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UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO

FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA


LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA GENERAL 1
1651

Practica 9.- Patogenicidad y


Virulencia
Equipo 6
Asesor del equipo de trabajo:

Q.F.B. María Galia Martínez Flores

Integrantes del Equipo

Ballesteros Díaz Marco A.


Espinoza Díaz Noemí
Mejía Trevilla Adriana
Rojas Morales Alberto
13/09/2010

El alumno estudiara y determinara experimentalmente los mecanismos de Patogenicidad y


virulencia de las cepas del laboratorio de microbiología general.
1
Practica 9.- Patogenicidad y Virulencia 1651 EQ 6

Resultados:

Prueba de la Catalasa

Microorganismo Catalasa
Staphylococcus aureus Positivo
Streptococcus pyogenes negativo
Bacillus subtilis Positivo
Corynebacterium Positivo
diphtheriae
Escherichia coli Positivo
Klebsiella pneumoniae Positivo
Shigella flexneri Positivo
Salmonella typhi Positivo
Pseudomonas aeruginosa Positivo
Proteus vulgaris Positivo

Prueba de la Coagulasa:

microorganismo coagulasa
Staphylococcus aureus Positivo
Streptococcus pyogenes negativo

S. pyogenes

S. aureus

Tinción de Capsula:

Tinción de capsula
Klebsiella pneumoniae
bacilo
Presenta capsula

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Laboratorio de Microbiología General 1
Practica 9.- Patogenicidad y Virulencia 1651 EQ 6

Prueba de la Hemolisis

Medio Agar sangre Agar sangre


M.O. S. aureus S.pyogenes
Tamaño <1 mm <1 mm
Forma puntiformes puntiformes
Color Blanco Blanco S. aureus
Borde Entero Entero
Elevación Convexa Convexa
Superficie Lisa Lisa
Luz trasmitida Opaca Opaca
Luz reflejada Mate Brillante Hemolisis Alfa α

Otros
Pigmentación Ligeramente
verde
Consistencia No aplica No aplica
Hemolisis Alfa Beta
Fermentación No aplica No aplica

S.pyogenes

Hemolisis Beta β

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Laboratorio de Microbiología General 1
Practica 9.- Patogenicidad y Virulencia
Equipo 6
Rojas Morales Alberto

ANALISI DE RESULTADOS:

Prueba de la Catalasa

Microorganismo Catalasa Bacterias que viven en ambientes aerobios


Staphylococcus aureus Positivo Aerobios y Anaerobios requieren de catalasa (se encuentra en la
facultativos mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias
Streptococcus pyogenes negativo Anaerobio facultativo facultativas que contienen citocromo) para
Bacillus subtilis Positivo Anaerobio facultativo convertir el peróxido de hidrógeno (Si se deja
Corynebacterium Positivo Aerobia acumular ,éste es letal para las células
bacterianas) en agua y oxígeno molecular.
diphtheriae
Escherichia coli Positivo Anaerobio facultativo
También los neutrofilos y macrófagos utilizan
Klebsiella pneumoniae Positivo Anaerobio facultativo el peróxido para destruir a los
Shigella flexneri Positivo Anaerobio facultativo microorganismos patógenos invasores, por lo
Salmonella typhi Positivo Anaerobio facultativo que también le sirve a las bacterias la catalasa
Pseudomonas aeruginosa Positivo Aerobia como factor de virulencia .
Proteus vulgaris Positivo Anaerobio facultativo

Ilustración del crecimiento de bacterias con la


variación de respuestas al oxígeno. Cada punto
representa una colonia bacteriana individual
dentro del agar o en su superficie.
El contenido de oxígeno del medio disminuye con
la profundidad hasta que el medio llega a ser
anaerobio en la parte inferior del tubo. Se muestra
la presencia y/o ausencia de las enzimas
superóxido dismutasa (SOD) y catalasa para cada
necesidad de oxigeno

Prueba de la Coagulasa:

microorganismo coagulasa Coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular


Staphylococcus aureus Positivo bacteriana) reacciona con un factor activador
Streptococcus pyogenes negativo presente en el plasma sanguíneo similar a la
protrombina, dando lugar a un complejo análogo a
la trombina que reacciona con fibrinógeno
formando un coágulo de fibrina en ausencia de
Ca2+. 1
La fibrina se puede también depositar en la
superficie de los estafilococos, para protegerlos de
la destrucción por las células fagocitarias

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Equipo 6
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Tinción de Capsula

Klebsiella pneumoniae

(En la practica 7.- morfología microscópica (tinciones) se abordo con más detalle el tema de capsula
bacteriana)

La cápsula bacteriana es una capa de material viscoso o


mucoide. El tamaño de estas cápsulas está influenciado por el
medio en el que crece la bacteria. En algunos casos el grosor
de la cápsula es sólo una fracción del diámetro de la célula, en
otros casos la cápsula es mucho mayor que la célula. A las
bacterias les proporcionan una cubierta protectora y además
sirven de reservorio de alimento almacenado. Tienen
Propiedad Antifagocitaria y brinda Protección frente a Fagos

Prueba de la Hemolisis

La hemolisina es una proteína de bajo peso molecular que produce lisis de los eritrocitos, leucocitos y
plaquetas mediante la producción de poros en la Medio Agar sangre Agar sangre
membrana citoplasmática. M.O. S. aureus S.pyogenes
Tamaño <1 mm <1 mm
La estreptolisina S es una hemolisina estable en
presencia de oxígeno, no inmunogénica y ligada a la Forma puntiformes puntiformes
célula que puede lisar hematíes, leucocitos y Color Blanco Blanco
plaquetas. La estreptolisina S puede estimular Borde Entero Entero
también la liberación de los contenidos lisosómicos
Elevación Convexa Convexa
después de ser englobada por este orgánulo y
provoca la subsiguiente destrucción de la célula Superficie Lisa Lisa
fagocítica. La estreptolisina S se produce en Luz trasmitida Opaca Opaca
presencia de suero y es la responsable de la β- Luz reflejada Mate Brillante
hemólisis característica que se observa en el medio
de agar sangre.
Otros
La estreptolisina O es una hemolisina lábil al Pigmentación Ligeramente
oxígeno, capaz de lisar hematíes, leucocitos, verde
plaquetas y células cultivadas. Se forman con Consistencia No aplica No aplica
facilidad anticuerpos frente a la estreptolisina O, una Hemolisis Alfa Beta
característica que la distingue de la estreptolisina S, y Fermentación No aplica No aplica
son útiles para demostrar una infección reciente por
estreptococos.

La hemolisina α ataca las membranas de los eritrocitos, perforándolas y dejándolas porosas permitiendo la 2
salida de iones potasio y la entrada de iones sodio y calcio lo que provoca la tumefacción y lisis de la célula
además de la reducción de la hemoglobina, a la globina y al grupo Hemo que así vez se reduce en hierro y

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Equipo 6
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biliverdina , lo que da origen a un halo verde alrededor de las colonias, siendo responsable así del origen de
la hemolisis alfa

Hemolisis alfa Hemolisis beta


Aunque no se pueden a se observa ligeramente
preciar a simple vista los la hemolisis completa de
halos de hemolisis eritrocitos alrededor de
parcial se puede las colonias (zonas
observar un ligero tono transparentes)
verde sobre las colonias
debido a la biliverdina

Conclusión:

Las enfermedades infecciosas tienen su origen en diferentes agentes como virus, bacterias, hongos, etc.; los
mecanismos por los que se transmiten y su objetico(multiplicarse)son los mismos. Por esta misma razón son
conocidos como microorganismos patógenos. Cualquier bacteria puede ser patógena aunque cabe destacar
que no todos los microorganismos que colonizan una superficie corporal son capaces de invadir y dañar al
hospedero. Así surgen dos términos importantes:
•Patogenicidad: Capacidad de un agente infeccioso de producir enfermedad en un huésped susceptible.
•Virulencia: Grado de Patogenicidad de una agente infeccioso Para que ocurra la infección es necesario que
pasen las siguientes fases :
1.Entrada del microorganismo al hospedero, por diversas vías de entrada
2.Adhesión a células, lo que dificulta que los patógenos sean eliminados
3.Propagación en el hospedero, facilitada por factores de invasividad
4.Adquisición de nutrientes
5.Lesión, mediada por factores del microorganismo o por la respuesta del hospedero
6.También contempla las estrategias que emplean las bacterias para evadir la respuesta inmune, como el
cambio de fase y la variación antigénica
Algunos factores de Patogenicidad y virulencia de los principales microorganismos analizados en esta
práctica (Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes)

Staphylococcus
ENZIMAS TOXINAS
 Coagulasa  Citolisinas(α,β,δ,γ,leucocidinas)
 Catalasa  Exfoliativa (epidermolítica)
 Hialuronidasa  Síndrome Shock tóxico
 Fibrinolisina  Enterotoxinas (A-E)
 Lipasa 3
 Nucleasa
 Penicilasa

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Streptococcus
ENZIMAS TOXINAS
 Estreptoquinasa  Estreptolisina O y S
 Hialuronidasa  Toxina Piogénica
 Estreptodornasa

Con respecto a la catalasa, los microorganismos que requieren la presencia de oxigeno para llevar a cabo sus
reacciones metabólicas es decir como aceptor final de electrones, invariablemente se encontraran, con
productos tóxicos derivados del oxigeno, como radicales superóxido y peróxido cuya acumulación es fatal en
estos microorganismos, sin mencionar además de que neutrofilos y macrófagos tienen estas mismas
sustancias toxicas para lisar y destruir a los microorganismos patógenos.

por lo que es de vital importancia que las bacterias aerobias y anaerobias facultativas dispongan de las
enzimas necesarias para eliminar estas sustancias nocivas; como la catalasa , que a la vez resulta
beneficiosa porque evita que diversos grupos de glóbulos blancos la fagociten y lisen, siendo este un factor
de virulencia.

Precauciones: Si se utilizan para esta prueba cultivos procedentes de Agar sangre, se debe tener la
precaución de no retirar algo de Agar con el asa al retirar la colonia ya que los eritrocitos del medio
contienen catalasa y su presencia da un falso resultado positivo

En cuanto a la coagulasa se sabe que el hospedador genera coágulos de fibrina en una región invadida por
microorganismos y rodea al microorganismo para así evitar su propagación por el cuerpo; pero algunos
microorganismos son capaces de generar enzimas fibrinoliticas para disolver los coágulos, como por ejemplo
Streptococcus pyogenes que produce estreptoquinasa.
Por otra parte hay microorganismos que producen enzimas que estimulan la coagulación de la fibrina
(coagulasa) , haciendo que se deposite sobre ellos fibrina protegiéndolos del ataque de las células del
hospedador uno ejemplo de esto es Staphylococcus aureus. 4

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Coagulasa Coagulasa libre Coagulasa ligada

Como actúa: Reacciona con un factor del plasma Convierte el fibrinógeno en fibrina
para convertir de manera indirecta de manera directa sin la
el fibrinógeno en fibrina. participación de los factores del
plasma
Como se realiza la prueba Se hace con plasma concentrado, el Se hace en un porta objetos, en el
cual se coloca en un tubo de ensaye, cual se coloca una gotita de plasma y
donde después este plasma se una asada de la bacteria a analizar,
inocula con una asada de la bacteria haciendo una disolución y se
a analizar; de ahí se procede a observa inmediatamente en el
incubar el tubo por 2 horas a 37°C. Y microscopio.
posteriormente se saca y se observa
si hay o no presencia de coagulo

En cuanto a la hemolisis para esta práctica:

Tipo de hemolisis Microorganismo y Factores que la ocasionan


observación
Hemolisis α Staphylococcus Se caracteriza por estar
aureus presente la hemolisina alfa
Lisis parcial de los que provoca la reducción
eritrocitos; existe un del grupo Hemo por salida
halo de verdoso a masiva de potasio del
pardusco alrededor interior de los eritrocitos y
de las colonias finalmente su lisis
Hemolisis β Streptococcus Se caracteriza por hacer
pyogenes uso de de las hemolisinas:
Lisis completa de los estreptolisina S y O.
eritrocitos; existe un Causantes de la lisis de
halo claro alrededor eritrocitos, leucocitos y
de las colonias membranas celulares.
las hemolisinas constituyen un factor tanto de Patogenicidad como virulencia para muchas cepas de
microorganismos, además de que es un carácter distintivo y que ayuda a la identificación de las cepas. cabe
destacar que las hemolisinas no solo atacan la membrana de los eritrocitos sino cualquier membrana por lo
que fomenta aun más su virulencia.

Para concluir finalmente los factores de Patogenicidad y virulencia ya sean inherentes en la bacterias o que
les hayan sido transmitidos por plásmidos o bacteriófagos; permiten la identificación de bacteria y grupos
de microorganismos así mismo representan un foco de alarma ante la capacidad que tienen estos
microorganismos de causar enfermedades que lleven un alto riego para la salud o la vida, hoy en día las
terapias con antibióticos han reducido a sobremanera el índice de mortalidad que tenían los
microorganismos en el ser humano aun así, personas con sistemas inmunológicos débiles o comprometidos 5
pueden verse perjudicadas por esta clase de enzimas, toxinas y diversos factores que tienen las bacterias
parta garantizar su supervivencia. El estudio de esta clase mecanismos de los microorganismos permite su
identificación y la búsqueda rápida de soluciones y tratamientos adecuados para cada tipo de enfermedad.

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Referencias:

 Madigan, M., 2004. Brock biología de los microorganismos10º ed., México: Prentice Hall
Hispanoamericana.
 Arellano, González , et al., 2005. manual de prácticas de laboratorio de : microbiología general 1 ,
México: Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM
 PATOGENICIDAD BACTERIANA. Available at:
http://www.facmed.unam.mx/deptos/microbiologia/bacteriologia/patogenicidad.php[Accedido
Septiembre 16, 2009].
 Patrick R. Murray, Microbiología médica, Versión en español de la 5.a edición de la obra en inglés
Medical Microbiology, Copyright © MMV Elsevier Inc., an Elsevier Imprint
 Benson H. Microbiological applications : laboratory manual in general microbiology : complete
version. 8º ed. Boston [etc.]: McGraw-Hill; 2002
 Lansing M. Prescott, Microbiology,5th Edition, ©2002 / Hardcover with CDROM

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