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GRADO: 3ro
CODIGO: 2011-111085
Año 2017
DETERMINACION DE PROTEINAS – METODO DE LOWRY
I. OBJETIVOS
Determinar las proteínas aplicando el método de lorwy con uso de matariles y reactivos
aplicados con este método
El color que se forma se debe a la reacción del cobre con la proteína, La intensidad de color
depende del número de aminoácidos aromáticos presentes en especial la tirosina y el triptófano.
La técnica se basa en la reducción de una mezcla de ácidos que forman el reactivo cromógeno
de Folin – Ciocalteau por la oxidación de los aminoácidos aromáticos de las proteínas.
Se utiliza cobre como catalizador de la reacción ya que el ultimo forma un quetalo con la
estructura peptídica que facilita la transferencia de electrones a la mezcla cromogenica de
ácidos, produciendo una o más especies reducidas las cuales tienen un característico color azul
con una λ Max 745-750 nm. y una λ min a 405 nm.
Al producirse dicha reacción hay un cambio en el color de la muestra que puede ser cuantificado
determinando la absorbancia a 660 nm. Dentro de determinados rangos de concentración de
proteínas existe una relación lineal entre C y Abs660nm. A concentraciones altas de proteínas la
linealidad se pierde y por lo tanto este método no será adecuado para determinar la C real. El
rango adecuado es de entre 5 a 100 microgramos de proteína. Existe una amplia lista de
sustancias (como buffers, detergentes, lípidos, etc.) que interfieren con este ensayo y por lo
tanto afectan la determinación de la C real.
Reactivos:
Tomar 50 gr. de frijol y moles hasta una granulometría < de 60 mesh. Reservar una porción
para determinación de Nitrógeno total.
Preparar una suspensión de 10% en soluciones de NaCI 0.15 M y agitar por 1 hora
Determinar el contenido de proteínas por el método de Lowry
La muestra debe ser preparada a partir del extracto haciendo una dilución de 1/20 y
tomando alícuotas de 0.2 y 0.3 ml.
1. Solución alcalina:
CuSO4 2g
Agua destilada 100 mL
- Diluir un volumen de reactivo estoque (5) con (2) volúmenes de agua destilada. Es
recomendable titular con NaOH 1N, de tal forma que corresponda a un ácido 1N
Esperar 10 minutos
Esperar 30 minutos y leer la absorbancia a 660 nm.
𝑦̂ = 0.14365 + 0.08366 𝑥̂
0.4550 − 0,14365
𝑥̂ = = 𝟎. 𝟑𝟕𝟏𝟕 𝒎𝒈
0.08366
CONVIRTIENDO
159.788 mg a gr : 159.788 mg/1000mg = 0.159788 gr.
Si
0.159788 gr hubo en 10 gr de muestra (harina). ¿Cuánto habrá en total (100%)?
0.159788 gr ----------- 10 gr M
X ------------- 100 %
X = 1.5978 %
1.5979 % x 1000 = 15.978 g/Kg proteína.
VII. CONCLUSIONES