ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE BIOFÍSICA
CARRERA DE BIOFÍSICA

GUÍA DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

PRÁCTICA No. 1 EXTRACCIÓN DE ADN

1. DATOS GENERALES:

NOMBRES: CÓDIGOS:

…………………………………… ………………………………….

…………………………………… ………………………………….

…………………………………... ………………………………….

GRUPO No.: ………….

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

aa/mm/dd aa/mm/dd
 2. OBJETIVO(S):

2.1 GENERAL:

 Aislar ADN de diferentes muestras vegetales.

2.2. ESPECÍFÍCOS:
 Aprender a extraer ADN de especies vegetales.
 Conocer una de las técnicas mediante las cuales se puede extraer el ADN.
 Saber que función cumplen cada uno de los componentes que apliquemos en la
técnica.
3. INSTRUCCIONES

Conocer la extracción de ADN

Aplicar una técnica para aislar el ADN

4. FUNDAMENTO TEÓRICO:

1º.- La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar tiene
que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo
de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar
libre el ADN. Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las
membranas celulares y las rompen.
2º.- La sal evita la unión de las proteínas al ADN.
3º.- Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en
agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre
el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de
otros componentes.

5. EQUIPOS Y MATERIALES, REACTIVOS Y SUSTANCIAS:

4.1 EQUIPOS Y MATERIALES:

 Agua destilada o mineral

 Sal de mesa
 Detergente lava vajillas
 Alcohol de 96 º muy frío
 Varilla de vidrio
  Tubo de ensayo
 Batidora y un cuchillo.
 Vaso de precipitado
 Probeta o pipeta

4.2 REACTIVOS Y SUSTANCIAS:

 Muestra vegetal: Puede tratarse de cebolla, tomate, plátano, germen de trigo o

un puñado de guisantes.

6. MARCO TEÓRICO:

El ADN se encuentra dentro de un área compartimentalizada dentro de la célula

llamada núcleo. Debido a que la célula es muy pequeña, y porque los organismos tienen
muchas moléculas de ADN por célula, cada molécula de ADN debe estar empaquetada
de forma muy compacta y precisa. Esta forma superempaquetada del ADN se denomina
cromosoma.
Durante la replicación del ADN, el ADN se desenrolla para que pueda ser copiado. En
otros puntos del ciclo celular, secciones puntuales del ADN también se desenrollan
cuando es necesario para que distintos juegos de instrucciones se usen en la fabricación
de proteínas y para otros procesos biológicos. Pero, durante la división celular, el ADN
se encuentra en su forma compacta de cromosoma para hacer posible la transferencia
a nuevas células. [1]
El ADN; esta molécula es fundamental para la vida, es la molécula de la herencia. Está
presente en cada célula viva y, por medios químicos, transmite de generación en
generación todas las instrucciones para formar cada organismo que existe y ha existido
sobre la faz de la Tierra. Es muy antigua y pudo haber marcado el origen de la vida hace
3870 millones de años. Sin embargo, no fue hasta abril de 1953 que se propuso por
primera vez su estructura molecular, es decir, un modelo que nos ayudara a entender
la forma de esta molécula: la famosa doble hélice [2]

El aislamiento de ADN vegetal presenta una serie de retos que requieren kits diseñados
específicamente para tratar con los hidratos de carbono, los fenólicos y otros
compuestos abundantes en los tejidos vegetales. Las paredes celulares de las plantas
pueden ser muy difíciles de interrumpir y los lisados suelen contener cantidades
importantes de compuestos como fenólicos, taninos y polisacáridos complejos que
pueden afectar a la calidad del ADN y del ARN e inhibir las reacciones posteriores. [3]

1. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

1.- En el vaso de precipitado pequeño echa 3 cucharaditas de detergente lavavajillas.
2.- Añade una cucharada de sal.
3.- Añade 25 mililitros de agua destilada. Es necesario utilizar la pipeta para extraer la
cantidad de agua adecuada
4.- Mantener en un baño de hielo esta disolución.
5.- Corta la zona central del vegetal elegido en cuadrados.
6.- Tritura los trozos del vegetal (en el vaso de precipitado grande) con un poco de agua
en la batidora (la mezcla de células y agua debe ser opaca), accionando 2 veces las
cuchillas a impulsos de 10 segundos. Así se romperán muchas células.
7.- Mezcla en el recipiente grande el triturado celular con la disolución inicial del vaso.
8.- Agita vigorosamente la mezcla durante al menos 5 minutos, sin formar espuma.
9.- Haz pasar el líquido obtenido por un colador.
10.- Retira 5 ml. de la mezcla a un tubo de ensayo y añade con la pipeta 5 mililitros de
alcohol enfriado a 0º C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara interna
del tubo de ensayo, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre la mezcla.
11.- Deja reposar durante 5 minutos hasta que se forme una zona turbia entre las 2
capas. (Mientras esperas este tiempo, puedes ir recogiendo y limpiando todos los
recipientes empleados anteriormente).
12.- Introduce una varilla justo debajo del alcohol (la zona turbia que queda entre las 2
capas). Remueve la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán enrollando
los fragmentos de mayor tamaño de ADN.
13.- Pasado un minuto, retira la varilla atravesando la capa de alcohol, con lo cual el
ADN quedará adherido a su extremo, con el aspecto de un copo de algodón mojado. [4]

7. OBSERVACIONES:

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro, ya que,

entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción “profesional” se realiza
añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN y que impiden que se unan
al ADN.

8. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Identificar los posibles resultados que se obtendrán al final de una práctica de

laboratorio

9. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES:

Se podrá aislar el ADN del material vegetal aplicando el procedimiento descrito en la

técnica; este es un procedimiento sencillo que por acción de los diferentes reactivos y
sustancias que vayamos a usar podremos obtener el ADN vegetal.
Tenemos una trituración del vegetal esto es necesario para aumentar el área superficial
de las membranas y de esta manera serán más fácil de disolver, necesitamos que la
bicapa de fosfolípidos de las membranas plasmáticas y la envoltura se rompa es por ello
que usamos el detergente.

8. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

9. CUESTIONARIO:

1.- Qué finalidad tiene el exponer las células a un detergente fuerte.

2.- Porque se debe triturar la materia vegetal.
3.- Realiza un dibujo de la acción del detergente sobre las células.
4.- Investiga y explica brevemente en qué consiste la electroforesis.