Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
1
LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA
O Material pessoal (bolsas cadernos, mochilas, agasalhos, etc.) deve ser mantido longe das
bancadas de trabalho. Utilizar na bancada somente o material necessário ao trabalho prático,
como: roteiro de aula, papel e lápis ou caneta para anotações;
Descarte de material:
a) Materiais contaminados devem ser colocados nos recipientes próprios, existentes nos
laboratórios. NUNCA deixá-los nas bancadas ou pias;
b) Placas de petri deverão ser deixadas tampadas sobre a bancada;
c) Lâminas fornecidas para visualização deverão ser deixadas sobre as bancadas;
d) Tubos com culturas deverão ser deixados nas estantes.
2
LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA
INTRODUÇÃO
O aluno deve entender que qualquer falha na organização levará a falha total do
experimento.
PROCEDIMENTO
6 placas de petri
10 tubos de ensaio com tampa ou rolha de algodão
1 frasco pequeno de boca larga com rolha de algodão
água destilada em um frasco
Pipetas de 1 mL
Pipetas de 100 µL
Dois swabs
Duas alças de drigalski
3
-Quando o vapor sair de forma contínua, fechar a válvula
-Desligar o aparelho e esperar o ponteiro do manômetro chegar a zero para então abrir a válvula
de escape
Por que motivo utilizou-se papel permeável? Por outro lado, porque este papel deve ser
resistente?
4
LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA
A técnica de contagem em placa é a técnica mais utilizada para determinar o tamanho de uma
população microbiana. São aplicados três princípios:
Considera-se que cada colônia formada a partir do inoculo foi originada de um único
microrganismo,
Considera-se que o inoculo original é sempre homogêneo
Considera-se que não existe agregação de células
Para que a contagem seja realizada corretamente, é necessário que apenas um número limitado
de colônias tenha crescido na placa. Normalmente são realizadas contagens em placas contendo
entre 25 e 250 colônias. Para que isso ocorra é necessário realizar diluições seriadas.
5
Técnica da diluição seriada
Na diluição seriada, o inoculo é diluído em uma série de tubos de diluição. Cada tubo terá uma
fração do número de microrganismos presentes no tubo anterior. Posteriormente, uma alíquota
de cada um destes tubos será transferida para placas de Petri contendo meios de cultura, onde
ocorrerá o crescimento de colônias e será possível fazer a contagem. O número de colônias será
utilizado na determinação da quantidade de bactérias presentes na amostra original
PROCEDIMENTO
Porque você utilizou a diluição seriada e não a saliva pura para o inóculo de microrganismos em
placas para a contagem?
Por que o meio deve ser colocado assepticamente nas placas e tubos?
6
LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA
Utilizado quando se deseja obter colônias isoladas a partir de um material que contenha
uma mistura de microrganismos.
Uma alíquota de uma suspensão microbiana (Ex: 0,1 ml) é depositada no meio de
cultura com uma pipeta e então espalhada com a alça uniformemente.
Cálculo:
7
Exemplo:
Foram contadas 150 Unidades formadoras de colônia (UFC) na placa de Petri correspondente a
quinta diluição de uma amostra (1/10000; índice de diluição 10.000). Quantas UFC teremos em
1 ml da amostra original?
A diluição pode ser feita transferindo-se 0,1ml da amostra para 0,9ml do meio de cultura
esterilizado, ou qualquer outra diluição (1/2, ¼, 1/8...). Neste caso, aplica-se uma regra de três
simples para obter o número de UFC em 1ml da cultura original.
PROCEDIMENTO
Escolher uma colônia de alguma das placas do experimento anterior. Coletar de forma asséptica
com a alça de repique e inocular em uma placa de petri esterilizada pela técnica do esgotamento
por estrias. Incubar em estufa a 37º C por 24 a 48 h.
Quantas unidades formadoras de colônia havia na placa escolhida para a contagem? Porque
você a escolheu?
Se a colônia que você escolheu era visivelmente separada das demais, porque realizar uma
inoculação de esgotamento por estrias?
8
LABORATÓRIO DE MICROBIOLOGIA
PROCEDIMENTO
Utilizar a placa em que foi realizado o esgotamento por estrias na aula anterior.
Transferir uma colônia isolada para um tubo contendo meio de cultura sólido e incubar em
estufa a 37º C por 24 a 48 h.
9
Laboratório de Microbiologia
Prof. Juliana
INTRODUÇÃO
Coloração diferencial
Sua finalidade é separar as bactérias em dois grupos de acordo com a cor revelada
durante o processo.
Com base nas diferenças existentes na estrutura de suas paredes, as bactérias são
classificadas como bactérias Gram positivas ou Gram negativas.
Corante primário: Violeta de genciana _ cora células gram positivas e gram negativas de
roxo
OBJETIVO
10
MATERIAL E MÉTODO
Material
- Esfregaço bacteriano
- Cristal violeta
-Safranina
- Iodo (Lugol)
-Álcool
-Microscópio óptico
-Óleo de imersão
-Pipeta de pasteur
Procedimento
11
Laboratório de Microbiologia
Prof. Juliana
Material
- Dois tubos contendo 5 ml de solução salina esterilizada
- Três tubos contendo desinfetantes previamente diluídos (1 ml de desinfetante para 4
ml de água). Utilizar 3 tipos diferentes de desinfetantes: (álcool 70, hipoclorito,
clorexidina, glutaraldeído, triclosan, etc)
- Uma placa de petri contendo Agar nutriente - Alça de repique
- Pipeta de 1 ml
PROCEDIMENTO
Transferir uma alçada do microrganismo obtido nos experimentos anteriores para um
tubo contendo 5 mL de solução salina
Pipetar 0,5 ml do microrganismo a ser utilizado (cada grupo realizará o experimento
com um microrganismo) e transferir para o tubo contendo salina e para os três tubos
contendo desinfetantes.
Aguardar 15 minutos
Dividir a placa contendo Agar nutriente marcando o fundo com caneta, anotar o
desinfetante correspondente a cada setor e o microrganismo utilizado.
Semear com alça de repique no setor correspondente
Incubar a 37ºC por 48h e anotar os resultados. Contar o número de colônias, quando
possível.
12
Laboratório de Microbiologia
Prof. Juliana
As hifas podem ser cenocíticas ou septadas. Possuem hifas septadas os fungos das
Divisões Ascomycota, Basidiomycota e Deuteromycota e hifas cenocíticas, os da
divisão Zygomycota.
13
desprender do micélio vegetativo e cumprir funções de propagação, uma vez que as
células fúngicas são autônomas.
- blastoconídios,
- artroconídios
- clamidoconídios.
14
REPRODUÇÃO DOS FUNGOS
1) fragmentação de artroconídios;
4) produção de conídios.
15
Conídios de Aspergillus agrupados em forma de cabeça, ao redor de uma vesícula.
Fonte:
http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_pos2003/const_microorg/f
ungos.
Roteiro
Material
- placa de petri contendo Agar Sabouraud
- Fita adesiva
-Azul de lactofenol
-Lâminas de vidro
- Microscópio óptico
-Luvas de procedimento
Procedimento.
Expor o meio de cultura em um local de escolha abrindo a placa de Petri por 5 minutos.
A placa deve então ser fechada e o meio incubado a temperatura de 28 graus Celcius por
uma semana.
Na semana seguinte, observar o crescimento das culturas fúngicas. Escolher uma
colônia que esteja bem definida e separada das outras, encostar a fita adesiva
delicadamente na superfície da colônia. Depositar uma gota de azul de lactofenol na
lâmina de vidro e colar a fita adesiva sobre esta gota. Observar ao microscópio em todas
as objetivas.
16