Resultados y discusión

Tabla 1: Datos experimentales (Concentración y Absorbancia)

Concentración Absorbancia
0 0
0,2 0,21
0,4 0,674
0,6 1,124
0,8 1,393
1 1,579

Blanco 0,034
Sample (muestra problema) 1,639

Concentración vs Absorbancia
1.8
1.6 y = 1,6991x + 0,0196
R² = 0,9801
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
-0.2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2

Ilustración 1: Curva de calibración Concentración vs Absorbancia

Fuente: (Olaves,2018)

 Absorbancia de Almidón consumido

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝐴𝑙𝑚𝑖𝑑ó𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 = 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑆𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒 − 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝐵𝑙𝑎𝑛𝑐𝑜

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝐴𝑙𝑚𝑖𝑑ó𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 = 1,639 − 0,034

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝐴𝑙𝑚𝑖𝑑ó𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 = 1,605

  Concentración de almidón

𝐸𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑡𝑎 (𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏)

𝑦 = 1,6991𝑥 − 0,0196

𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑎𝑙𝑚𝑖𝑑ó𝑛 𝑐𝑜𝑛𝑠𝑢𝑚𝑖𝑑𝑜 − 𝑏

[𝐶] 𝐴𝑙𝑚𝑖𝑑ó𝑛 =
𝑚

1,6991 − 0,0196
[𝐶] 𝐴𝑙𝑚𝑖𝑑ó𝑛 =
1,6991

[𝐶] 𝐴𝑙𝑚𝑖𝑑ó𝑛 = 0,933

Según (González & Tascon, 2013), la enzima (𝛼 − 𝑎𝑚𝑖𝑙𝑎𝑠𝑎), es una enzima de naturaleza
glucoproteica que existe en 6 formas moleculares (isoenzimas), que se encuentra en la saliva
humana y cataliza la degradación del almidón. Mediante esta práctica de laboratorio se
evaluó la acción de la alfa-amilasa deshidrolizando el almidón, ya que éste se compone por
un gran número de moléculas de glucosa unidas entre sí en forma lineal, formando una
especie de hebra o fibra, al ponerse en contacto con el Lugol, éste se coloca en los espacios
intermoleculares del almidón, intercalándose en su estructura, por lo que modifica las
propiedades físicas de dichas moléculas, formando un compuesto de inclusión de color azul
o violeta. No es, por tanto, una verdadera reacción química, sino que se forma un compuesto
de inclusión que modifica las propiedades físicas de esta molécula, es decir en este tipo de
reacción aparecen 2 constituyentes macromoleculares lineales, llamados amilosa (𝛽 −
𝑎𝑚𝑖𝑙𝑜𝑠𝑎) y amilopectina (𝛼 − 𝑎𝑚𝑖𝑙𝑜𝑠𝑎)

Mediante los datos representados en la Taba 1 se puede evidenciar que a medida que l
concentración de sustrato (almidón) aumenta la absorbancia de la muestra también lo hará,
en muchas determinaciones se cumple esta proporcionalidad ya que la enzima siempre tiene
moléculas de sustrato en su centro activo de manera que la concentración de enzima - sustrato
será prácticamente constante, sin embargo, se determinó que esta relación es correcta debido
a que el valor del coeficiente de correlación lineal 0,9801 es alto cercano a la unidad (100%),
estadísticamente esto representa un nivel de confiabilidad mayor al 95% de los datos
experimentales.
La cantidad sustrato consumido (almidón) se puede determinar restando los valores de
absorbancia de la muestra problema y el blanco, para después aplicarlo en la ecuación de la
recta y por simple despeje se obtiene el valor esperado de 0,933 además, cabe recalcar que
como la concentración calculada de amilasa es muy pequeña y la concentración de sustrato
va aumentando en un rango de 0,2 al final de esta reacción se llegará a una concentración de
complejo enzima - sustrato que será constante para toda la reacción, es decir, la enzima
presentará saturación de velocidad respecto a la concentración de sustrato.