UNIVERSIDAD NACIONAL JOSÉ

FAUSTINO SÁNCHEZ CARRIÓN

Facultad de Medicina Humana

Escuela Profesional de Medicina Humana

Determinación de glucosa en plasma

Informe de la práctica N° 7 del curso de Bioquímica

AUTOR: Castillo Bendezú Christian Giorgio

DOCENTE: Lic. Brenda Romero Chuquiyauri

HUACHO – PERÚ
2018

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 INTRODUCCIÓN

Objetivos
 Demostrar el efecto de los factores: Concentración de Sustrato, Concentración de
Enzima, pH y temperatura sobre la actividad de la Amilasa salival sobre el almidón.

Resultados y cálculos
1) Preparación del Almidón al 1%:
Para su preparación se necesita 1 gramo de almidón que se mesclará con agua destilada
hasta que se alcance un volumen de 100 ml.

2) Recolección de saliva:
El alumno donante no debe haber ingerido alimento unas 2 horas antes como mínimo.
Previamente se tiene que enjuagar la boca con agua, luego manteniendo la boca cerrada
por unos 5-7 minutos esperará que su boca se llene de saliva. Luego en un vaso dejará
fluir por gravedad la saliva para evitar que se forme espuma.

3) Preparación de la solución de amilasa salival al 1%:

El primer paso es filtrar la saliva para luego medir 1 ml de esta, luego se diluye con
agua destilada en una fiola hasta que llegue a 100ml.

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 4) Preparación de la solución de NaCl al 1%:
Pesar 0.2 g de cloruro de sodio y llevarlo a 100 ml en una fiola, con Agua destilada.

5) Preparación de la solución de HCl al 0,05 N:

Se calcula 0,005 moles de HCl para 100 ml de solución

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 6) Preparación de los Buffers 0.1M:
Con los pasos de la guía N°2, se prepara los siguientes buffers:

50 ml de buffer a Ph 4.6

50 ml de buffer a Ph 6.8

50 ml de buffer a Ph 9

Ahora se preparan 9 tubos de ensayo y a cada uno se le agregan los

siguientes componentes, como se muestra en la siguiente tabla:

1 2 3 4 5 6 7 8 9
Sol. Almidón 1% 1 1 1 1 1 1, 1 1 1
5
Buffer pH 4,6 - - - 5 - - - - -

Buffer pH 6,8 5 5 - - 5 5 5 5 5

Buffer pH 9,0 - - 5 - - - - - -

Sol. Na Cl 1, 1, 1, 1, 1, 1, - 1, 1,
4 4 4 4 4 4 4 4
Agua dest. 2, 2, 2, 2, 2, 1, 3, 2, 2,
6 0 0 0 4 5 4 0 0

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Homogenizar cada tubo
Para los tubos del 1 hasta 7 se colocan a baño María a 37 °C durante 5 minutos

El tubo 8 llevar a 0ºC por 5 minutos y el tubo 9 a baño maría de 100ºC por 5 minutos.

Cumplido los 5 minutos, agregar la solución enzimática, como se indica en el siguiente

Cuadro:

1 2 3 4 5 6 7 8 9
Sol. Enzimática 0,0 0,6 0,6 0,6 0,2 0,6 0,6 0,6 0,6

5
Mezclar bien cada tubo sin retirarlo del medio en que se encuentran

Continuar la incubación, considerando un control de 20 minutos, desde el momento que

el preparado enzimático fue agregado a cada tubo.

Cumplido el tiempo exacto de 20 minutos, medir 0,5 ml de cada tubo y añadir a la

batería Nº02 tal como se indica en la siguiente Tabla:

BATERÍA Nº2.

Reactivo \tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Sol HCl 0.05N (ml) 1,5 1,5 1,5 15 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5

Sol. Lugol diluida (ml) 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0 2,0

Incubado (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

Reconocimiento de los productos por reacción con el Benedict:

Reactivo \tubo 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Rvo de Benedict (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Incubado (ml) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

 Mezclar cada tubo y llevar a Baño María hirviente por 5 minutos. Dejar reposar
y comparar los precipitados

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Seguir los mismos procedimientos, pero ahora Buffer a 0.2M

INTERPRETACIÓN:
Al tubo 1 no se le agregó la solución enzimática por lo tanto no hubo la
degradación del almidón, por lo que al hacer la identificación con el reactivo de
Benedict salió negativo. Al tubo 2 se le hecho una solución de NaCl que alteró las

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propiedades de la enzima. Al tubo 3 se le agregó una solución de HCl y un buffer, pero
este buffer no actuaba de manera eficaz al pH del medio del tubo. En el tubo 4 pasó algo
similar que con el tubo 3, pero con otro tipo de buffer. Al tubo 5 se adicionó más agua
destilada y por consiguiente la concentración del sustrato fue menor, además que se le
agregó menos solución enzimática. Con el tubo 6 sí reaccionó bien ya que se empleó un
buffer adecuado, hubo una buena concentración de enzima y de sustrato, además de que
se usó la temperatura correcta. Al tubo 7 se le colocó mucha agua destilada y estuvo
poco concentrada la solución. Al tubo 8 se lo sometió a temperaturas muy bajas, donde
la enzima no puede actuar adecuadamente. Al tubo 9 se lo a temperaturas demasiado
altas, donde la enzima no puede actuar de manera adecuada.

Conclusiones:
 Se demuestra que hay diversos factores que alteran a la actividad enzimática,
entre ellos:
o La temperatura
o El pH
o La concentración del sustrato
o La concentración de la enzima

CUESTIONARIO
1.- ¿Cuáles son los factores que modifican la actividad de las enzimas? Explique la
razón de la acción de cada uno según sus resultados.
 Temperatura: A bajas temperaturas hay bajo calor y las moléculas se mueven
lentamente por lo que no pueden interactuar lo suficiente. A temperaturas
demasiado altas la enzima que es una proteína se desnaturaliza.
 Concentración de iones H+: El pH altera la carga que tienen las cadenas laterales
de los aminoácidos y provocan alteraciones en su estructura terciara
desnaturalizando la enzima.
 Concentración del sustrato: Al ser mayor la concentración del sustrato, hay más
probabilidades de que la enzima choque con el sustrato y se forme el complejo
enzima-sustrato. Pero si se aumenta más la concentración, los sitios activos de la
enzima se saturan y ya no queda más espacios donde el sustrato se una a la
enzima y alcanzan su velocidad máxima.

3.-Con gráficos explique experiencias de diversos tipos de inhibición enzimática

que se evidencian en la clínica médica

Inhibidor competitivo: Los inhibidores de la enzima convertidora de la angiotensina

(IECA) bloquean los efectos de una hormona producida naturalmente por los riñones
denominada angiotensina II. Al bloquear el efecto de la angiotensina II, los IECA
relajan los vasos sanguíneos, lo que disminuye la presión arterial.
Los IECA actúan uniéndose al sitio activo de la enzima y así la Angiotensina I no se
puede unir a la enzima para su transformación en Angiotensina II.

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 Inhibidor de ECA

Inhibición irreversible: Los compuestos organofosforados son ésteres del ácido

fosfórico y de sus derivados, que comparten como característica farmacológica la acción
de inhibir enzimas con actividad esterásica, más específicamente de la
acetilcolinesterasa en las terminaciones nerviosas, lo que genera una acumulación de
acetilcolina y como consecuencia se altera el funcionamiento del impulso nervioso

Bibliografía
Guyton, A., & Hall, J. (2011). Tratado de fisiología médica. Barcelona : Elsevier.
Horton, R. (2008). Principios de bioquímica. Mexico: Pearson.
McKee, T. (2008). Bioquímica. La base molecular de la vida. Mc Graw Hill.
Murray, R. (2012). Harper. Bioquímica ilustrada. Santa Fé: Mc Graw Hill .
Nelson, D., & Cox, M. (2015). Lehninger. Principios de bioquímica. Brcelona: Omega.