Practicas de Microbiologia

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PRACTICA N 3
Morfología bacteriana y métodos de coloración

Figura 1. Forma bacteriana

Fuente: https://www.saberdeciencias.com/apuntes-de-microbiologia/141-
microbiologia-bacterias-forma-y-tamano

V. RESULTADOS
Se observó en el microscopio, las siguientes muestras:

Figura 2. Preparacion humeda con Tincion Gram. A: Estrepbacilos. B:

Diplobacilos
Fuente: Elaboración propia
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Figura 2. Bacilos con Tincion Gram

Fuente: Elaboracion propia

Figura 4. Mycobacterium tuberculosum con tinción de Ziehl-Neelsen

Fuente: Elaboración propia

Figura 5. Stafilococos. A: Stafilococos con aumento

Fuente: Elaboracion propia
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Figura 6. Estreptococos con tinción Gram

Fuente: Elaboración propia
VI.DISCUSION

La tinción Gram es una tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las
bacterias en dos grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.
Esta tinción se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene
afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana. Posteriormente, se coloca lugol, el
cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formación de un
complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared
bacteriana. En seguida, se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la
pared bacteriana y cierra los poros de la misma, también destruye la membrana externa
de las bacterias Gram negativas debido a que ésta es soluble a la acción de solventes
orgánicos, como la mezcla de alcoholacetona. Las bacterias Gram positivas, al contener
una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este complejo, mientras
que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano.
Por último, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de
contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal
violeta-yodo ( Popescu & Doyle, 1996). De acuerdo a nuestros resultados pudimos
observar Streptococos Gram +, stafilococos Gram –bacilos Gram +, diplobacilos Gram +
y estreptobacilos Gram +.

La tinción de Ziehl-Neelsen es la técnica comúnmente usada en el diagnóstico rutinario

de tuberculosis. Es una técnica rápida, fácil y de bajo costo,24 lo que permite que se pueda
realizar en casi cualquier laboratorio clínico. Esta tinción permite diferenciar a las
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bacterias en dos grupos: aquellos que son capaces de resistir la decoloración con alcohol-
ácido (se muestran de color fucsia) y aquellos que no lo son. La tinción se basa en colocar
carbol-fucsina y calentar la preparación ligeramente para solubilizar las ceras, lípidos y
otros ácidos grasos de la pared celular para que permita el paso libre del colorante, el cual
tiene una enorme afinidad por los ácidos micólicos presentes en la pared. Al enfriar con
agua, los componentes de la pared vuelven a solidificar, resistiendo la acción abrasiva del
alcohol-ácido, y el azul de metileno se utiliza como contratinción (Prescott, Harley &
Klein, 2002). Nuestros resultados muestran mediante la tinción de Ziehl-Nielsen a
Mycobacterium tuberculosum de color fucsia, mostrando así su resistencia alcohol-acido.

VII. CONCLUSIONES

Los Streptococos son Gram +; stafilococos, Gram –; bacilos, Gram + ;diplobacilos ,

Gram + y estreptobacilos Gram +. Todos se observaron mediante la tinción Gram.

Mycobacterium tuberculosum se observa mediante la Tincion Ziehl-Nielsen y muestra

resistencia a Alcohol acido, tomando un color fucsia

VIII. REFERENCIAS

Popescu, A., & Doyle, R. J. (1996). The Gram stain after more than a
century. Biotechnic & histochemistry, 71(3), 145-151.

Prescott, L. M., Harley, J. P., & Klein, D. A. Microbiology. 2002. Dubuque, IA:
McGraw-Hill Higher Education.
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IX. CUESTIONARIO

1. Dibuje componentes de pared celular del microorganismos Gram y

explique ¿Qué función cumple cada uno de ellos?

2. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos Gram –

y explique la función que cumple cada uno
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3. Explique el fundamento de coloración Gram y esquematice

Esta tinción se basa en colocar como colorante primario cristal violeta, el cual tiene
afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana. Posteriormente, se coloca lugol, el
cual sirve como mordiente e impide la salida del cristal violeta por la formación de un
complejo cristal violeta-yodo que satura los espacios del peptidoglicano de la pared
bacteriana. En seguida, se coloca una mezcla de alcohol-acetona, la cual deshidrata la
pared bacteriana y cierra los poros de la misma, también destruye la membrana externa
de las bacterias Gram negativas debido a que ésta es soluble a la acción de solventes
orgánicos, como la mezcla de alcoholacetona. Las bacterias Gram positivas, al contener
una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este complejo, mientras
que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano.
Por último, se coloca safranina, la cual funciona como un colorante secundario o de
contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal
violeta-yodo

4. ¿A que se denomina mordiente y mencione 3 ejemplos?

Son los reactivos o sustancias que prepararan al tejido para la coloración. Los mordientes,
aunque no son colorantes, tienen gran importancia en algunas técnicas de tinción. Los
mordientes intensifican la tinción porque aumentan la afinidad de la célula por el
colorante. También se pueden utilizar para producir un engrosamiento de ciertas
estructuras celulares externas, como los flagelos, que debido a su delgadez no podrían ser
visualizados de otra forma.

El Alcohol Etílico, por ejemplo, fija, deshidrata, y, si su acción no se prolonga, viabiliza

la coloración. Del mismo modo, el ácido crómico actúa como mordiente y fijador. Otros
fijadores, en cambio, modifican las características colorantes del tejido: los ácidos pícrico
y óstnico, por ejemplo, perjudican la tonalidad de la hematoxilina.

5. Mencione tres generos que sean Coccos Gram positivos, Bacilos Gram +,
Cocos Gram – y Bacilos Gram -.
Cocos Gram +: Streptococos mutans, Staphylococs aureus, Planococos ficus
Bacilos Gram +: Escherichia coli, Salmonella pigly, Lactobacillus gassei,
Lactobacillus salivarus
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Cocos Gram -: Neisseria meningitidis, N. gonorrhoeae,
Bacilos Gram -: Bacillus cereus, B. anthracis

6. Dibuje los componentes de la pared celular de los microorganismos acido

alcohol resistentes. Y explique la función que cumple cada uno de ellos.

7. ¿Cuál es el fundamento de coloracion Zielh Nelsen? y esquematice.

La tinción se basa en colocar carbol-fucsina y calentar la preparación ligeramente para

solubilizar las ceras, lípidos y otros ácidos grasos de la pared celular para que permita el
paso libre del colorante, el cual tiene una enorme afinidad por los ácidos micólicos
presentes en la pared. Al enfriar con agua, los componentes de la pared vuelven a
solidificar, resistiendo la acción abrasiva del alcohol-ácido, y el azul de metileno se utiliza
como contratinción

8. Mencione cuatro líquidos biológicos en los cuales se encuentre Mycobacterium

tuberculosis

Los especímenes o muestras más peligrosas se encuentran en las secreciones respiratorias,

los esputos, la orina, el aspirado gástrico o bronquial y el líquido cefalorraquídeo y
pleural. Ademas tambien se encuentra en el líquido cefalorraquídeo, líquido pleural,
líquido sinovial, líquido pericárdico, biopsias para cultivo, abscesos, aspirados,
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crecimiento de colonias aisladas en medios de cultivo, expectoraciones, aspirados
endotraqueales y lavados bronquioalveolares.