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Ciencias Agrícolas __
Ingeniería y Tecnología __
Posibles Evaluadores: Relacione 4 Investigadores Internos expertos en el tema de su propuesta (Nombres completos,
correos electrónicos, número telefónico)
1. 2.
3. 4.
2.5 JUSTIFICACIÓN
El propósito de esta propuesta de trabajo es llevar a cabo la fermentación alcohólica por medio de la levadura
Saccharomyces cerevisiae obteniendo como producto un biocombustible que sea una alternativa más limpia,
renovable, evitando los efectos negativos que este tipo de compuestos generan y que además de un valor agregado
a un producto de desecho el cual no es aprovechado.
S. cerevisiae es un hongo unicelular que es capaz de seguir dos rutas metabólicas para obtener la energía necesaria
para llevar a cabo sus procesos vitales: la fermentación alcohólica y la respiración aerobia. Esta levadura es capaz
de sobrevivir siguiendo dos rutas metabólicas: una de ellas es la fermentación en la que la levadura está fuera de
contacto con el oxígeno, obteniendo la energía necesaria para llevar a cabo sus procesos vitales a partir de
metabolizar carbohidratos, produciendo etanol y CO2. Esta levadura, requiere que la glucosa sea catabolizada
mediante la glucólisis o ruta de Embden-Meyerhof, para obtener el piruvato el cual posteriormente por la acción de
enzimas específicas, se convierte anaeróbicamente en etanol y CO2. Las levaduras forman colonias color crema o
blanco, apariencia húmeda y brillante de bordes irregulares. La temperatura óptima de crecimiento es de 25 a 30 °C.
Puede producir ascosporas cuando hay requerimientos nutricionales adecuados. Las fuentes de carbono utilizadas
por las levaduras varían desde los carbohidratos hasta los aminoácidos. Entre los azúcares que puede utilizar están
monosacáridos como la glucosa, fructosa, manosa y galactosa entre otros. También son capaces de utilizar
disacáridos como la maltosa y la sacarosa y trisacáridos como la rafinosa. Uno de los azúcares que no puede
metabolizar es la lactosa.
ayuda
de una licuadora. Se realizará la separación de la fibra con la ayuda de un colador, con la finalidad de eliminar las
fibras contenidas y así obtener un mosto homogéneo; luego se llevará a un pasteurizado; a una temperatura de 70°C
por 5 minutos y se enfriará: a 30°C, de tal modo de realizar un choque térmico. Al mosto obtenido se realizarán
análisis fisicoquímicos y se almacenará a una temperatura de 5°C, con el fin de poder utilizar posteriormente en la
fermentación. Se realizará un análisis fisicoquímico de los residuos fermentables donde se determinará humedad,
cenizas, acidez, grados Brix y azucares reductores. Se determinará la humedad por secado y por diferencia de los
pesos, las cenizas se determinarán por incineración de la muestra a 650°C por 3 horas. El índice de acidez se
determinará por el método de titulación directa; así como la acidez total se determinará en las muestras utilizando
Hidróxido de Sodio al 0.1N, utilizando como indicador fenolftaleína. El contenido de azucares reductores, por el
método DNS, utilizando 3,5-ácido dinitrosalicílico y espectrofotometría a una longitud de onda de 540 nm. Para la
determinación de la densidad se utilizará el método del picnómetro y los grados Brix con un refractómetro ABBE, el
pH con un pHmetro. Se evaluarán y se llevarán a cabo las condiciones óptimas de fermentación usando el
microorganismo Saccharomyces cerevisiae, para esto se tendrán en cuenta las variables levadura (gr/L) y Relación
Agua: Mosto para eliminar los microorganismos indeseables en la mezcla mosto-agua, ésta se calentará a una
temperatura aproximada de 70-73 °C, y enseguida se dejó enfriar hasta los 40 °C. La activación de la levadura
Saccharomyces cerevisiae, se realizó en 100 ml de mosto, incubando por un tiempo de 30 a 45 minutos. Se realizará
la mezcla mosto-agua-microorganismo, seguido esta será aireada (la aireación se llevó a cabo mediante adición de
O2) durante dos horas, esto con la finalidad de aumentar la concentración de oxígeno disuelto en el medio, esencial
para el desenvolvimiento de las levaduras. Se mantendrá una temperatura entre 29 a 31 °C, siendo estas
temperaturas óptimas para el desarrollo de esta levadura, se tomarán muestras a ciertos intervalos de tiempo, para
determinar la cantidad de azucares reductores totales y pH. Se aplicaron análisis de varianza (ANOVA), para un
Diseño Factorial 3x2. Para poder recuperar el producto (bioetanol) se realizará una destilación luego se llevará a
cabo la caracterización del producto, en donde se procederá a realizar pruebas para la identificación de alcoholes; se
llevará a cabo la reacción con el reactivo de Lucas y la oxidación con K 2CrO4 y se obtendrá el espectro FTIR del
compuesto y se comparará con los reportados en la literatura.
Tal como se describió en la metodología se obtuvo un mosto de 200ml con la materia prima usada; cascaras de mango. Para la
evaluación de la fermentación se realizó una relación de 35:65 en la relación agua: mosto con 1,5g de levadura Saccharomyces
cerevisiae, esto de acuerdo con los resultados en (Aurora & Barrera, 2015) los cuales reportan que a estos parámetros se produce
la mayor concentración de etanol.
Para iniciar el proceso de fermentación se activó la levadura Saccharomyces cerevisiae 0,2% en 100 ml de mosto a una
temperatura de 30°C; se realizó la mezcla mosto-agua-microorganismo para ser almacenada en Erlenmeyer que funciono como
biorreactor. La fermentación se llevó a cabo durante un lapso de 3 semanas (21 días) a temperatura ambiente.
° Brix 9 6 5,2
Tiempo de
0 7 21
fermentación (días)
Tabla 1 Degradación de la glucosa durante el proceso de fermentación.
En la figura 1 se puede observar la descendencia de los ° Brix con respecto al tiempo de fermentación del mosto, registrado al inicio
(día 0) así como a lo largo de la fermentación (día 21). También podemos deducir que la mayor disminución se da entre el día 0 y el
día 7, a partir del día 7 se vuelve lenta la disminución lo cual indica que l fermentación alcohólica avanza y la concentración de
etanol aumenta, la acción de las enzimas se ve frenada por la concentración de etanol; concordando con lo reportado por (Hansen,
2000).
Teniendo en cuenta que la fermentación alcohólica se inició con 9° Brix y termino con 5,2° Brix podemos decir que el rendimiento es
bueno esta fermentación se dio gracias a la reacción cinética en donde los azucares presentes en el mostro se convierte en
bioetanol y dióxido de carbono, esta es definida por la siguiente expresión estequiométrica:
Después de terminar la fermentación se realizó una destilación simple del mosto donde los vapores producidos son inmediatamente
canalizados hacia un condensador, el cual los enfría y condensa de modo que el destilado queda puro, este procedimiento se
realizó por 3 horas controlando la temperatura a 80°C mediante el uso de un termómetro, en donde por diferencia de punto de
ebullición se separó el alcohol del agua del mosto, una vez terminada la destilación se enfrió la muestra a temperatura ambiente y
se obtuvo 30,5 ml de bioetanol. El porcentaje de rendimiento se definió en la ecuación 2.
El porcentaje de rendimiento fue bajo, pues en las tres horas de clase no se alcanzó a destilar los 200 mL de mosto.
Se quería caracterizar el bioetanol por medio de ensayos de identificación de alcoholes en donde se usaría el reactivo de Lucas
para determinar qué tipo de alcohol se produjo así, el bioetanol obtenido no hubiera reaccionado significativa debido a que el etanol
es un alcohol primario. Los alcoholes terciarios reaccionan inmediatamente con el reactivo de Lucas para producir turbidez,
mientras que los alcoholes secundarios lo hacen en cinco minutos. También se desea realizar una oxidación del alcohol por medio
de K2CrO4 la cual nos indicaría si el producto es un alcohol primario. Cabe resaltar que este tipo de análisis son de tipo cualitativos
debido a que nos permite identificar si el alcohol obtenido es primario o no, como se esperaba; debido a que no se tenía la
disponibilidad de los reactivos antes mencionados para los ensayos descritos, no se pudieron realizar. Además, se quería realizar
otro ensayo cualitativo el cual permite determinar si el alcohol primario obtenido fue bioetanol, esto por medio de espectros FTIR
donde se puede diferenciar de una manera más clara si el producto es etanol, a continuación podremos observar un espectro FTIR
tomado de una base de datos para así poder ser comparado, pero por cuestiones ajenas a nosotros no se permitió el uso de la
técnica.
Basados en los resultados del comportamiento en los ° Brix podemos analizar que la fermentación se llevó a cabo con el
microorganismo fermentador utilizado Saccharomyces cerevisiae fue exitoso; además de que las cascaras de mango resultan ser
una buena fuente de hidratos de carbono para la producción de alcohol sin la necesidad de ser sometidas a procesos químicos
como la hidrólisis, teniendo un producto que puede tener una aplicación en el campo de los biocombustibles como una alternativa
limpia, renovables y sostenible. Otorgando valor agregado a productos de desechos a nivel agroindustrial.
4. CONCLUSIONES
• Se obtuvo etanol por medio de la fermentación alcohólica de los residuos fermentables del Mango, usando la levadura
Saccharomyces cerevisiae, en un periodo de una semana.
• Del presente trabajo se puede observar que la cantidad aproximada de azúcares va disminuyendo lentamente a medida
que pasan los días, esto se debe a que los microorganismos, en ese tiempo comienzan a reproducirse, y es directamente
proporcional a la cantidad de solidos solubles (° Brix).
• Se obtuvo 30.5 mL de bioetanol con un porcentaje del 15,25%, este rendimiento no fue bueno pues no se alcanzó a
destilar en su totalidad el mosto.
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510.
6. PRODUCTOS ENTREGABLES
Aplicación del (Describa las posibles aplicaciones y utilidad que tendrán los resultados del proyecto)
Conocimiento
Sector Beneficiado
(Marque con una X el o los Social __ Económico X Empresarial __ Industrial X
sectores que se verán
beneficiados de los Educativo__ Ambiental X Comunidad Científica __
resultados del proyecto)
Personas, Comunidades (Describa las características de los beneficiados y la cantidad aproximada de los mismos)
o Entidades Beneficiadas
8. PRESUPUESTO
TOTAL 1.248.055