterilizar en autoclave a 121 ± 2 ºC

durante 10 a 12 min. El pH final del medio debe ser 7,1 después de la esterilización.

5.2.1.3 Dejar enfriar a 40 - 45 ºC y distribuir asépticamente en placas de Petri estériles

en volúmenes de 12 a 15 ml.

3
NCh1620/1

5.2.2 Agar Endo

5.2.2.1 Composición del medio basal:

peptona 10,0 g

lactosa 10,0 g

fosfato dipotásico (K2HPO4) 3,5 g

agar 15,0 g

sulfito de sodio 2,5 g

fucsina básica 0,4 g

5.2.2.2 Disolver los componentes en 1 ! de agua destilada (5.1.1) en un baño de agua

hirviendo, enfriar a 45 ºC y distribuir en placas de Petri (6.10) en cantidades de 15 a
20 ml. No esterilizar en autoclave. El pH final del medio debe ser 7,4 ± 0,1.

5.2.3 Agar nutritivo

5.2.3.1 Composición del medio basal:

peptona 5,0 g

extracto de carne 3,0 g

agar 15,0 g

5.2.3.2 Disolver en 1 ! de agua destilada, y distribuir en caliente en tubos de cultivo en

volúmenes de 4 o 5 ml. Esterilizar en autoclave a 121 ± 2 º C durante 10 a 12 min.

5.2.3.3 Enfriar a 45 ºC y dejar los tubos inclinados hasta que el medio solidifique de
modo de obtener una superficie de agar de 6 a 7 cm de largo. El pH final del medio debe
ser 6,8.

5.2.4 Caldo lactosado

5.2.4.1 Composición del medio basal:

Concentración Concentración
Simple Doble

extracto de carne 3,0 g 6,0 g

peptona 5,0 g 10,0 g
lactosa 5,0 g 10,0 g

4
 NCh1620/1
5.2.4.2 Disolver en 1 ! de agua destilada, calentando suavemente para disolver los
componentes, y distribuir en tubos de cultivo (6.14) con tubos Durham en su interior
(6.15).

5.2.4.3 Esterilizar en autoclave a 121 ± 2 ºC durante 15 min. El pH final del medio

debe ser de 6,9 ± 0,2.

5.2.5 Caldo lauril sulfato triptosa

5.2.5.1 Composición del medio basal:

Concentración Concentración
Simple Doble

triptosa 20,0 g 40,0 g

lactosa 5,0 g 10,0 g

fosfato dipotásico (K2HPO4) 2,75 g 5,5 g

fosfato monopotásico (KH2PO4) 2,75 g 5,5 g

cloruro de sodio 5,0 g 10,0 g

lauril sulfato de sodio 0,1 g 0,2 g

5.2.5.2 Disolver en 1 ! de agua destilada, y distribuir en volúmenes de 10 ml en tubos

de cultivo (6.14) con tubos Durham (6.15) en su interior.

5.2.5.3 Esterilizar en autoclave a 121 ± 2 º C durante 15 min. El pH final del medio

debe ser de aproximadamente 6,8.

5.2.6 Caldo bilis lactosa verde brillante

5.2.6.1 Composición del medio basal:

peptona 10,0 g

lactosa 10,0 g

sales biliares 20,0 g

verde brillante 0,0133 g

5.2.6.2 Disolver los componentes en 1 ! de agua destilada, distribuir en tubos de

cultivo en cantidades tales que el Iíquido cubra el tubo Durham después de la
esterilización y esterilizar en autoclave a 121 ± 2 º C durante 15 min. El pH final del
medio debe ser 7,2.

5
NCh1620/1

6 Aparatos

6.1 Autoclave, regulable a 121 ± 2 ºC.

6.2 Aguja de inoculación, ligeramente curvada en la punta.

6.3 Asa de nicrón o platino-iridio, de 3 mm de diámetro mínimo.

6.4 Equipo potenciométrico para determinar pH, con una exactitud de ± 0,1 unidades
de pH.

6.5 Estufa de cultivo, regulable a 35 ± 0,5 ºC.

6.5 Estufa de esterilización, con circulación de aire caliente, regulable a 170 ± 10 ºC.

6.7 Frascos o matraces de dilución, estériles.

6.8 Microscopio, provisto de objetivo de inmersión (100 x).

6.9 Pipetas bacterioiógicas, de 1,5 y 10 ml, con subdivisiones de 0,1 ml, estériles.

6.10 Placas de Petri, estériles, de 100 mm de diámetro por 15 mm de profundidad.

6.11 Portaobjetos

6.12 Recipientes para pipetas, cilíndricos o rectangulares, de aluminio, acero inoxidable,

vidrio pyrex u otro material no corrosivo y resistente al calor, provistos de tapa; o
envolturas de papel Kraft. No deben usarse recipientes de cobre o de aleaciones de
cobre.

6.13 Recipientes para placas de Petri, cilíndricos, cuadrados o rectangulares, provistos

de tapa; o canastillos de alambre, de acero inoxidable tejido, o envolturas de papel
Kraft. No deben usarse recipientes de cobre o de aleaciones de cobre.

6.14 Tubos de cultivo, de 20 mm x 150 mm y de 16 mm x 150 mm.

6.15 Tubos Durham, de diámetro no inferior al 40% del diámetro del tubo de cultivo,
debiendo quedar completamente Ileno y sumergido en el medio.

6.18 Otro material de uso habitual en laboratorio.

6
 NCh1620/1
7 Procedimiento

7.1 Ensayo presuntivo

7.1.1 Inocular la muestra en tubos de cultivo con caldo lauril sulfato triptosa (5.2.5), o
caldo lactosado (5.2.4), en los volúmenes y series que se indican en la tabla 1, según si
el agua está o no clorada.

Tabla 1 - Volúmenes de muestra y serie de tubos inoculados

Volumen de la Concentración del caldo Nº de tubos inoculados

muestra, ml lauril triptosa o caldo
Agua clorada Agua no clorada
lactosado

10 doble 5 5

1 simple 1 5

0,1* simple 1 5

*) Diluir 1 ml de muestra en 9 ml de agua tamponada para dilución (5.1.2), e inocular 1 ml

de esta dilución.

7.1.2 Incubar los tubos a 35 ± 0,5 º C.

7.1.3 Examinar los tubos a las 24 ± 2 h de incubación, y reincubar por 24 h adicionales

aquellos tubos que no presenten formación de gas dentro del tubo Durham, o sean
dudosos.

7.1.4 Anotar el número total de tubos que presenten turbiedad y formación de gas
dentro de las 48 ± 3 h de incubación.

El enturbiamiento del medio de cultivo acompañado de formación de gas, en cualquier

cantidad, dentro de 48 ± 3 h de incubación constituye un ensayo presuntivo positivo.

7.2 Ensayo confirmativo

7.2.1 Someter al ensayo confirmativo todos los tubos de caldo lauril sulfato triptosa o
caldo lactosado que dieron positivo el ensayo presuntivo a las 24 h ya las 48 ± 3 h de
incubación (7.1.3 y 7.1.4). Se recomienda realizar inmediatamente la prueba
confirmativa de los tubos positivos a las 24 h, ya que las bacterias coliformes podrían
ser inhibidas por la flora bacteriana acompañante, debido a acción antagonista y/o
variación del pH.

7.2.2 Agitar suavemente los tubos positivos y transferir una asada de cada tubo a otro
tubo de cultivo que contenga caldo bilis lactosa verde brillante. (5.2.6).

7.2.3 Incubar a 35 ± 0,5 ºC durante 48 ± 3 h.

7
NCh1620/1
7.2.4 Examinar los tubos después de la incubación y anotar el número total de tubos
que presenten formación de gas dentro de las 48 ± 3 h de incubación.

La formación de gas, en cualquier cantidad, dentro de 48 ± 3 h de incubación

constituye un ensayo confirmativo positivo.

7.3 Ensayo completo

7.3.1 Efectuar el ensayo completo a:

a) muestras de calidad desconocida;

b) muestras que den resultados inesperados;

c) muestras con un alto recuento de bacterias aerobias viables a 35 ºC;

d) muestras tomadas con el objeto de efectuar un control de calidad;

e) el 5% de las muestras que dieron positivo al ensayo confirmativo; y/o

f) muestras de repetición tomadas en un punto en el cual se obtenga en forma

reiterada 3 o más porciones positivas de 10 ml en el ensayo confirmativo.

7.3.2 Mediante una aguja de inoculación (6.2), sacar un inóculo de cada tubo de cultivo
positivo en caldo bilis lactosa verde briIlante y sembrarlo sobre la superficie de una placa
de agar eosina azul de metileno modificado (5.2.1) o agar Endo (5.2.2), teniendo
cuidado de no romper el agar y girando la placa a fin de obtener un buen aislamiento.

7.3.3 Incubar las placas en posición invertida a 35 ± 0,5 º C durante 24 ± 2 h.

7.3.4 Después de la incubación, verificar el desarrollo de colonias, las cuales pueden

presentar las siguientes características, en agar Endo o agar eosina azul de metileno
modificado:

a) colonias típicas de coliformes: de color rosado oscuro, con núcleo central, con o sin
brillo metálico;

b) colonias atípicas: de color rosado, opacas, sin núcleo;

c) colonias negativas: transparentes, de características diferentes a las anteriores.

7.3.5 De cada placa que presente desarrollo, repicar con un asa (6.3) 3 colonias
aisladas (2 colonias típicas y 1 colonia atípica) y sembrar cada una de ellas en un tubo
con caldo lauril sulfato triptosa (5.2.5) o caldo lactosado (5.2.4) y en un tubo de agar
nutritivo (5.2.3).

7.3.6 Incubar los tubos de caldo lauril sulfato triptosa o caldo lactosado a 35 ± 0,5 ºC
durante 24 ± 2 h. Si no se produce gas dentro de las 24 ± 2 h de incubación,
reincubar los tubos y volver a examinar a las 48 ± 3 h de incubación total.
8
 NCh1620/1
7.3.7 Incubar los tubos de agar nutritivo a 35 ± 0,5 º C durante 24 h.

7.3.8 A cada tubo de agar nutritivo cuyo correspondiente tubo de caldo lauril sulfato
triptosa o caldo lactosado haya evidenciado formación de gas, realizar tinción de Gram,
según se indica en 7.3.9.

7.3.9 Tinción de Gram

7.3.9.1 Limpiar una lámina portaobjeto (6.11), colocar sobre ella una gota de agua
destilada (5.1.1) y una pequeña cantidad de inóculo; esparcir sobre la Iámina y fijar a la
Ilama de un mechero.

7.3.9.2 Dejar enfriar y cubrir la lámina con gotas de solución de cristal violeta (5.1.5)
durante 1 min. Eliminar el exceso de colorante enjuagando con agua destilada.

7.3.9.3 Agregar solución de lugol (5.1.6) y dejar durante 1 min. Decolorar rápidamente
con solución de alcohol-acetona (5.1.4). Agregar solución de fucsina (5.1.7) o solución
de safranina (5.1.8) y dejar durante 30 s.

7.3.9.4 Lavar la lámina con agua destilada, secar y observar al microscopio (6.8)
utilizando el objetivo de inmersión (100 x).

Las bacterias coliformes se presentan como bacilos Gram-negativos de color rosado.

7.3.10 La formación de gas en el tubo de caldo lauril sulfato triptosa o caldo lactosado
y la verificación de la presencia de bacilos Gram-negativos no esporulados en la tinción
del cultivo proveniente del tubo de agar nutritivo constituyen un ensayo completo
positivo.

8 Expresión de resultados

8.1 Determinar un código de 3 cifras con la combinación de tubos positivos y negativos

obtenidos en cada dilución, en el ensayo confirmativo (7.2).

8.2 Con el código establecido, entrar a la tabla 2 y leer directamente el Número Más
Probable de bacterias colifomnes por 100 ml, en la columna correspondiente al número
de tubos sembrados en cada dilución (ver anexo A).

8.3 Expresar el resultado como NMP por 100 ml.

NOTA - En anexo B, se indica un ejemplo para calcular el NMP/100 ml.

9
NCh1620/1
9 Informe

En el informe se debe indicar:

a) identificación de la muestra;

b) número de horas transcurridas entre la toma de la muestra y el ensayo;

c) contenido de cloro libre residual, determinado según método colorimétrico;

d) referencia al método;

e) resultados obtenidos;

f) cualquier particularidad del ensayo que sea opcional o no esté considerada en

esta norma y que pueda afectar los resultados.

10
 NCh1620/1
Anexo A
(Normativo)

Número Más Probable (NMP) de bacterias coliformes por 100 ml, sembrando la
combinación de:

a) 5 tubos con 10 ml, 1 tubo con 1 ml y 1 tubo con 0,1 ml; y

b) 5 tubos con 10 ml, 5 tubos con 1 ml y 5 tubos con 0,1 ml.

Tabla 2 - Tabla para el cálculo del Número Más Probable (NMP).

Número de Número más Número de Número de Número de Número más

tubos positivos probable en tubos positivos más probable tubos positivos probable en
siembra de: en siembra siembra de:
de:
10 1 0,1 5-10 5-10 10 1 0,1 5-10 5-10 10 1 0,1 5-10 5-10
ml 1- 1 5- 1 ml 1- 1 5- 1 ml 1- 1 5- 1
1- 0,1 5- 0,1 1- 0,1 5- 0,1 1- 0,1 5- 0,1

0 0 0 ∙∙∙∙∙ ∙∙∙∙∙ 0 3 4 ∙∙∙∙∙ 13 1 1 2 ∙∙∙∙∙ 8,1

0 0 1 2,0 1,8 0 3 5 ∙∙∙∙∙ 15 1 1 3 ∙∙∙∙∙ 10
0 0 2 ∙∙∙∙∙ 3,6 0 4 0 ∙∙∙∙∙ 7,5 1 1 4 ∙∙∙∙∙ 12
0 0 3 ∙∙∙∙∙ 5,4 0 4 1 ∙∙∙∙∙ 9,4 1 1 5 ∙∙∙∙∙ 14
0 0 4 ∙∙∙∙∙ 7,2 0 4 2 ∙∙∙∙∙ 11 1 2 0 ∙∙∙∙∙ 6,1
0 0 5 ∙∙∙∙∙ 9,0 0 4 3 ∙∙∙∙∙ 13 1 2 1 ∙∙∙∙∙ 8,2
0 1 0 2,0 1,8 0 4 4 ∙∙∙∙∙ 15 1 2 2 ∙∙∙∙∙ 10
0 1 1 4,0 3,6 0 4 5 ∙∙∙∙∙ 17 1 2 3 ∙∙∙∙∙ 12
0 1 2 ∙∙∙∙∙ 5,5 0 5 0 ∙∙∙∙∙ 9,4 1 2 4 ∙∙∙∙∙ 15
0 1 3 ∙∙∙∙∙ 7,3 0 5 1 ∙∙∙∙∙ 11 1 2 5 ∙∙∙∙∙ 17
0 1 4 ∙∙∙∙∙ 9,1 0 5 2 ∙∙∙∙∙ 13 1 3 0 ∙∙∙∙∙ 8,3
0 1 5 ∙∙∙∙∙ 11 0 5 3 ∙∙∙∙∙ 15 1 3 1 ∙∙∙∙∙ 10
0 2 0 ∙∙∙∙∙ 3,7 0 5 4 ∙∙∙∙∙ 17 1 3 2 ∙∙∙∙∙ 13
0 2 1 ∙∙∙∙∙ 5,5 0 5 5 ∙∙∙∙∙ 19 1 3 3 ∙∙∙∙∙ 15
0 2 2 ∙∙∙∙∙ 7,4 1 0 0 2,2 2,0 1 3 4 ∙∙∙∙∙ 17
0 2 3 ∙∙∙∙∙ 9,2 1 0 1 4,4 4,0 1 3 5 ∙∙∙∙∙ 19
0, 2 4 ∙∙∙∙∙ 11 1 0 2 ∙∙∙∙∙ 6,0 1 4 0 ∙∙∙∙∙ 11
0 2 5 ∙∙∙∙∙ 13 1 0 3 ∙∙∙∙∙ 8,0 1 4 1 ∙∙∙∙∙ 13
0 3 0 ∙∙∙∙∙ 5,6 1 0 4 ∙∙∙∙∙ 10 1 4 2 ∙∙∙∙∙ 15
0 3 1 ∙∙∙∙∙ 7,4 1 0 5 ∙∙∙∙∙ 12 1 4 3 ∙∙∙∙∙ 17
0 3 2 ∙∙∙∙∙ 9,3 1 1 0 4,4 4,0 1 4 4 ∙∙∙∙∙ 19
0 3 3 ∙∙∙∙∙ 11 1 1 1 6,7 6,1 1 4 5 ∙∙∙∙∙ 22

(continúa)
11
NCh1620/1
Anexo A
(continuación)

Tabla 2 - Tabla para el cálculo del Número Más Probable (NMP)

Número de Número más Número de Números más Número de Número más

tubos positivos probable en tubos positivos probables en tubos positivos probable en
siembra de: siembra de: siembra de:
5-10 5-10 5-10 5-10 5-10 5-10
10 1 0,1 1- 1 5- 1 10 1 0,1 1- 1 5- 1 10 1 0,1 1- 1 5- 1
ml 1- 0,1 5- 0,1 ml 1- 0,1 5- 0,1 ml 1- 0,1 5- 0,1

1 5 0 ∙∙∙∙∙ 13 2 3 0 ∙∙∙∙∙ 12 3 1 0 12 11
1 5 1 ∙∙∙∙∙ 15 2 3 1 ∙∙∙∙∙ 14 3 1 1 16 14
1 5 2 ∙∙∙∙∙ 17 2 3 2 ∙∙∙∙∙ 17 3 1 2 ∙∙∙∙∙ 17
1 5 3 ∙∙∙∙∙ 19 2 3 3 ∙∙∙∙∙ 20 3 1 3 ∙∙∙∙∙ 20
1 5 4 ∙∙∙∙∙ 22 2 3 4 ∙∙∙∙∙ 22 3 1 4 ∙∙∙∙∙ 23
1 5 5 ∙∙∙∙∙ 24 2 3 5 ∙∙∙∙∙ 25 3 1 5 ∙∙∙∙∙ 27
2 0 0 5,0 4,5 2 4 0 ∙∙∙∙∙ 15 3 2 0 ∙∙∙∙∙ 14
2 0 1 7,5 6,8 2 4 1 ∙∙∙∙∙ 17 3 2 1 ∙∙∙∙∙ 17
2 0 2 ∙∙∙∙∙ 9,1 2 4 2 ∙∙∙∙∙ 20 3 2 2 ∙∙∙∙∙ 20
2 0 3 ∙∙∙∙∙ 12 2 4 3 ∙∙∙∙∙ 23 3 2 3 ∙∙∙∙∙ 24
2 0 4 ∙∙∙∙∙ 14 2 4 4 ∙∙∙∙∙ 25 3 2 4 ∙∙∙∙∙ 27
2 0 5 ∙∙∙∙∙ 16 2 4 5 ∙∙∙∙∙ 28 3 2 5 ∙∙∙∙∙ 31
2 1 0 7,6 6,8 2 5 0 ∙∙∙∙∙ 17 3 3 0 ∙∙∙∙∙ 17
2 1 1 10 9,2 2 5 1 ∙∙∙∙∙ 20 3 3 1 ∙∙∙∙∙ 21
2 1 2 ∙∙∙∙∙ 12 2 5 2 ∙∙∙∙∙ 23 3 3 2 ∙∙∙∙∙ 24
2 1 3 ∙∙∙∙∙ 14 2 5 3 ∙∙∙∙∙ 26 3 3 3 ∙∙∙∙∙ 28
2 1 4 ∙∙∙∙∙ 17 2 5 4 ∙∙∙∙∙ 29 3 3 4 ∙∙∙∙∙ 31
2 1 5 ∙∙∙∙∙ 19 2 5 5 ∙∙∙∙∙ 32 3 3 5 ∙∙∙∙∙ 35
2 2 0 ∙∙∙∙∙ 9,3 3 0 0 8,8 7,8 3 4 0 ∙∙∙∙∙ 21
2 2 1 ∙∙∙∙∙ 12 3 0 1 12 11 3 4 1 ∙∙∙∙∙ 24
2 2 2 ∙∙∙∙∙ 14 3 0 2 ∙∙∙∙∙ 13 3 4 2 ∙∙∙∙∙ 28
2 2 3 ∙∙∙∙∙ 17 3 0 3 ∙∙∙∙∙ 16 3 4 3 ∙∙∙∙∙ 32
2 2 4 ∙∙∙∙∙ 19 3 0 4 ∙∙∙∙∙ 20 3 4 4 ∙∙∙∙∙ 36
2 2 5 ∙∙∙∙∙ 22 3 0 5 ∙∙∙∙∙ 23 3 4 5 ∙∙∙∙∙ 40

(continua)

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 NCh1620/1
Anexo A
(conclusión)

Tabla 2 - Tabla para el cálculo del Número Más Probable (NMP)

Número de Número más Número de Número más Número de Número más

tubos positivos probable en tubos positivos probable en tubos positivos probable en
siembra de: siembre de: siembre de:
5-10 5-10 5-10 5-10 5-10 5-10
10 1 0,1 1- 1 5- 1 10 1 0,1 1- 1 5- 1 10 1 0,1 1- 1 5- 1
ml 1- 0,1 5- 0,1 ml 1- 0,1 5- 0,1 ml 1- 0,1 5- 0,1

3 5 0 ∙∙∙∙∙ 25 4 3 2 ∙∙∙∙∙ 39 5 1 4 ∙∙∙∙∙ 110

3 5 1 ∙∙∙∙∙ 29 4 3 3 ∙∙∙∙∙ 45 5 1 5 ∙∙∙∙∙ 130
3 5 2 ∙∙∙∙∙ 32 4 3 4 ∙∙∙∙∙ 52 5 2 0 ∙∙∙∙∙ 49
3 5 3 ∙∙∙∙∙ 37 4 3 5 ∙∙∙∙∙ 59 5 2 1 ∙∙∙∙∙ 70
3 5 4 ∙∙∙∙∙ 41 4 4 0 ∙∙∙∙∙ 34 5 2 2 ∙∙∙∙∙ 95
3 5 5 ∙∙∙∙∙ 45 4 4 1 ∙∙∙∙∙ 40 5 2 3 ∙∙∙∙∙ 120
4 0 0 15 13 4 4 2 ∙∙∙∙∙ 47 5 2 4 ∙∙∙∙∙ 150
4 0 1 20 17 4 4 3 ∙∙∙∙∙ 54 5 2 5 ∙∙∙∙∙ 180
4 0 2 ∙∙∙∙∙ 21 4 4 4 ∙∙∙∙∙ 62 5 3 0 ∙∙∙∙∙ 79
4 0 3 ∙∙∙∙∙ 25 4 4 5 ∙∙∙∙∙ 69 5 3 1 ∙∙∙∙∙ 110
4 0 4 ∙∙∙∙∙ 30 4 5 0 ∙∙∙∙∙ 41 5 3 2 ∙∙∙∙∙ 140
4 0 5 ∙∙∙∙∙ 36 4 5 1 ∙∙∙∙∙ 48 5 3 3 ∙∙∙∙∙ 180
4 1 0 21 17 4 5 2 ∙∙∙∙∙ 56 5 3 4 ∙∙∙∙∙ 210
4 1 1 27 21 4 5 3 ∙∙∙∙∙ 64 5 3 5 ∙∙∙∙∙ 250
4 1 2 ∙∙∙∙∙ 26 4 5 4 ∙∙∙∙∙ 72 5 4 0 ∙∙∙∙∙ 130
4 1 3 ∙∙∙∙∙ 31 4 5 5 ∙∙∙∙∙ 81 5 4 1 ∙∙∙∙∙ 170
4 1 4 ∙∙∙∙∙ 36 5 0 0 38 23 5 4 2 ∙∙∙∙∙ 22
4 1 5 ∙∙∙∙∙ 42 5 0 1 96 31 5 4 3 ∙∙∙∙∙ 280
4 2 0 ∙∙∙∙∙ 22 5 0 2 ∙∙∙∙∙ 43 5 4 4 ∙∙∙∙∙ 350
4 2 1 ∙∙∙∙∙ 26 5 0 3 ∙∙∙∙∙ 58 5 4 5 ∙∙∙∙∙ 430
4 2 2 ∙∙∙∙∙ 32 5 0 4 ∙∙∙∙∙ 76 5 5 0 ∙∙∙∙∙ 240
4 2 3 ∙∙∙∙∙ 38 5 0 5 ∙∙∙∙∙ 95 5 5 1 ∙∙∙∙∙ 350
4 2 4 ∙∙∙∙∙ 44 5 1 0 240 33 5 5 2 ∙∙∙∙∙ 540
4 2 5 ∙∙∙∙∙ 50 5 1 1 ∙∙∙∙∙ 46 5 5 3 ∙∙∙∙∙ 920
4 3 0 ∙∙∙∙∙ 27 5 1 2 ∙∙∙∙∙ 64 5 5 4 ∙∙∙∙∙ 1 600
4 3 1 ∙∙∙∙∙ 33 5 1 3 ∙∙∙∙∙ 84

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NCh1620/1
Anexo B
(Informativo)

Cálculo del Número Más Probable (NMP) de bacterias coliformes por 100 ml de
agua.

B.1 De una muestra de agua potable clorada se inoculan:

5 tubos con 10 ml de muestra;

1 tubo con 1 ml de muestra;

1 tubo con 0,1 ml de muestra.

B.2 Los resultados obtenidos en el ensayo confirmativo son los siguientes:

3 tubos positivos en la siembra de 10 ml;

1 tubo positivo en la siembra de 1 ml;

0 tubo positivo en la siembra de 0,1 ml.

B.3 El código correspondiente de esta muestra es: 3-1-0.

B.4 En la tabla 2 (anexo A), el código 3-1-0 corresponde a un valor de 12 para la

siembra de 5 tubos con 10 ml, 1 tubo con 1 ml y 1 tubo con 0,1 ml.

B.5 Expresar el resultado como:

NMP de bacterias coliformes/100 ml = 12.

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NCh1620/1

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NCh1620/1

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NORMA CHILENA OFICIAL NCh 1620/1.Of84

INSTITUTO NACIONAL DE NORMALIZACION ! INN-CHILE

Agua potable - Determinación de bacterias coliformes

totales - Parte 1: Método de los tubos múltiples (NMP)

Drinking water - Determination of total coliform bacteria - Part 1: Multiple-tube

fermentation technique (MPN)

Primera edición : 1984

Reimpresión : 1999

Descriptores: agua potable, análisis químico, análisis microbiológico, determinación de

contenido, métodos de conteo de bacterias, bacterias coliformes
CIN 13.060.40; 71.060
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