INFORME DE LABORATORIO MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

PRESENTADO POR:

HERNANDO CEPEDA
CÓD.: 74187964
JAIME RICARDO CEPEDA
CÓD.: 74189217
LUIS ARIEL FORERO
CÓDIGO: 74181586
JUAN DAVID BARRERA
CÓD.: 1057578235
IVÁN LIZARAZO
CÓD.:
JESÉ RIVERA
CÓDIGO: 13994156

CURSO: 358010

PRESENTADO A TUTOR DE LABORATORIO

UNIVERSIDAD NACIONAL AVIERTA Y ADISTANCIA – UNAD CEAD DUITAMA

SEPTIEMBRE / 2016
 INTRODUCCION

El estudio de la Microbiología es un campo muy amplio que posee varias áreas de

aplicación en las que se destaca y muy importante la parte ambiental. Cada una de estas
áreas posee un objeto de estudio específico el cual se relaciona con un conjunto de
problemas particulares.

La Microbiología ambiental se destaca por estudiar no solo un microorganismo, sino

consorcios de los mismos que actúan conjuntamente para transformar un contaminante; en
este sentido los métodos de estudio de la Microbiología Ambiental deben contemplar la
diversidad microbiológica de cada sistema en estudio y de las diferentes relaciones que se
establecen entre ellos así como el entorno físico y químico en que ellos se encuentran.

Por otra parte la Microbiología Ambiental considera él diagnóstico de microorganismos

patógenos presentes en aquellos desechos, sistemas o subproductos de estos, que pueden
entrar por diferentes vías en contacto con el humano.

Microbiología Ambiental considera grupos específicos, dependiendo de los sistemas de

tratamiento, los contaminantes que degraden, las condiciones ambientales y los patógenos
de interés. Podemos destacar entre las bacterias los degradadores de la materia orgánica
(heterótrofos), aerobios y anaerobios; oxidadores y reductores de compuestos de azufre;
nitrificantes y denitrificantes; Pseudomonas, Coliformes fecales y otros entéricos. Virus,
protozoos y algas.
PRACTICA 1- BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Los laboratorios de microbiología están regidos por normas de seguridad e higiene

que deben cumplirse a cabalidad para garantizar la protección contra infecciones
de los estudiantes u otro personal que labora en estas instalaciones, así como
garantizar la calidad de las técnicas y la confiabilidad de los resultados.

Los estudiantes deberán identificar las normas de bioseguridad en el laboratorio una

vez ingresen al mismo.

El tutor práctico dará una breve explicación sobre las normas con las que cuentan
en el laboratorio donde se esté desarrollando la práctica.

. NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Debido a las características del trabajo que se realiza en el laboratorio se pueden

provocar accidentes de diversa consideración, como incendios, explosiones,
intoxicaciones y quemaduras. Debe disponerse, por tanto, de elementos de actuación
adecuados para que estos efectos puedan ser controlados.

7.1. Elementos de seguridad

Cuando se inicia el trabajo en un laboratorio, lo primero que se debe hacer es conocer

los datos siguientes:

 Situación de las salidas.

 Situación de los elementos de seguridad: lavaojos, duchas, extintores, mantas

ignífugas y botiquín.
  Situación de los recipientes para residuos.

Normas generales de trabajo e instrucciones sobre la actuación en caso

de accidente.

ORMAS PERSONALES
  Durante la estancia en el laboratorio el alumno deberá llevar
obligatoriamente gafas de seguridad y bata. Las lentes de contacto pueden
resultar muy peligrosas. Los guantes deberán utilizarse durante la manipulación
de productos cáusticos.

Equipos de protección individual

 El pelo largo debe llevarse recogido.

 No se dejaran en el laboratorio mochilas, abrigos, bolsos. Utilizad las taquillas.
 Está terminantemente prohibido fumar o consumir alimentos o bebidas en el
laboratorio.

 No se debe llevar a la boca ningún producto químico, para conocer su sabor, ni

tampoco tocarlos con las manos.
 Hay que lavarse las manos y quitarse la bata antes de salir del laboratorio.

NORMAS PARA LA UTILIZACIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS

 Evitar el contacto de los productos químicos con la piel. No pipetear con la boca,
utilizad embudos para trasvasar líquidos y propipetas.
 Si accidentalmente se vierte un ácido u otro producto químico corrosivo se debe
consultar al profesor (a).
 Para detectar el olor de una sustancia, no se debe colocar la cara directamente
sobre el recipiente: utilizando la mano abierta como pantalla, es posible hacer
llega una pequeña cantidad de vapor hasta la nariz. Los frascos deben cerrarse
inmediatamente después de su uso.
  En la preparación de disoluciones debe agitarse de modo suave y controlado para
evitar salpicaduras.
 Los ácidos requieren un cuidado especial. Manipularlos con precaución y en
la vitrina. Cuando queramos diluirlos, nunca echaremos agua sobre ellos;
siempre al contrario es decir, ácido sobre agua.

 Antes de utilizar cualquier producto, debemos fijarnos en los pictogramas de

seguridad de la etiqueta, con el fin de tomar las medidas preventivas oportunas.
 Cuando se caliente una sustancia en un tubo de ensayo, el extremo abierto del
tubo no debe dirigirse a ninguna persona cercana a fin de evitar accidentes.
Extremar las precauciones en el encendido de los mecheros, manteniendo la
llama encendida durante el tiempo estrictamente necesario.
 En principio, si no se tiene otra información fiable, se debe suponer que todos los
productos químicos son tóxicos, y que todos los disolventes orgánicos son
inflamables debiendo mantenerlos alejados de las llamas.

NORMAS PARA LA UTILIZACIÓN DE INSTRUMENTACIÓN

 Cuando se determinan masas de productos químicos con balanza se utilizará un

recipiente adecuado.
 Se debe mantener perfectamente limpio y seco el lugar dónde se encuentre
situado cualquier instrumento con contactos eléctricos. Leer las instrucciones de
uso de los instrumentos.
 Debe revisarse el material de vidrio para comprobar posibles fisuras,
especialmente antes de su uso a vacío o presión.
 En las calefacciones con manta calefactora se ha de utilizar debajo un gato o
bloque de madera para poder enfriar rápidamente en caso necesario. No hay que
tener nunca en marcha mantas o placas calefactoras sin un recipiente al que
calentar.
 En los montajes de reflujo y destilación hay que añadir el germen de ebullición
(plato poroso) en frio, las juntas esmeriladas deben estar bien ajustadas. No
abandonar nunca el puesto de trabajo mientras se esté llevando a cabo alguna
reacción, destilación o medida.

NORMAS PARA RESIDUOS

 En el laboratorio existen contenedores debidamente etiquetados donde se

introducirán en su caso, los residuos generados.

NORMAS DE EMERGENCIA
  En caso de tener que evacuar el laboratorio, cerrar la llave del gas y salir de
forma ordenada siguiendo en todo momento las instrucciones que haya impartido
el Profesor. Localizar al iniciar la sesión de prácticas los diferentes equipos de
emergencia en el correspondiente laboratorio: D-Duchas y lavaojos, E-Extintores,
M-Mantas ignífugas, B-Botiquín, AB-Absorbente para derrames, AL-Alarma de
emergencia, S-Salida de emergencia y V- Recipiente para el vidrio roto

Normas de trabajo

 Está prohibido fumar, comer y beber en el laboratorio.

 No llenar los tubos de ensayo más de 2 ó 3 cm.
 Calentar los tubos de ensayo de lado, utilizando pinzas y sin dirigir el extremo
abierto hacia otras personas.
 Utilizar siempre gradillas y soportes.
 No llevar material de vidrio ni productos en los bolsillos de la bata.
 No trabajar separado de la mesa de laboratorio.
 No inhalar nunca un producto químico.
 No tocar con las manos ni probar los productos químicos.
 No pipetear con la boca.
 Manipular los productos químicos que puedan desprender vapores tóxicos o
corrosivos en la vitrina de gases.
 No calentar líquidos en recipientes totalmente cerrados. Si el líquido es
inflamable evitar el uso de llamas.
 Asegurar el enfriamiento del material que se ha calentado antes de sujetarlo con
la mano.
 Asegurarse de la desconexión de aparatos, agua y gases al finalizar.
 Al finalizar una tarea, recoger materiales, reactivos y equipos.
 Antes de salir del laboratorio lavarse las manos con jabón y agua abundante.

PRÁCTICA No. 2
RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DE

MICROBIOLOGIA

Realizar una descripción de los materiales que utilizarán en la práctica, esto incluye
equipos y materiales de vidrio. Realizar un boceto de cada uno y una breve
descripción. Dicha charla debe ser dada por el tutor práctico.
PACTICA No 3
MÉTODOS DE SIEMBRA –PARTE A
La inoculación de medios de cultivo para la recuperación, mantenimiento y/o
Aislamiento de microorganismos, es un procedimiento fundamental e importante.
Debe tenerse cuidado con las técnicas de siembra microbiana para evitar en lo
Posible la contaminación por otros microorganismos diferentes al deseado.
MATERIALES
1. Microorganismos previamente aislados (Bacterias y hongos)
2. Agar nutritivo en caja de Petri
3. Agar PDA
4. Asa redonda
5. Gradilla
6. Mechero
7. Incubadora
8. Vinipel
9. Marcador de vidrio

PROCEDIMIENTO
1. Desinfectar el área de trabajo, prender el mechero y preparar el material de
trabajo.
2. Abrir la caja de Petri y seguir el esquema para el aislamiento para el caso de bacterias.

3. Para el caso de Hongos tomar con el asa recta el microorganismo y por punción sembrar
en la caja de Petri con medio PDA.
4. Incubar a 37° por 24 horas para bacterias y a 25° por 8 días para hongos.

5. Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base de la caja y envolverla en

papel Vinipel.

6. Desinfectar el área de trabajo, apagar el mechero y entregar el material

MÉTODOS DE SIEMBRA –PARTE B
(Recuentos de UFC y diluciones) En esta etapa los estudiantes utilizarán una de las
técnicas de siembra más usadas en laboratorio, que permite el recuento de
microorganismos en una muestra como aguas, suelos etc. La técnica a realizar en
este punto hace referencia a los recuentos de microorganismos utilizando diluciones
seriadas en base 10, donde se dispersa la población de microorganismos
permitiendo conocer el número aproximado en una muestra

MATERIALES
1. Muestra de suelo o agua residual.
2. Frascos con solución salina 0.85% o agua peptonada al 0.1% (90 ml)
3. Tubos tapa rosca con 9 ml de solución salina o agua peptonada al 0.1% (6
Tubos)
4. Cajas de Petri con agar Nutritivo, Chromocult o King B. (6 cajas)
5. Pipetas de vidrio o pipeta automática. (100 microlitros y 1000 microlitros)
6. Rastrillos.

PROCEDIMIENTO
1. Pesar 10 gramos de la muestra, mezclarla con los 90 ml de solución salina o
Agua peonada

2. Realizar diluciones seriadas desde 10-1 hasta 10-6

3. Tomar las 6 cajas de Petri con agar y marcar 2 con dilución 102
, 2 cajas con dilución 104
, 2 cajas con dilución 106

4. Sembrar por duplicado las diluciones 10-2 10-4 10-6 tomando 0,1 ml de cada
dilución por superficie, con ayuda del rastrillo homogenizar la micro gota sobre
La superficie del agar sin romperlo.

5. Incubar por 24 horas a 37°C y realizar el recuento.

6. Realizar los cálculos donde se toman las diluciones donde se encuentren
Entre 30 y 300 colonias para realizar el recuento, sacar promedio y aplicar la
Formula: Número de colonias x Factor de dilución x 10 (factor de corrección)
El resultado es informado en UFC (unidades formadoras de colonia)/ g o ml
De la muestra.
 CONCLUCCIONES

 La esterilización elimina con eficacia los microorganismos y sus esporas

garantizando buen manejo del material en el laboratorio.

 Se logró conocer los diferentes medios de cultivos para sembrar microorganismos.

Aprendimos los pasos para elaborar un medio de cultivo, sus cálculos respectivos de
las cantidades necesarias para su preparación. Se determinó la importancia que tiene
los medios de cultivo en una investigación sobre todo en la parte ambiental como ya
que gracias a ello se puede hacer el aislamiento de microorganismos tanto patógenos
como benéficos y así identificarlos para su posterior uso.

 Definimos, estudiamos y aplicamos los procedimientos que se deben realizara para la

elaboración de un medio de cultivo, es claro que esto es referido para con la unidad
que estamos estudiando, microbiología, por otro lado conocimos y utilizamos algunos
antibióticos naturales que existen, por lo tanto creemos firmemente que la práctica
fue muy amena y fructífera para con los objetivos trazados al inicio de la misma.

 Como estudiantes de ingeniería ambiental gracias a la práctica en el laboratorio de

microbiología desarrollamos nuestros conocimientos en lo que respecta a medios de
cultivo y así poder aplicar en nuestra vida profesional.