UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN

MARCOS
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

E. A. P. GENÉTICA Y BIOTECNOLOGÍA

Informe 12 Interacción de ABA y AG3 en la germinación de

semillas
MATERIALES
 250g de semillas de lenteja
 8 placas de Petri
 pinzas por cada grupo de trabajo
 Papel filtro o toalla
 Agua destilada estéril
 pipeta de 5 mL
 Solución 100M de ABA (P.M. 264.32)
 Solución 100M de ácido giberélico (P.M. 346.37)
 Solución diluida de lejía comercial al 10%
 Semillas de Lens
culinaris

Placas Petri con cada

tratamiento respectivo
(H2O, ABA, AG3,
ABA+AG3) y las
lentejas ya posicionadas.

2
MÉTODO
En la práctica actual se desea evaluar el efecto de dos fitohormonas (ABA y AG3) sobre
la germinación de semillas de Lens culinaris y el efecto de su interacción, para
comprobar si el AG3 puede revertir el efecto del ABA.
 Selección de semillas y desinfección
Cada grupo escogió las semillas de lentejas a usar de un solo grupo de semillas para
evitar mayor heterogeneidad en los resultados. Se escogieron las semillas de un color
marrón claro, evitándose las verdosas, también se quitó las posibles contaminaciones
como pequeñas piedras.
Las semillas escogidas fueron enjuagadas primero con agua de caño y luego con lejía al
10% durante 10 minutos. Se enjuagó tres veces con agua destilada para remover los
restos de lejía.
 Etapa Imbibición
Se separaron 2 grupos de semillas (de 80 semillas cada grupo) y se colocaron en beakers
con 2 tratamientos: agua destilada y disolución de 100 µM de ABA, por 1 hora.
El experimento fue realizado por duplicado, por lo que se tienen 80 semillas para cada
repetición, y por ende 20 para cada tratamiento.
 Etapa de Germinación
Se repartieron 20 semillas en cada placa Petri que contenía un pedazo de papel toalla en
su base previamente cortado y posicionado, y se aplicó cada tratamiento.
Fueron 4 tratamientos: H2O, ABA, AG3 y ABA-AG3. Es decir, cada placa Petri con
papel toalla contenía 10 ml de cada solución y 20 lentejas.
Las semillas embebidas en agua fueron para los tratamientos H2O y AG3 y las
embebidas en ABA fueron para los tratamientos ABA y ABA-AG3.
 Incubación
Se incubaron las placas Petri a oscuridad en una estufa a 25°C y se contó la cantidad de
semillas germinadas tras lapsos de 24, 48 y 72 horas.

3
 RESULTADOS
Luego de la instalación del experimento, se tuvo que evaluar el número de semillas que
iban germinando durante 24h, 48h y finalmente 96h, se obtuvieron los valores
representados en las tablas

Tabla 1.1 Registro de Datos.

Tratamientos H2O AG3 ABA ABA + AG3
N° de semillas 11,00 10,00 2,00 3,00
germinadas
durante 24h 9,00 13,00 2,00 2,00
13,00 15,00 4,00 7,00
13,00 16,00 4,00 3,00
10,00 8,00 5,00 5,00
9,00 11,00 3,00 6,00
Total 65 73 20 26
N° de semillas 15,00 13,00 10,00 16,00
germinadas
durante 48h 13,00 15,00 8,00 11,00
17,00 19,00 11,00 12,00
15,00 17,00 16,00 12,00
12,00 10,00 15,00 16,00
12,00 13,00 14,00 16,00
Total 84 87 74 83
N° de semillas 16,00 13,00 12,00 17,00
germinadas
durante 96h 14,00 16,00 9,00 14,00
19,00 20,00 16,00 16,00
18,00 20,00 20,00 17,00
12,00 12,00 18,00 18,00
12,00 13,00 15,00 18,00
Total 91 94 90 100
Total por cada 105 106 120 119
tratamiento

4
 Tabla 1.2
EXPERIMENTO ABA-AG3
n°semillas
% semillas germinadas
mesa TRAT # Sem. germinadas
24h 48h 96h 0.00 24.00 48.00 96.00
1 AGUA 20 11 15 16 0.00 0.55 0.75 0.80
1 AGUA 20 9 13 14 0.00 0.45 0.65 0.70
2 AGUA 20 13 17 19 0.00 0.65 0.85 0.95
2 AGUA 20 13 15 18 0.00 0.65 0.75 0.90
3 AGUA 13 10 12 12 0.00 0.50 0.60 0.60
3 AGUA 12 9 12 12 0.00 0.45 0.60 0.60
Total 105 65 84 91 0.00 0.62 0.80 0.87
1 AG3 20 10 13 13 0.00 0.50 0.65 0.65
1 AG3 20 13 15 16 0.00 0.65 0.75 0.80
2 AG3 20 15 19 20 0.00 0.75 0.95 1.00
2 AG3 20 16 17 20 0.00 0.80 0.85 1.00
3 AG3 13 8 10 12 0.00 0.40 0.50 0.60
3 AG3 13 11 13 13 0.00 0.55 0.65 0.65
Total 106 73 87 94 0.00 0.69 0.82 0.89
1 ABA 20 2 10 12 0.00 0.10 0.50 0.60
1 ABA 20 2 8 9 0.00 0.10 0.40 0.45
2 ABA 20 4 11 16 0.00 0.20 0.55 0.80
2 ABA 20 4 16 20 0.00 0.20 0.80 1.00
3 ABA 20 5 15 18 0.00 0.38 1.15 1.38
3 ABA 20 3 14 15 0.00 0.25 1.17 1.25
Total 120 20 74 90 0.00 0.17 0.62 0.75
1 ABA-AG3 20 3 16 17 0.00 0.23 1.23 1.31
1 ABA-AG3 20 2 11 14 0.00 0.15 0.85 1.08
2 ABA-AG3 20 7 12 16 0.00 0.35 0.60 0.80
2 ABA-AG3 20 3 12 17 0.00 0.15 0.60 0.85
3 ABA-AG3 20 5 16 18 0.00 0.25 0.80 0.90
3 ABA-AG3 19 6 16 18 0.00 0.32 0.84 0.95
Total 119 26 83 100 0.00 0.22 0.70 0.84

5
 Tabla 1.3 de Comparaciones múltiples – SPSS
HSD de Tukey
Variable (I) (J) Diferencia de Error Sig.
dependiente Tratamiento Tratamiento medias (I-J) típico
AG3 -1,33333 1,22701 ,701
*
Agua ABA 7,50000 1,22701 ,000
*
ABA-AG3 6,50000 1,22701 ,000
Agua 1,33333 1,22701 ,701
*
AG3 ABA 8,83333 1,22701 ,000
*
ABA-AG3 7,83333 1,22701 ,000
horas24 *
Agua -7,50000 1,22701 ,000
*
ABA AG3 -8,83333 1,22701 ,000
ABA-AG3 -1,00000 1,22701 ,847
*
Agua -6,50000 1,22701 ,000
*
ABA-AG3 AG3 -7,83333 1,22701 ,000
ABA 1,00000 1,22701 ,847
AG3 -,50000 1,57938 ,989
Agua ABA 1,66667 1,57938 ,720
ABA-AG3 ,16667 1,57938 1,000
Agua ,50000 1,57938 ,989
AG3 ABA 2,16667 1,57938 ,530
ABA-AG3 ,66667 1,57938 ,974
horas48
Agua -1,66667 1,57938 ,720
ABA AG3 -2,16667 1,57938 ,530
ABA-AG3 -1,50000 1,57938 ,779
Agua -,16667 1,57938 1,000
ABA-AG3 AG3 -,66667 1,57938 ,974
ABA 1,50000 1,57938 ,779
AG3 -,50000 1,83258 ,993
Agua ABA ,16667 1,83258 1,000
ABA-AG3 -1,50000 1,83258 ,845
Agua ,50000 1,83258 ,993
AG3 ABA ,66667 1,83258 ,983
ABA-AG3 -1,00000 1,83258 ,947
horas96
Agua -,16667 1,83258 1,000
ABA AG3 -,66667 1,83258 ,983
ABA-AG3 -1,66667 1,83258 ,800
Agua 1,50000 1,83258 ,845
ABA-AG3 AG3 1,00000 1,83258 ,947
ABA 1,66667 1,83258 ,800

6
Según la tabla 1.3 de comparaciones múltiples obtenidas mediante SPSS 21.0 se tiene
que en el lapso de 24 horas no existe una diferencia estadísticamente significativa entre
los tratamientos de agua y la hormona AG3 en las raíces de Lens culinaris, así como
para la comparación entre ABA y ABA-AG3.
Para el lapso de 48 horas se tiene que no existe una diferencia significativa
estadísticamente ente ninguno de los tratamientos, de la misma manera sucede para el
lapso de 96 horas.

1.00

0.90

0.80
Frecuencia Germinación

0.70

0.60
Agua
0.50
AG3
0.40
ABA
0.30 ABA-AG3
0.20

0.10

0.00
0 24 48 72 96
Horas de Tratamiento

Gráfica 1.1 Frecuencia de germinación vs. Las horas de

tratamiento.

La gráfica 1.1 muestra que la frecuencia de germinación llegó a ser relativamente mayor
con respecto a los demás tratamientos realizados; sin embargo mediante la prueba
realizada con SPSS sabemos que no existe diferencia estadísticamente significativa,
exceptuando parte del tratamiento a las 24horas.

7
DISCUSIÓN

Para el desarrollo de la práctica se han evaluado los resultados de las 3 mesas en

conjunto teniendo de esta manera una muestra de 120 semillas de Lens culinaris por
cada tratamiento. Observamos (tabla 1.3) que solo a las 24h existe diferencia
estadísticamente significativa entre algunos de los tratamientos, sin embargo, en las
siguientes evaluaciones (48 y 72 h) si bien hay diferencias estas no son significativas.

Utilizando la herramienta online de la página netquest se determinó que el valor

numérico de la muestra a evaluar, si se asume que la población total fue alrededor de
10000 semillas, sería 73 semillas por cada tratamiento (para evaluar con un nivel de
confianza del 95%) y como ya se mencionó, en la práctica se evaluaron 120 semillas
para cada uno. Por tanto, podemos afirmar que la cantidad de nuestra muestra sería la
indicada.
Un factor importante en un muestreo es la aleatoriedad, en donde cada individuo, en
este caso cada semilla, tiene la misma probabilidad de ser seleccionado, esto no se dio
en la práctica y podría ser una de las razones de los resultados obtenidos. Se debe tener
en cuenta que estas semillas de por si provienen de un proceso de selección, fueron
adquiridas de un supermercado, pero además hubo una selección adicional para la
evaluación de la germinación en donde se trató de tener las mejores semillas (aquellas
semillas de color marrón). Si bien los resultados muestran una tendencia esperada, en
donde AG3 tiene una mayor germinación que los demás tratamientos, probablemente el
tratar de potenciar la germinación de semillas de buena calidad que de por sí germinen
bien (como se ve en el tratamiento con agua, tabla 1.2), hace que el efecto del AG3 no
muestre una diferencia tal, que llegue a ser significativa.
En busca de la temperatura óptima de germinación para Lens culinaris se realizó un
estudio (1) en un rango de temperaturas de 4°C–23°C determinando que la temperatura
óptima es de 20°C. En la práctica se evaluó a temperatura ambiente (aproximadamente
19-20°C), es decir, en una buena condición térmica para la germinación por lo que la
temperatura no fue un factor limitante. Sin embargo, la germinación de Lens culinaris
requiere de otras condiciones como por ejemplo un rango de pH de 6,0 a 8,0 (2),
además las lentejas tienen una relativamente alta exigencia de fósforo (2), necesaria
para promover el desarrollo de extensos sistemas de raíces y plantas vigorosas, y porque
el fósforo también juega un papel importante en el proceso de fijación de nitrógeno.
Estas condiciones no se evaluaron en la práctica y hubiesen podido contribuir a mejorar
las condiciones para la germinación. Además, se propone utilizar otras concentraciones
de AG3 y evaluar su efecto en la regulación a fin de comprobar si ante este cambio se
obtiene la diferencia estadísticamente significativa esperada.
En la literatura se ha encontrado que un buen potenciador para la germinación de
semillas de Lens culinaris es el Selenio (Se) debido a que aumenta el rendimiento,
biomasa y la calidad de semillas (3).

8
Durante el protocolo de regulación de la germinación de semillas de Lens culinaris, la
etapa de imbibición es relevante para la activación del metabolismo y la respiración, la
producción de proteínas, el transporte de sustancias de reservas, además de la
elongación del embrión y ruptura de la testa, de la cual sale la radícula, como principal
indicio de germinación (4). La imbibición se genera por las diferencias de potencial,
principalmente el mátrico, entre la semilla y la solución a la que está expuesta, el agua
claramente como solvente.

La testa es una capa derivada de los tegumentos ovulares interiores o exteriores, o

ambos (5). La testa de las semillas interviene en la producción y transporte de
metabolitos necesarios para el desarrollo del cigoto, en la fotosíntesis y la protección
mecánica (6). La testa también juega un papel importante en la regulación de la
germinación; es decir, activándola mediante la absorción de agua, principalmente en
leguminosas, como la Lens culinaris, por ejemplo, la variación de la temperatura a la
que está expuesta la testa es uno de los mecanismos que promueven la liberación del
periodo de latencia, y así al comienzo de la germinación.
En la práctica desarrollada con Lens culinaris mediante los tratamientos con H2O, ABA
Y AG3, se obtuvieron como resultados en los datos grupales que el tratamiento con
AG3 fue el que mayor germinación de semillas tuvo, seguido por el tratamiento con
H2O, después se observó una mejoría en el tratamiento con ABA-AG3; mientras que el
último caso y con menor porcentaje se debió al tratamiento con ABA. Y estos
resultados son acorde de manera general con la regulación hormonal de la dormición y
la germinación de la semilla que está determinada principalmente por la relación ABA-
GAs. Mientras que las GAs promueven la germinación, el ABA actúa como hormona
clave en el establecimiento y mantenimiento de la dormición (7).
En un estudio realizado con Sisymbrium officinale, la dormición primaria en S.
officinale fue intensa y para provocar su pérdida se precisó un almacenamiento a baja
humedad relativa y temperaturas medio-altas; proceso conocido como “after-ripening”
(AR) o post-maduración. La germinación de sus semillas es dependiente de nitrato
(NO3-), dependencia que es aminorada por el AR. En esta Memoria se describe, desde
una perspectiva integradora, la influencia del AR, NO3-, GAs y ABA en la capacidad
germinativa de la semilla de S. officinale. Se demuestra por primera vez que el NO3-
estimula la biosíntesis de GAs y el catabolismo de ABA durante la imbibición de las
semillas no durmientes, mientras que altera negativamente la expresión de la
señalización de GAs. Durante la imbibición de semillas durmientes (AR0), el NO3-
disminuye la expresión de biosíntesis de ABA y señalización de ABA esta diferencia
radica principalmente en la capacidad de síntesis de GAs bioactivas y no tanto en el
metabolismo del ABA o en la señalización de ambas hormonas (7). En síntesis viendo
la práctica realizada y trabajos estudiados previamente se observa que un aumento en
concentraciones de giberelinas puede revertir efectos causados por condicionamientos
con ABA, a pesar que nuestra practica se desarrolló en un ambiente de laboratorio y no
contamos con un dato estadístico para NO3- se puede observar que hay similitudes en los
resultados, por lo que se concluye que un balance adecuado entre actividad fenológica y
genética es indispensable para la inducción a la germinación de la semilla.

9
El uso de fitohormonas y otros compuestos para aumentar el porcentaje de germinación
no es algo nuevo, investigaciones en diferentes modelos vegetales indican el uso de
AG3, KNO3, etc. Se ha visto incremento del 23% sobre el porcentaje de germinación
normal a los 14 días en un cultivos de Capsicum chinense (chili habanero) a una
concentración de 500 mg/L de AG3, con un incremento de materia seca del 40% (8).
Por otro lado, se destaca además el empleo de la fitohormona AG3 para restaurar el
porcentaje de germinación normal frente alguna acción inhibitoria (como exposición a
luz de onda rojo lejano o a ABA), aunque en esta experiencia no presentara una
restauración significativa, quizá por falta de exposición a luz de onda rojo lejano
precisamente, como se ha reportado (pues no presenta efecto la hormona en oscuridad)
(9).

BIBLIOGRAFÍA
1. Hojjat SS, Galstayan M. Effects of different temperatures and duration on germination of
Lentil (Lens culinaris Medik.) seeds. Russ Agric Sci [Internet]. Allerton Press, Inc.; 2012
Mar 28;38(2):101–5. Available from:
http://www.springerlink.com/index/10.3103/S106836741202019X
2. Canadian Food Inspection Agency. The Biology of Lens culinaris Medikus (Lentil).
2014; Available from: http://www.inspection.gc.ca/plants/plants-with-novel-
traits/applicants/directive-94-08/biology-documents/lens-culinaris-medikus-lentil-
/eng/1330978380871/1330978449837#b1
3. Thavarajah D, Thavarajah P, Vial E, Gebhardt M, Lacher C, Kumar S, et al. Will
selenium increase lentil (Lens culinaris Medik) yield and seed quality? Front Plant Sci
[Internet]. Frontiers; 2015 May 19;6:356. Available from:
http://www.frontiersin.org/Plant_Nutrition/10.3389/fpls.2015.00356/abstract
4. Suárez D, Melgarejo LM. I. BIOLOGÍA Y GERMINACIÓN DE SEMILLAS Marco
conceptual.
5. Cohn MA. Seed development, dormancy and germination. Annual Plant Reviews,
Volume 27. Ann Bot. 2008 Aug;102(5):877–8.
6. Smýkal P, Vernoud V, Blair MW, Soukup A, Thompson RD. The role of the testa during
development and in establishment of dormancy of the legume seed. Front Plant Sci.
2014;5:351.
7. Carrillo Barral N. Influencia del nitrato, ácido abscísico (ABA) y giberelinas (GA) en la
transición dormición germinación de semillas de Sisymbrium officinale (L.) Scop.
sometidas a “post-maduración.” 2016.
8. Villegas-Torres OG, Domínguez-Patiño ML, Acosta-Durán CM, Sotelo-Nava H, López-
Gómez JD, Flores-Sánchez G. Importance of the Role of Gibberellic Acid and Potassium
Nitrate in Seed Germination Habanero. J Chem Chem Eng. 2013;7:145–53.
9. Schopfer P, Plachy C, Frahry G. Release of Reactive Oxygen Intermediates (Superoxide
Radicals, Hydrogen Peroxide, and Hydroxyl Radicals) and Peroxidase in Germinating
Radish Seeds Controlled by Light, Gibberellin, and Abscisic Acid. PLANT Physiol.
2001 Apr;125(4):1591–602.

10