OBTENCIÓN DE ETANOL POR FERMENTACIÓN A PARTIR DE SACAROSA

RESUMEN

Para esta práctica se trata experimentalmente de analizar el comportamiento de la levadura

Saccharomyces Cerevis a diferentes concentraciones (0.1%,0.5,1%, 1.5%, 2%) para obtener etanol;
por medio del proceso de fermentación que se realiza al metabolizar la fuente de carbono. Se realizó
una solución de panela al 20%, se ajustó pH a 3.5 y se disolvió la levadura en agua caliente. Se
procedió a realizar la mezcla de levadura y sustrato (solución de panela). Para las muestras se le
realizaron las pruebas de PH, °Brix, biomasa y acidez después de esperar un tiempo de reacción (8
Días de realizada la mezcla), los resultados obtenidos fueron favorables para las condiciones de
desarrollo de la levadura.
INTRODUCCIÓN
La fermentación es un proceso biológico en plena ausencia de aire, originado por la actividad de
algunos microorganismos que procesan los azucares para obtener como productos finales:
un alcohol en forma de etanol, dióxido de carbono (CO2) en forma de gas y unas moléculas
de ATP que consumen los propios microorganismos en su metabolismo celular energético
anaeróbico. El etanol resultante se emplea en la elaboración de algunas bebidas alcohólicas, tales
como el vino, la cerveza, la sidra, el cava, etc.
Los objetivos de esta práctica es obtener alcohol por fermentación de una solución de panela y,
reconocer y aplicar los principios en que se fundamenta la producción y purificación de etanol,
proveniente del proceso de fermentación.
La humanidad emplea la fermentación alcohólica desde tiempos inmemoriales para la elaboración
de cerveza (empleando cereales) y del vino(empleando el fruto de la vida: la uva en forma
de mosto) fundamentalmente. Los griegos atribuían el descubrimiento de la fermentación al
dios Dionisio. Algunos procesos similares como el de la destilación alcohólica ya surgen en el
año 1150 de la mano de Arnau de Vilanova. Fue un elemento más a considerar en el desarrollo
histórico de la alquimia durante la Edad Media.
En el año 1864 se identificó el gas CO2 resultante de la fermentación por el químico Mac Bride y
en 1766 Cavendish lo describió como: «el gas existente en la atmósfera» determinando además la
proporción de dióxido de carbono con respecto al azúcar empleado en el proceso, que rondaba el
57%. En esta época se empezó a descubrir, gracias observaciones científicas, que la fermentación
alcohólica se producía también en substancias «no dulces». Antoine Lavoisier hizo experimentos
en 1789 determinando las cantidades de los elementos intervinientes en la fermentación (carbono,
oxígeno e hidrógeno). Con el advenimiento de los descubrimientos químicos en el año 1815 el
investigador francés Joseph Louis Gay-Lussac fue el primero en determinar una reacción de
fermentación obteniendo etanol a partir de glucosa, a pesar de este logro los fundamentos de la
fermentación alcohólica eran completamente desconocidos. Existe durante el siglo XIX un debate
científico por establecer la «hipótesis de la fermentación». Durante los años 1830s los
químicos Jöns Jakob Berzelius y Justus von Liebig desarrollaron una teoría mecanicista que explica
la fermentación, teorías que estaban en contraposición con las creencias de Louis Pasteur en el
año 1857 que se fundamentaba en la «teoría vitalista» como explicación de los mecanismo básicos
de la fermentación, fue el mismo Pasteur que en el año 1875 demostró que la fermentación era un
proceso anaeróbico.
En el año 1818 Erxleben, De La Tour en Francia, Schwann y Kützing en Alemania (1837)
descubren que las levaduras (organismos microscópicos unicelulares) son la causa del proceso, pero
no fue hasta que Eduard Buchner en el año 1897 descubre que la enzima zimasa es la responsable
final de la fermentación alcohólica trabajo por el que recibe el premio Nobel de Química. Este
descubrimiento atrajo el interés de otros científicos, entre ellos Harden y Young quienes en el
año 1904 mostraron que la zimasa perdía sus propiedades fermentativas bajo condiciones
de diálisis, demostrando que la fermentación dependía de una sustancia de bajo peso molecular que
se quedaba retenida en los finos poros de la membrana de la diálisis. La fermentación podía bajo
estas circunstancias volver a ser restablecida añadiendo simplemente de nuevo las levaduras, esta
substancia descubierta por Harden y Young se denominó cozimasa, y fue eventualmente encontrada
como una mezcla de iones fosfatados, difosfato de tiamida y NAD+. Sin embargo la caracterización
de la cozimasa no fue completada hasta el año 1935. El bioquímico Otto Heinrich Warburg en
conjunción con Hans von Euler-Chelpindescubren en el año 1929 que el cofactor nicotinamida
adenina dinucleótido (NADH) juega un papel muy importante en el proceso interno de la
fermentación. En 1937, los investigadores Erwin Negelein y Hans Joachim Wulff comprueban que
mediante la cristalización de los subproductos de la fermentación la enzima alcohol
deshidrogenasa es protagonista en algunos sub-procesos realizando un papel importante.
Los descubrimientos posteriores a partir del periodo que va desde mediados del siglo XX hasta
comienzos del siglo XXI se centran exclusivamente en la mejora de los procesos de fermentación
alcohólica y conciernen más a la optimización del rendimiento industrial bien sea mediante una
buena selección de cepas de levaduras, de una temperatura de funcionamiento óptima, de cómo
realizar fermentación en un proceso continuo: biorreactores.
MATERIALES
 Matraz de 500 ml fondo plano
 Agitador
 Vaso de precipitado 150ml
 Tubo de fermentación
 Termómetro
 Probeta 250ml
 Miel de caña o panela
 pH – metro
 Buffer pH 4 y 7
 Balanza de dial
 Refractómetro
 Saccharomyces cerevisea
 (NH4 ) SO4 o ( NH4) H2PO4
 Solución NaOH
METODOLOGÍA
RESULTADOS
Para esta práctica se procedió a tomar grados Brix pH y acides titulable y se realizó conteo de
microorganismos que se presenta en la tabla 1 y se graficó Brix Vs [Levadura], pH Vs [Levadura],
acidez Vs [Levadura] y Biomasa Vs [Levadura] como se muestra en las gráficas 1, 2, 3 y 4

Tabla 1

Grafica 1
Se graficó los grados Brix Vs la concentración de levadura

Brix Vs [Lev]
10
8
6
Brix

4
2
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
[levadura]

Grafica 2

pH Vs [Lev]
4

3
pH

0
0 0.5 1 1.5 2 2.5

[levadura]

Grafica 3

%Acides Vs [lev]
2.5
2
%acidez

1.5
1
0.5
0
0 0.5 1 1.5 2 2.5
[levadura]
Grafica 4

Biomasa Vs [lev]
1.20E+11
1.00E+11
8.00E+10
Biomasa

6.00E+10
4.00E+10
2.00E+10
0.00E+00
-2.00E+10 0 0.5 1 1.5 2 2.5
[levadura]

El analisis que mostramos a continuación son de los resultados obtenidos en el dia No 8 del
proceso de fermentación ejecutado en el laboratorio con concetraciones diferentes de levadura
como se muestra en la tabla 1

El sustrato utilizado fue miel de caña panela que contine sacarosa, glucosa y fructuosa, la
sacarosa es hidrolizada a traves de la intervención del complejo enzimatico para romper las
molecula de sacarosa y poder extraer la glucosa y la fructuosa las cuales son metabolizadas
para obtener un rendimiento optimo de etanol; esto lo podemos lo observar la grafica 1 donde
los °Brix dismunuyen a medida que la concentración de levadura aumenta, ya que hay mas
biomasa disponble para degradar glucosa en etanol.

El pH optimos para la fermentación de levaduras esta entre 3.5 y 5.5. Este ph habitualmente
favorece el crecimiento y la actividad fermentativa para el etanol; los resultados obtenidos
esperimentalmente que se muetran en la grafica 2 nos indican que en la fermentacion el pH
no estaba contante y se bajo de rango optimo para la produccion de etanol, ya que en la
grafica 4 de biomasa Vs concentracion de levadura observamos que en una concentracion
0.5 hay un cresiminto de biomasa y un Ph aproximadamente contante que seria unas
condiciones favorables para la produccion de etanol, cuando se pasa a la concentracion 1%
de levadura decae la produccion de biomasa y el proceso fermntativo se ve afectado como
sus paramertos. Ersto tabien se ve reflejado en la grafica 3 ya que el % de acidez es
muy variable para cada concetracion de levadura

El crecimiento de las levaduras y la produccion de productos es evidentemente dependiente

de ciertas carencias nutricionales del del sustrato o medio que se utilice, especialmente en
nitrógeno para sintetisar sus proteinas, carbohidratos como glucosa utilizado como fuente de
carbono para producir etanol.

Los parametro pH, temperatura y sustrto influyen en el rendimiento del alcohol producido
atraves de la degradacion de azucares por levaduras, cuando se modifican las condiones
optimas para la degradacion la levadura puede subrir cambios en el metabolimos y nos
arroja otro tipo de productos .

CONCLUSIONES
Se observó la producción de gas CO2 al desplazarse el agua contenida en la válvula de
fermentación, y de etanol en el aroma de la solución. Acción de las levaduras en su proceso de
degradación de los azucares presentes aportados por la panela; lo que conllevo a bajar la
concentración de °Bx, el pH y por tal la acidez.
Se pudo determinar que las células presentes en la solución aumento notablemente al ser fermentada
luego de ocho días, de acuerdo a la dilución de 1 en 10 se obtuvieron 2*10 4 UFC/mL y 1,55*108
para la muestra sin fermentar. Esto se dio principalmente a las condiciones aptas y al tiempo dado
para el proceso.
Se puede concluir que la concentración más favorable para la obtención de biomasa en de 0.5 a
1% de levadura
Bibliografía