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Cuando la llegada de aminoácidos al hígado es alto. Como sucede después de la

ingesta de de uno como una dieta rica en proteínas.
Parte del exceso de aminoácidos gracias al aumento de la síntesis proteica así como
por el incremento de su degradación a urea y sustrato glucogénico o cetogenico
dependiendo de cada aminoácido y su vía oxidativa. Junto con el catabolismo del
esqueleto de cada aminoácido, es necesario disponer de un medio eficaz de
eliminación del nitrógeno de los grupos aminos para evitar la acumulación hasta
niveles tóxicos de amoniaco y para que el hígado proceda a la síntesis de urea,
requiere de cantidad estequiometrias de amoniaco (en forma de carbamil-P) y de
aspartato.

El hombre y mamíferos la síntesis de urea (ureogénesis) se realiza a partir del

amoniaco (NH3) resultante de la desanimación de los aminoácidos y el C02
proveniente de las descarboxilaciones (ciclo de Krebs). La hidrolisis de la arginina es la
fuente de la urea aunque este aminoácido se encuentra en todas las células. La
formación de urea está particularmente limita al hígado; ya que es el único tejido que
posee arginasa.
La arginasa (PM: 120.000) está constituida por cuatro subunidades, cada de las cuales
está unido un átomo de Mn2+.
r „ La ortina producto del desdoblamiento de la arginina, puede ser utilizada de
manera cíclica al reaccionar con otra, molécula de carbamil ʹ P y así formar
citrulina a nivel mitocondrial en la primera reacción de la secuencia que
conduce finalmente a la síntesis de urea.
ÿ „ Citrulina (citoplasma)
Ñ „ Hidrólisis de Arginina ʹ ornitina + urea

Se ha estudiado que las enzimas del ciclo de la urea muestran también respuestas
adaptativas a los cambios en la ingesta proteica guardando relación con la excreción
urinaria de urea y a hormonas como el glucagon y los glucocorticoides.
El objeto de esta práctica es de mostrar la acción de la arginasa sobre la arginina para
la síntesis de urea.

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Homogenizado hepático de rata al 20% en sacarosa 0.25 M.

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„ Îuffer fosfato 0.05 M, Ph 7.2

„ Solución de arginina 0.3 M
 „ ÷reasa en polvo
„ Acido sulfúrico 2/3 N
„ |ungstato de sodio al 10%
„ Yeactivo de Nessler„
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La preparación del homogenizado hepático de rata al 25% en sacarosa 0.25 M, se

realiza tomando 10ml de homogenizado en un tubo de ensayo y dejar en baño de agua
a 60°C durante 15 minutos (tener cuidado en que no se eleve la temperatura a 60°C).
La arginasa es estable bajo este tratamiento mientras que las demás enzimas del
hígado son precipitadas. Cumplidos los 15 minutos, enfriar el tubo bajo un chorro de
agua. Enseguida desechar, el precipitados y quedara una solución de color rojo
ligeramente turbia en donde se encuentra la enzima.
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Armar los siguientes sistemas:


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Îuffer fosfato 0.05 M pH702 1.0ml 1.0ml

Sol. Arginina 0.3 M 0.5ml ---

Agua destilada --- 0.5ml

Pre-incubar a 37 C por 5 minutos --- ---

Homogenizado hepático(arginasa) 0.5ml 0.5ml

÷reasa en polvo ÷na pizca ÷na pizca

Incubar a 37 C por 30 minutos --- ---

H2SO4 2/3 N 1.0ml 1.0ml

|ungstato de sodio 10 % 1.0ml 1.0ml

agua destilada 6.0ml 6.0ml

Mezclar y filtrar; el filtrado debe ser transparente; de lo contrario volver a

filtrar

 
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´iltrado I --- 0,1ml ---

´iltrado II --- --- 0,1ml

agua destilada 9,0ml 8,9ml 8,9ml

Yeactivo de Nessler 1,0ml 1,0ml 1,0ml

En esta etapa se utiliza nuevos tubos de ensayo, a los cuales les agrega el filtrado de la
anterior. Los que no deberán presentar opalescencia ni turbidez.
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El ciclo de la urea está dirigido por enzimas tal como la Arginasa; en los tubos de los
sistemas:

se agrego sustrato (Arginina), enzima (homogenizado hepático-Arginasa) por lo
que se obtuvo ornitina y urea la que se degrado por acción de la ureasa liberando
amoniaco siendo reconocido por el reactivo de Nessler dando la coloración que se
observa en la figura nº 1


 al no agregarle sustrato no se vio acción de la Arginasa, por lo tanto no se

obtuvo urea; ni coloración.

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La Arginasa cumple una función crucial en el ciclo de la ÷rea, convirtiendo la Arginina

en Ornitina y ÷rea, a través de una hidrólisis. La urea (conteniendo dos grupos amino;
siendo perjudicial su acumulación en iones amonio NH4+) resultante se excreta
mientas la ornitina vuelve nuevamente al ciclo.

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Stryer, L.; Bioquímica; 2002; Edit. Reverte. España