CUESTIONARIO

1. Fundamento de la prueba de antígenos de superficie

La determinación se basa en la aglutinación directa de los hematíes con antisueros comerciales anti-A anti-
B y anti- A, B (grupo sérico).

El grupo hemático y sérico se deben realizar simultáneamente debido a que son pruebas complementarias
y de esa forma la una verifica los resultados de la otra

En las técnicas de grupos sanguíneos eritrocitarios las reacciones más importantes son las de aglutinación.
Los antígenos situados en la membrana de los hematíes reaccionan con los anticuerpos y el resultado de la
reacción es la formación de grumos de hematíes o aglutinados. Las determinaciones de antígenos
hemáticos y el estudio de anticuerpos en sueros se basan principalmente en la aglutinación de los
hematíes, aunque en ocasiones la unión antígeno/anticuerpo que activa la vía clásica del sistema del
complemento puede ser detectada por una hemolisis in vitro

2. Procedimiento para la práctica de antígenos de superficie

REACTIVOS

 Suero comercial anti-A

 Suero comercial anti- B
 Suero comercial anti-A,B
 Solución salina fisiológica 0,9%

MATERIALES

 Tubos
 Gradillas
 Pipeta Pasteur o de transferencia
 Centrifuga serológica
 Lámpara

MUESTRA

 La sangre anticoagulada con EDTA, heparina, ACD, CPD, CPDA-1 o glóbulos rojos lavados y
suspendidos en solución fisiológica
 La sangre coagulada puede utilizarse siempre y cuando del coagulo logren desprenderse suficientes
hematíes, los cuales serán lavados y suspendidos en SSF

PROCEDIMIENTO
 Lave los glóbulos rojos a tipificar dos o tres veces con solución fisiológica 9% o agua destilada y
prepare una suspensión al 2-5%
 Para cada muestra marque 4 tubos así: anti-A, anti- B, anti-AB y SSF.
  Añada a cada uno de los tubos una gota de los hematíes lavados y suspendidos al 2-5%
 Añada a los tubos marcados anti-A, anti- B y SSF una gota de los reactivos respectivos
 Mezcle suavemente y centrifugar a 3400 rpm por 15-30 segundos
 Resuspenda el botón de células agitando suavemente cada tubo y examine la presencia o ausencia
de aglutinación contra un fondo bien iluminado
Anote los resultados observados
 Si no observa aglutinación en ningún tubo, añada una gota de reactivo anti-A,B en su respectivo
tubo, mezcle y centrifugue
 Resuspenda el boton de células agitando suavemente el tubo y examine la presencia o ausencia de
aglutinación contra un fondo bien iluminado
Anote los resultados observados

NOTA: generalmente la aglutinación observada es fuerte

Cuando se presenta discrepancias entre la prueba hemática y la sérica es conveniente incubar los tubos a
temperatura ambiente durante 15-60 minutos. Esto a fin de evidenciar la aglutinación cuando se está
frente a subgrupos débiles de A o de B
El tubo que contiene SSF y células sirve de control y no debe presentar aglutinación en ningún caso

INTERPRETACION

La presencia de aglutinación en los pozos diferente al control (SSF) indica que el antígeno correspondiente
se encuentra presente en la membrana del hematíe

3. Explique la clasificación de Landsteiner

Karl Lansteiner fue un patólogo y biólogo austriaco, conocido por haber descubierto y tipificado el sistema
ABO

El sistema ABO comprende dos partes: antígenos presentes en los eritrocitos y los correspondientes
anticuerpos presentes en el suero. Bajo condiciones normales, todos los individuos poseen los anticuerpos
contra los correspondientes antígenos Ay B, que no están presentes en sus propias células. De esta manera,
se establece una interrelación constante y predecible entre los antígenos y anticuerpos del sistema ABO, se
realizan las pruebas celulares para evidenciar los antígenos y pruebas séricas o grupo inverso para
determinar los anticuerpos. Tales anticuerpos son principalmente de la clase IgM, por lo que son altamente
aglutinantes y fijadores de complemento.

Sistema Rh (factores RHESUS). Descubierto en 1940 Es el segundo sistema de grupos sanguíneos en la

transfusión de sangre humana con 50 antígenos actualmente. Las personas con Rh negativas forman
anticuerpos contra el factor Rh, si están expuestas a sangre Rh positiva. El factor RH está constituido por un
complejo de 6 antígenos fundamentales, formando 3 pares de genes alelos: Cc, Dd, Ee. El antígeno de
mayor poder de sensibilizante es el D, le siguen en importancia en e y el E.
 4. Que son los antígenos mayores de la sangre, cuales son los menores, con que otro nombre se los
conoce?

Antígenos mayores: conocidos como sistema ABO Y RHESUS son aquellos grupos inmunológicamente
poderosos

Los anticuerpo de ABO se presentan de manera regular, aunque su presencia puede ser sucitada por
histocompatibilidad materna o del tipo transfusional

Sus antígenos no solo se encuentran sobre los glóbulos rojos sino que se encuentran en la parte de los
tejidos corporales, porque se los clasifica como antígenos de histocompatibilidad en la hora de hacer
trasplantes o injertos.

Antígenos menores: son grupos inmunológicamente débiles, aunque también pueden provocar reacciones
inmunológicas severas son:

 MNSs
 SISTEMA DE DUFFY
 SISTEMA DE KELL
 SISTEMA DE XG, LUTHERMAN KIDD, ETC.

5. Antígenos de Lewis kell duffi mns

ANTIGENOS DE LEWIS
El antígeno de Lewis a diferencia de los demás antígenos de grupos conocidos, se hereda con carácter
recesivo, el segundo, cuando Grubb encontró que las personas Lewis positivas, esto es Le(a+) no son
secretores en la saliva de las substancias del grupo ABO
Es un sistema basado en los genes del cromosoma 19 y 19q, ambos genes se expresan en el epitelio
glandular y tiene alelos dominantes que codifica para enzimas con flucosiltranferasa actividad y recesiva
alelos que no son funcionales

SISTEMA KELL
 Descubierto en 1946.
 Fue el primer grupo sanguíneo detectado por la prueba de Coombs Indirecta.
 Presenta 21 antígenos los principales son K, k, Kpa, Kpb, Jsa y Jsb.
 Son codificados por el gen KEL y Kx.
 Kx codifica para la proteína del mismo nombre.
 K y k son un binomio antitético.
 El fenotipo Cellano se refiere a la expresión de k.
 El fenotipo McLeod se presenta por la ausencia del antígeno Kx.
 El fenotipo más común es k (90%).
 Después de los anticuerpos ABO y Rh, los anti-K son los más comunes en el banco de sangre,
generalmente son IgG, principalmente (IgG1).
 Anti-K está relacionado con accidentes trasfusionales.
SISTEMA DUFFY
 Presenta dos antígenos: Fya y Fyb.
 Son proteínas glicosiladas de 35-66 KD, similares al sistema MN-SPG y a la proteína banda 3.
 Pueden ser detectados en células fetales de 7 semanas de gestación.
 Son moderadamente inmunogénicos.
 El fenotipo Fy(a+b+) está presente en 49% de la población blanca, el fenotipo Fy(a+b-) en el
90.8% de la población china y Fy(a-b-) en el 68% de la población negra.
 Estos antígenos están asociados los receptores presentes en la infección por malaria: el
fenotipo Fy(a-b-) es decir, la ausencia de Fy, lo convierte en resistente a la malaria por
Plasmodium vivax.
 Se producen anti-Fya (IgG1), que están involucrados en accidentes transfusionales.
 Se detectan usando la prueba de Coombs indirecta.
 El tipo de herencia es mendeliana codominante.

SISTEMA KIDD
 Presenta principalmente dos antígenos: Jka y Jkb, descubiertos en 1951 y 1953 respectivamente.
 Son proteínas asociadas al canal de agua-urea presente en los hematiés
 Son moderadamente inmunogénicos y pueden ser detectados desde el primer trimestre de
gestación.
 El fenotipo Jk(a+b-) está presente en 57% de la población blanca, Jk(a+b+) en 50% de la población
asiática.
 El fenotipo Jk(a-b-) es muy raro.
 Se producen anticuerpos de clase IgG, principalmente IgG3, se asocian con HDN y HTR.
 Se usa la prueba indirecta de Coombs para identificarlo.

SISTEMA MNS
 Descubierto por Landsteiner y Levine.
 Presenta los antígenos M y N.
 Son glicoproteínas de 36 KD y 131 aa
 El fenotipo más común en raza blanca y negra es M+N+ (50 y 44%).
 Se producen anticuerpos IgM, los cuales pocas veces provocan accidentes trasfusionales, que
pueden ser graves.
 Se utiliza la prueba indirecta de Coombs en solución salina a 22°C para detectarlos.
 El tipo de herencia es mendeliana codominante.
 El antígeno S es una glicoproteína de 20 KD y 72 aa, producto de un gen amorfo, relacionado más
con M que con N.
 Los fenotipos más frecuentes son Ss 44% y ss 45%.
 Se producen anticuerpos IgG, los cuales están asociados con accidentes transfusionales.
 Se utiliza la prueba indirecta de Coombs en solución salina a 37°C para detectarlos.
 6. Grupos RH

El sistema Rh es el segundo sistema de grupos sanguíneos en la transfusión de sangre humana con 50

antígenos actualmente. En 1940, el Dr. Landsteiner descubrió otro grupo de antígenos que se denominaron
factores Rhesus (Factores Rh), porque fueron descubiertos durante unos experimentos con monos Rhesus.

Las personas con factores Rhesus en su sangre se clasifican como Rh Positivas, mientras que aquellas sin los
factores se clasifican Rh Negativas. Es común para los individuos D-negativos no tener ningún anticuerpo
anti-D IgG (inmunoglubilina-G) o IgM, ya que los anticuerpos anti-D no son normalmente producidos por
sensibilización contra sustancias ambientales. Las personas Rh negativas forman anticuerpos contra el
factor Rh, si están expuestas a sangre Rh positivas

7. Que es la prueba de Coombs

La prueba de Coombs (también conocida como prueba de antiglobulina) es un examen de sangre que se
usa en inmunología y hematología. Este análisis puede detectar la presencia de anticuerpos en suero que
reaccionan con antígenos en la superficie de los glóbulos rojos. Hay dos tipos distintos de la prueba de
Coombs: el directo y el indirecto.

Prueba de Coombs Directa

Su principio es determinar la sensibilización de los hematíes en vivo por anticuerpos no aglutinantes (IgG)
y/o fracciones del complemento, específicamente C3d

Los mecanismos por los cuales algunos medicamentos inducen una reacción positiva en la prueba de
antiglobulina directa son variados, entre ellos se cuenta con el depósito de complejos inmunes en el cual el
complejo medicamento-anticuerpo se deposita inespecíficamente sobre la membrana del hematíe
activando el complemento y produciendo hemolisis intra o extravascular

El segundo mecanismo es la absorción del medicamento a la membrana del hematíe, lo cual promueve la
formación de anticuerpo contra el medicamento

La aglutinación de los hematíes por el suero antiglobulina poliespecifico indica que estos fueron
sensibilizados in vivo con anticuerpos no aglutinantes (IgG) y/o fracciones del complemento,
específicamente C3d

El resultado será reportado como Coombs directo o prueba de la antiglobulina directa positiva, indicando el
grado de aglutinación, el cual va desde débil (d) hasta 4+

La no aglutinación indica que no hubo sensibilización in vivo de los hematíes o que a pesar de haberla, la
sensibilidad de la prueba no es suficiente para detectarla

Prueba de Coombs Indirecta

El principio de la prueba de antiglobulina indirecta es determinar la sensibilización in vitro de los hematíes

con moléculas de anticuerpos no aglutinantes (IgG) y/o fracciones del complemento (C3d)
En la prueba los hematíes y el suero que contiene los anticuerpos y el complemento son incubados (tiempo
y temperatura adecuados) bajo la acción de un potenciador que generalmente es albumina, soluciones de
bajo poder iónico o plocationes

Posteriormente los hematíes son lavados para eliminar las inmunoglobulinas y/o el complemento no unido

Paso seguido se hace reaccionar los hematíes con el suero antiglobulina

Si los hematíes son aglutinados por el suero antiglobulina humano, indica que han sido sensibilizados in
vitro por anticuerpos tipo IgG y/o por complemento (C3d)

8. Que es la prueba de Lewis

Se encuentra relacionado de forma directa con los genes H Le y Se de tal forma que el fenotipo de cada
individuo va a venir determinado por la interacción de estos 4 sistemas:

Sistema Lewis se forma por 2 genes alelos denominados Le, que da lugar a la producción de los antígenos
Lea, Leb y Le, que es el gen silente

Estos antígenos son solubles y proceden del plasma, siendo absorbidos de forma posterior por los
hematíes.

Este sistema presenta 4 posibles fenotipos que aparecen expresados con sus frecuencias en la raza blanca

9. Cuando se debe utilizar estas pruebas?

Este tipo de pruebas se utilizan de en las siguiente situaciones

PRUEBA DE LEWIS

Es útil para destruir antígenos, facilitando la tarea de identificación de anticuerpos múltiples

Pueden ser detectados en el plasma (glucoesfingolipidos) y en secreciones salivales (glucoproteinas)

PRUEBA DE COOMBS

La prueba de Coombs directa: Se solicita cuando se sospecha la existencia de una anemia hemolítica y se
quiere conocer su causa. Y en la investigación de las reacciones transfusionales

También se solicita la prueba en recién nacidos hijos de madres con riesgo o si presentan signos de
enfermedad hemolítica del recién nacido, en ausencia de otras causas que expliquen los síntomas, que
pueden ser:
• Palidez
• Ictericia, con aumento de bilirrubina
• Aumento del tamaño del hígado o del bazo
• Hinchazón generalizada
• Dificultad para respirar
También se solicita una prueba de Coombs directa ante signos y síntomas de una reacción transfusional,
como:
• Fiebre, escalofríos
• Dolor de espalda
• Sangre en la orina
La prueba de Coombs indirecta: Se solicita siempre previamente a una transfusión de sangre y también en
todos los embarazos. En mujeres Rh-negativas, se realiza a las 28 semanas previamente a la inyección de la
Ig-Rh, y después del alumbramiento si el bebé es Rh positivo. En mujeres embarazadas Rh-negativas con
anticuerpos de tipo Rh (sensibilizadas frente a antígenos extraños), se solicita a veces la prueba de Coombs
indirecta para conocer de manera aproximada la cantidad de anticuerpo presente.

10. Como se utiliza la centrifuga

Una centrifugadora es una máquina que pone en rotación una muestra para –por fuerza centrífuga–
acelerar la decantación o la sedimentación de sus componentes o fases (generalmente una sólida y una
líquida), según su densidad.

Las centrifugadoras se utilizan para separar los sólidos de los líquidos. Debido a su alta velocidad giratoria,
las centrifugadoras se pueden dañar fácilmente. Sin embargo, hay sólo unas cuantas simples reglas que hay
que recordar al usar una centrifugadora

Paso 1
Crea un contrapeso para el tubo que vas a colocar en la centrifugadora. Es más importante que la masa,
no el volumen de los tubos sea lo más parecido posible. Tubos mal balanceados pueden causar daño
permanente si se usan en la centrifugadora.
Paso 2
Coloca los tubos en lados opuestos de la centrifugadora. Si existen más de dos tubos, sólo los tubos que
coloques en lados opuestos deben de tener la misma masa.
Paso 3
Configura la máquina con los ajustes deseados como las revoluciones por minuto.
Paso 4
Retira los tubos cuidadosamente después de que la centrifugadora se haya detenido por completo. El
objetivo de ser cuidadoso(a) es de no mezclar los sólidos con los líquidos de nuevo.

BIBLIOGRAFIA
Diccionario enciclopédico del laboratorio clínico – James L. Benington
Remington: Farmacia, Volumen 1 – Alfonso R.
El Banco de Sangre – Victor Hugo Dueñas