Sunteți pe pagina 1din 30

Cursul Disciplinei de

Biofizica si Fizica Medicala

Prof. dr. C. Stefanescu, Sef. lucr. dr. I. Grierosu, Prof. dr. V. Rusu
2016 - 2017

CURSUL 5
Curs de Biofizică

Vă rugăm: gândiţi!

5
Disciplina de Biofizică
si Fizică medicală
6/18/2018 2
Cromatografia
Metodă de separare şi identificare
a componenţilor unui amestec.

2 faze: faza staţionară şi faza mobilă.

4 Mecanisme diferite de retenţie


- 4 tipuri de cromatografie:
1. De adsorbţie 3. De permeaţie
2. De schimb ionic 4. De afinitate
6/18/2018 3
Cromatografia:
schemă
de
principiu
1. Fază staţionară
- solid
- lichid
- amestec solid / lichid
2. Fază mobilă
- lichid
- gaz
6/18/2018 4
Coeficient de distributie sau de partaj:
c1
Pc 
Definitie: c2
Concentratia component A în faza stationară
Concentratia component A în faza mobilă

Se bazează pe retenţia diferită a


componenţilor amestecului în faza
staţionară: coeficient de distribuţie c2
sau de partaj.

c1
6/18/2018 5
3 exemple:

(A) Sarcini electrice


(B) Filtrare prin pori
(C) Legături covalente
6/18/2018 6
Mecanisme diferite de retenţie
- 4 tipuri de cromatografie:

1. De adsorbţie 3. De permeaţie
2. De schimb ionic 4. De afinitate

6/18/2018 7
6/18/2018 8
A.Cromatografia
de adsorbţie

Mikhael Tsvet (1872–1919)


botanist rus
– 1901, separarea clorofilei
prin cromatografie de
adsorbţie pe coloană

Retenţia la suprafaţa
fazei staţionare

6/18/2018 9
Cromatografia de adsorbtie

Frecvent,
adsorbantul
(faza
stationara) =
gel de siliciu
(este hidrofil,
acid si polar)

Adsorbtia (fenomen de suprafata) = fixarea


moleculelor la nivelul fazei solide
(stationare).

Fixarea = stabilirea de legaturi secundare intre


adsorbant si molecula adsorbita.

Tipuri de legaturi = legaturi dipol-ion, dipol-dipol,


6/18/2018 10
sau legaturi Van der Waals.
Mecanisme diferite de retenţie
- 4 tipuri de cromatografie:

1. De adsorbţie 3. De permeaţie
2. De schimb ionic 4. De afinitate

6/18/2018 11
B. Cromatografia
de afinitate
În cromatografia de afinitate, un
ligand (care se cuplează specific la o
proteină) este fixat covalent de o
matrice poroasă (faza staţionară)

Când un amestec de proteine traversează


faza staţionară:
- Proteina de separat se cuplează cu
ligandul, iar celelalte proteine din
amestec sunt eliminate din coloană
fără a fi reţinute deloc.

- Modificând condiţiile de eluţie (pH


acid) proteina reţinută se detaşează
de faza 6/18/2018
staţionară şi este eliminată 12
(recuperată).
Cromatografia de afinitate

Separarea
unui anticorp dintr-un
amestec prin
cromatografie de
afinitate

În acest caz, ligandul


(Anticorpul) se leagă
specific de proteină
(Antigenul); aceasta este
fixată prin legături
covalente de matricea
Exemplu: afinitate
inertă şi poroasă. Antigen - Anticorp 13
6/18/2018
1.

2. 3.

not

6/18/2018 14
Cromatografia de afinitate
Exemplu: purificarea nucleazei stafilococului prin
cromatografie de afinitate - compusul
reprezentat în (b) a fost legat covalent la faza
staţionară (agaroză)

6/18/2018 15
Mecanisme diferite de retenţie
- 4 tipuri de cromatografie:

1. De adsorbţie 3. De permeaţie
2. De schimb ionic 4. De afinitate

6/18/2018 16
C. Cromatografie prin
schimb ionic
Ex! Generatorul de 99m-Tc
(v. Aplicatii radioizotopi …)
Ioni legaţi electrostatic la un suport insolubil şi chimic inert
sunt înlocuiţi reversibil de alţi ioni din amestecul de separat:

Suport+A- + Ion- Suport+Ion- + A-

6/18/2018 17
Cromatografia prin schimb ionic

Generatorul de 99mTc

6/18/2018 18
1 2

3 4

Sursa
6/18/2018 = http://www.youtube.com/watch?v=q3fMqgT1do8 19
Cromatografia prin schimb ionic

6/18/2018 20
Mecanisme diferite de retenţie
- 4 tipuri de cromatografie:

1. De adsorbţie 3. De permeaţie
2. De schimb ionic 4. De afinitate

6/18/2018 21
D.Cromatografie de permeaţie
- prin filtrare în gel
În cromatografia de
permeaţie sau de
filtrare în gel,
(cromatografie de
excludere sau
tamisaj molecular),
proteinele sunt
separate după
mărimea şi forma
lor.

Frecvent faza staţionară este: dextran


(Sephadex), agaroză sau poliacrilamidă
6/18/2018 22
Cromatografia de permeaţie

6/18/2018 23
Cromatografia de permeaţie

6/18/2018 24
Cromatografia de permeaţie se poate folosi
pentru estimarea masei moleculare

Ex.: cromatografia de permeaţie

6/18/2018 25
6/18/2018 26
Cromatografia este o metoda de ...

6/18/2018 27
? In cazul generatorului de 99mTc etapele cromatografiei
prin schimb ionic sunt:
A. echilibrare
B. spalare cu solutie NaCl
C. elutie
D. regenerare
E. toate de mai sus

6/18/2018 28
? Ce tip de metoda cromatografica este
reprezentata in figura de mai jos:
A) de adsorbtie
B) de afinitate
C) prin schimb ionic
D) de permeatie
E) de absorbtie

6/18/2018 29
Bibliografie selectivă
• Aurengo A., Grémy F., Petitclerc T. - Biophysique, Médecine-Sciences
Flammarion, Paris, 1998.
• Dimoftache C., Herman S. – Principii de Biofizică umană, Ed. Universitară
“Carol Davila”, Bucureşti, 2003.
• Duncan G, Physics in the Life Sciences, Blackwell Scientific Publications,
The Alden Press, Oxford, 1990.
• Durand A., Escanyé J-M., Naoun A. La biophysique en 1001 QCM, Ed.
Ellipses, 2004.
• Goldfarb D. Biophysics DeMYSTiFieD. McGraw-Hill Companies, 2011.
• Herman S. Aparatura medicală. Principiile fizice ale aparaturii medicale
moderne,Ed.Teora,Bucureşti, 2000.
• Nölting, Bengt. Methods in Modern Biophysics. Springer. 2003.
• Pascu M., Rusu V., Vasile C., Spectrometria in IR in medicina si farmacie,
Editura BIT, 2003.
• Popescu A., Bazele Opticii, Ed. Universităţii „Al. I. Cuza”, Iaşi, 1988.
• Rusu V., Baran T., Brănişteanu D. D. - Biomembrane şi patologie, vol. I,
Ed. Medicală, Bucureşti, 1988, 63-92, 286-292.
• Rusu V. Note de curs. 2010.
• Rusu V. – Nobel – Retrospectivă 1905 – 1995 – Laureaţii premiului pentru
fiziologie şi medicină, Ed. Omnia, Iaşi, 1996.
• Rusu V si colab. Lucrări practice şi demonstraţii de Biofizică şi Fizică
Medicală, Ed. „Gr. T. Popa” Iaşi, 2003.
• Rusu V. – Dicţionar medical, Ed. Medicală, Bucureşti, ed. IV, 2011.
• Skoog D. A., Holler F. J., Nieman T. A., Principes d’analyse
instrumentale, De Boeck Université, Paris, 2003.
• Ştefănescu C, Rusu V. Biophysics and Medical Physics: An Introduction,
6/18/2018
Ed. Tehnopress, 2008. 30

S-ar putea să vă placă și