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Obtención del DNA de los plásmidos pCR2.

1-TOPO recombinante y no recombinante


Colocar 1.5mL del
plásmido no 100µL de solución 1BD
recombinante Etiquetado enfriada previamente en hielo
12000X g
Paquete celular
2min
Re suspender

200µL de
150µL de solución II BD
solución IlI BD 5 veces
5 min
Y No usar Vórtex

Transferir
sobrenadante
Añadir400µL
fenol:cloroformo:alcohol
isoamílico (25:24:1)
10 seg para 12000X g
resuspender 5min 4°C Tubo nuevo y
etiquetado, 400µL
sobrenadante aprox.
Mantener
tubos 5
minutos en Adicionar 2
frio para volumenes de
precipitar DNA etanol abs. -20°C
12000X g Tubo nuevo
12000X g
5min 4°C No transferir proteínas 10min
de interfase

Disolver DNA
Descartar Y descartar en 30 µL de
Descartar exceso de etano
sobrenad TE o agua
sobrenad con tubos
ante bidestilada
12000X g ante destapados (10-
Lavar pastilla 30min) esteril,
con 1mL etanol
2min
guardar -20°
70% -20°