Biotecnología Ambiental

Introducción
“The Keeling Curve”
Emisiones Globales de CO2
2%

4%
6% Resto

6% 27% China

EUA
Principales participaciones
13% UE globales en la emisión de
Rusia CO2. Fuente: EPA
India (http://goo.gl/cdb0V5)
23% Japón
19%
Canadá
¿Y qué se ha hecho
para contrarrestar
esto?
El Protocolo de Kyoto durante el año
2012 comenzó su segundo
compromiso de reducir emisiones de
gases de efecto invernadero, y tiene
como fecha límite el 2020
¿Qué pasó al final de este protocolo?

Éxitos

Reino Unido Alemania República Checa Ucrania

Fracasos

Canadá Japón España Australia

Acciones
concretas
Biocombustibles

1era generación 2 3 4

A partir de Económicamente
Compiten contra
cultivos vegetales son los más
alimentos
energéticos. importantes
 1 2da generación 3 4

Económicamente le También abarcan

Basados en cultivos
siguen en desechos y residuos
vegetales no
importancia a la 1ra (vegetales en su
alimenticios
generación mayoría)
 1 2 3ra generación 4

Estos organismos
Aún no se producen
Generados por tienen otras
ni consumen a gran
microalgas aplicaciones, pero
escala
energía no
 1 2 3 4ta generación

Son aquellos donde

Básicamente sólo
se aplica la Aparentan ser los
existen en escala de
ingeniería genética más promisorios
laboratorio
para mejorarlos
Tres cuartos de los 27.9 billones de galones
mundiales del mercado de biocombustibles para el
2012 fueron para etanol.
Y ahora:

Bioetanol y Biodiesel
 Bioetanol Biodiesel

Fermentación de azúcares Transesterificación de grasas

Usado como aditivo en Se mezcla con petrodiesel

combustibles (gasolina) (no es aditivo)

A partir de cultivos A partir de cultivos

“azucarados” “grasosos”
 Bioetanol: fermentación

Biodiesel: transesterificación

Triacilglicérido Metanol Glicerol Fatty Acid Methyl Esters

=
Biodiesel
Ingeniería Metabólica
Introducción
El objetivo de la
Mejorar la producción
ingeniería metabólica es
de un metabolito
la modificación directa
formado naturalmente
de los flujos
por un organismo
metabólicos.

Proveer al organismo de Formar metabolitos no

la habilidad de utilizar producidos
sustratos atípicos naturalmente
 Estrategia Descripción Ventajas

Modificar vías
Transferencia del
basándose en
Ingeniería metabólica conocimiento y
información
racional resultados a otras
disponible (enzimas,
especies
reguladores, etc)

Insertar No se requiere
modificaciones conocimiento previo.
Ingeniería evolutiva aleatorias en todo el Descubrimientos
genoma e identificar muy interesantes
clonas potenciales potenciales

Revelación de
Librerías (de Sobreexpresión o estrategias novedosas
sobreexpresión y eliminación aleatoria de mejoramiento.
otras) de varios genes Conocimiento previo
no fundamental

Reprogramar
Características
Ingeniería de expresión de genes al
multigénicas pueden
transcripción modificar factores de
ser atendidas
transcripción
¿Y las desventajas?
P GenA p GenB
GenS1 GenS2

Enzima A Enzima B
S1 S2

Metabolito
A (no muy Metabolito
bueno) B (mejor)

Metabolito
B (mejor)
Lignocelulosa Almidón Azúcares simples

Alcohol de dos tipos:

Azúcares simples
Ingeniería Metabólica: Bioetanol

El que fermenta Como fermenta

Lo que fermenta

Almidón Lignocelulosa Azúcares simples

 Amilosa: Glucosa 1-4

Amilopectina: Glucosa 1-6

Almidón

Enzima
faltante para
degradar
almidón
Azúcares simples

Buscar en la naturaleza
 El héroe: Objetivo:
Saccharomyces Mayor/mejor
cerevisiae producción de etanol
Pretratamientos de
almidón y
lignocelulosa

Enemigos: Compañeros:
A través de genes como XYL1 y
2, es posible fermentar xylosa,
2do azúcar más abundante en
lignocelulosa (Hanh et al, 2007;
Zhang, 2012)

Almidón Lignocelulosa Pichia stipitis Zymomonas mobilis

Insertar genes para expresar Expresión de beta-glucosidasas,

glucoamilasa, sola o en combinación
con alfa-amilasa. (Nevoigt et al, 2008).
Anclar estas enzimas a la membrana
exterior utilizando la proteína Flo1.
(Khaw et al, 2006)
endoglucanasas y celulasas. (Toda
et al, 2005; van Rooyen, 2006).
Ingeniería de proteínas (dominios)
para mejorar la unión a celulosa.
(Gundlapalli et al, 2008)
Lipomyces kononenkoae y Saccharomycopsis fibuligera

Promotor y
P LKA1 T terminador:
Alfa-amilasas (L. kononenkoae ) Fosfoglicerato
cinasa
P LKA2 T

P SFA1 T Alfa-amilasa (S. fibuligera)

P SFG1 T Glucoamilasa (S. fibuligera)

Transformación Análisis de Análisis en Crecimiento en

de levaduras southern placas biorreactores

Crecimiento en Aprovechamiento
Resultado: almidón de un 80%
0.06 g/L de etanol
 Biodiesel: transesterificación

Triacilglicérido Metanol Glicerol Fatty Acid Methyl Esters

=
Biodiesel
 La biofábrica en Saccharomyces

Naturalmente no es gran productora de ácidos grasos, y

menos genera biodiesel
Entonces…

Síntesis de Triacilglicéridos

CH2OH CH2OOCR CH2OOCR CH2OOCR

GPAT LPAT PAP
CHOH CHOH CHOOCR CHOOCR
CH2OPO3H CH2OPO3H CH2OPO3H CH2OH
Glicerol – 3 – fosfato Ácido lisofosfatídico Ácido fosfatídico Diacilglicerol

Acil-CoA • Genes clave en la síntesis de ácidos grasos, sobre-

CH2OOCR
expresados (genes nativos)
CHOOCR
DGAT
CH2OH • Acetil-CoA carboxilasa (ACC1)
• Sintasa de ácidos grasos 1 (FAS1)
Diacilglicerol Triacilglicérido
• Sintasa de ácidos grasos 2 (FAS2)
 Levadura modificada

Contenido 17%-20% Diseño de un

graso
microorganismo capaz
de generar biodiesel a
Ácidos
grasos 400 mg/L partir de azúcares
libres
simples

Biodiesel 5 mg/L
 Ingeniería Metabólica: Biodiesel
Ruta Bioquímica en la producción de Triacilglicéridos

CH2OH CH2OOCR CH2OOCR CH2OOCR

GPAT LPAT PAP
CHOH CHOH CHOOCR CHOOCR
CH2OPO3H CH2OPO3H CH2OPO3H CH2OH
Glicerol – 3 – fosfato Ácido lisofosfatídico Ácido fosfatídico Diacilglicerol

Acil-CoA
CH2OOCR
CHOOCR
DGAT
CH2OH
Diacilglicerol Triacilglicérido
Ingeniería Metabólica: Biodiesel

DGAT 2

Umbelopsis ramanniana Glycine max

Aumento en la cantidad de lípidos en un 1.5% (peso)

$ $17.9 USD por tonelada métrica

$ 70.4 millones de toneladas métricas 2007-2008

$ $1.26 mil millones /

año

Lardizabal et al.. 2008 Plant Physiol

Otros combustibles

Hidratos de metano

(o también clatratos)

“Moléculas cristalinas de agua con gases atrapados en su

interior formados debido a altas presiones y temperaturas”.
 Formación de hidratos en zonas cercanas a placas
continentales.

Gas generado Gas filtrado

por actividad desde la
Zona de alta presión y biológica profundidad
baja temperatura
(2km y 0°C)

Depósito marino
Y llega la controversia (más que los biocombustibles)

Estimación de la reserva explotable con tecnología actual:

1 0 0, 0 0 0, 0 0 0, 0 0 0, 0 0 0, 0 0 0, 0 0 0 L
100 trillones

580 trillones

10 mil billones

Consumo de gas x 1,694,915,254

60% de las reservas actuales de gas natural

Y exactamente…

¿Cómo se pueden usar?

Se inyecta CO2 Se recupera CH4

CH4 CH4 CO2 CO2

¿Y las microalgas?
 Plantas y microalgas para biocombustibles

% de aceite por Litros de aceite / Tierra: m2 año/Kg

biomasa Ha al año biodiesel

40 1070 11

36 5366 2

30 58 700 0.2

70 136 900 0.1

Schenk et al, 2008. Bioenerg. Res.

Basados en microalgas

No compiten por
territorio arable

CO2

[ Eficiente Diferentes
uso de espacio ] biocombustibles

Aún así, se requieren mejoras considerables

para un escalamiento industrial.
 La microalga ideal

Alta productividad con luz intensa

Células grandes con
membranas delgadas

Insensible a altas
concentraciones de oxígeno

Capaz de crecer y producir

lípidos al mismo tiempo

Fácil recuperación
Aceites excretados

Wijffels et al., 2010. Science

Algunos estudios

Tan et al., 1991. Hydrobiol.

Las condiciones del cultivo heterotrófico
pueden cambiar significativamente la
composición y cantidad de lípidos.

Zuppini et al., 2009 J Exp Bot.

El citocromo F está involucrado en la
MCP, así como una participación del
cloroplasto.
Zuppini et al., 2010. Plant Cell Physiol.
Se utilizó a esta alga como modelo de
tolerancia a estrés osmótico y de
temperatura, así como la Muerte Celular
Programada.

Otros trabajos:
Fusión de protoplastos, biomarcador de
contaminación, osmoregulación, etc.

46
 Chlorella saccharophila para biocombustibles

Existe un reporte sobre el uso de esta alga como potencial productor de

lípidos para biocombustibles

Número de células:
Decremento en tratamiento
Contenido de lípidos (% de DBW)

de Deficiencia de Nitrógeno y
en combinación con salinidad.

Contenido de lípidos:
Células Superior a los cultivos
(x106) heterotróficos (55.2% para
Chlorella protothecoides).
Superior a estrés por
Nitrógeno en Neochloris
oleobundans (56%)

Control NaCl ND NaCl/ND

[Salinidad] [Deficiencia
de N] 47
Herrera-Valencia et al., 2011. Curr Microbiol
 Chlorella saccharophila para biocombustibles
Rendimiento de metil ésteres de ácidos grasos (FAMEs) (mg/L)

 Alto rendimiento de FAMEs

sin afectar biomasa
315.53 ± 15.01
 Alta productividad de lípidos

 Perfil de FAMEs deseable (C-

18:1 cis y trans, C-18:0 y C-
16:0) 220.33 ± 7.22

160.13 ± 77.52

103.73 ± 0.11

Control NaCl ND ND/NaCl

48
Transformación de Chlamydomonas reinhardtii

Líneas modificadas de C.
reinhardtii
sobreexpresando CreDGAT

B: Medio completo
C: Medio con DN

Líneas modificadas de C.
reinhardtii
sobreexpresando CreDGAT

49
Deng et al, 2012. Mol. Plant
Economía

Precios esperados Precios reales

Energía
Y ahora

Biorremediación
Introducción

VS
Combustibles fósiles
Combustibles fósiles
Combustibles fósiles: Ingeniería genética
Fitorremediación

Solventes

Fertilizantes

Explosivos

Metales
pesados
Desechos animales

Desechos y
Bacterias contaminantes Algas
variados y
complejos

Aprovechamiento y usos industriales potenciales

En acuacultura
El combustible “casi” perfecto:

Hidrógeno
 1

H
Valencia 1
Peso 1.00797
Hidrógeno Estructura 1s1

El más Forma parte de

Presente en…
abundante en todos los demás
todas partes
el universo combustibles
Usos del Hidrógeno
Combustible

Hidratación de personal
Vehículos espaciales
[Propulsión y
mantenimiento] Agua como desecho
[Reuso y reciclaje]

Recolección

Vehículos domésticos

Hidrogenación Manufactura

Petróleo Grasas saturadas Soldadura Vidrio

[refinación] [estabilización]
Energía
Piezoelectricidad
70