UNIVERSIDAD DE ESPECIALIDADES ESPIÍRITU SANTO

FACULTAD DR. ENRIQUE ORTEGA MOREIRA

ESCUELA DE MEDICINA

NOMBRE:
FECHA:
SUBGRUPO:

REPORTE DE LABORATORIO Nº7

TEMA: ANTIBIOGRAMA

Objetivo.-

Evaluar la sensibilidad o resistencia a diversos antibióticos de una bacteria de crecimiento

rápido aislada en prácticas anteriores. El método utilizado es el de difusión en agar o de Kirby-
Bauer.

Fundamento.-

1. Preparación del inóculo

La técnica de antibiograma sólo es aplicable a especies bacterianas en cultivo puro. Por ello,
previamente se procederá, si es preciso, a hacer un aislamiento en placa.

1.1 Material
 Tubo con 5 ml de solución salina
 Cultivo de la bacteria problema.
1.2 Procedimiento
Preparar una suspensión directa a partir del cultivo en placa usando el siguiente método:
 Tomar una colonia aislada con el asa y resuspender en el tubo de solución salina
frotando en la pared del tubo.
 Homogeneizar bien y ajustar a la densidad óptica con un patrón de turbidez Nº 0.5 de
MacFarland (0.5 de cloruro de bario de 0.048M y 99.5 ml de ácido sulfúrico 0.36M).
Esto equivale aproximadamente a una densidad de 108 células/ml. Diluir si es
necesario la suspensión o añadir más inóculo.
2. Siembra y colocación de los discos:

2.1 Material
 Placas con medio de cultivo Mueller-Hinton
 Hisopos
 Pinzas
 Discos 6mm de diámetro impregnado con antibiótico.

2.2 Procedimiento

 Impregnar una torunda con la suspensión del inóculo; escurrirla contra la pared del
tubo y sembrar con ella toda la superficie de la placa en varias direcciones hasta el
borde para asegurar el crecimiento bacteriano.
 Antes de los 15 minutos colocar los discos de antibióticos, con pinzas flameadas y frías.
Se dispondrán los discos sobre las placas de forman que disten unos 15mm del borde
la placa y unos 30 mm entre sí.
 Adherir cada disco al agar presionando ligeramente con las pinzas.
 Incubación de las placas a 37°C durante 18-24 horas.

3. Interpretación del antibiograma:

Medir el diámetro de los halos con el calibrador de vernier o regla graduada, considerando la
zona que está libre de crecimiento. La presencia de colonias en el interior del halo indica
contaminación, cultivo mixto o aparición de resistencia.

Consultar el cuadro para interpretar el antibiograma. Teniendo en cuenta la especie bacteriana

y el antibiótico, decidir si la bacteria es sensible (S), resistente (R) o su sensibilidad no puede
definirse con claridad (intermedio o indeterminada).
Resultados.-

Conclusiones.-

Consejos para la realización de un antibiograma

1. No se debe realizar el antibiograma sobre una población mixta de microorganismos,

debiéndose proceder previamente al aislamiento y cultivo en pureza de los distintos
microorganismos encontrados en la muestra clínica, para, posteriormente, realizar un
antibiograma para cada uno de los distintos tipos de microorganismos de significación clínica
hallados.
2. No deben incluirse un número muy elevado de antibióticos.

Referencias bibliográficas

 Guías de prácticas de Microbiología, Departamento de Microbiología II, Universidad

Complutense 2007/2008.
 Laboratory Experiments in Microbiology. Tenth Edition. Pearson 2013