UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIAS E INGENIERÍA EN ALIMENTOS

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

Carrera: Ingeniería en Alimentos.

Asignatura: Microbiología de los Alimentos.

Nombres: Bonilla Andrés, Chacón Evelyn, Chicaiza Mauricio, Martínez Mariano, Naula
Daysi.

Docente: Ing. Liliana Cerda.

Nivel: Tercero Paralelo: “B”.

Ciclo Académico: Marzo-Agosto 2018.

Fecha: 19/06/2018.

Práctica: #7

Tema: Tinción Diferencial.

1. Objetivos:
● General:
Identificar las distintas técnicas de tinción para capsulas y endoesporas
presentes en diferentes microrganismos

● Específicos:
➢ Identificar que colorantes se debe emplear para cada una de las
muestras.
➢ Observar el movimiento de bacterias vivas mediante el método de gota
pendiente.
➢ Identificar la forma de las bacterias mediante el uso de tinta china.
Discusión
Según (Jimenez, 2012) , la tinción de Ziehl-Neelsen es una técnica de tinción diferencial que
se basa en que las paredes celulares de ciertas bacterias que contienen ácidos grasos (ácidos
micólicos) de cadena larga que les confieren la propiedad de resistir la decoloración con
alcohol-acido, después de la tinción con colorantes básicos.
Con el frotis que se usó en el laboratorio se pudo determinar que las bacterias eran ácidos
resistentes ya que en los resultados no presentaron decoloración, con esto se puede deducir
que poseían ácidos micolicos en su pared celular.
En tinción de capsula se implementó la Tinta China, como técnica de contraste en
microscopia óptica, comparando la nitidez observada para con ello obtener una adecuada
apreciación del borde de las estructuras de los microorganismos, en donde la tinta china debe
ser puesta por encima del frotis y debe secarse el mismo para así observar en el microscopio
la muestra (Ordoñez, 2016).
Las endoesporas son células cuya función principal es asegurar la supervivencia de estas en
tiempos de tensión ambiental, por lo general su estructura se presentan en bacterias de los
géneros Bacillus, Clostridium y Sporosarcina (cocos), cuando sus condiciones óptimas para
vivir se ven afectadas (Villegas, 2014)
Debido a las múltiples cubiertas impermeables en las que están las endoesporas se han
desarrollado distintos métodos para teñir las mismas, en muchas de estas se debe usar debe
forzar con calor del mechero y colocando papel filtro con colorante, además del uso de la
safranina como contraste para poder visualizar mejor el microorganismo y sus esporas que
se encuentran dentro de los mismos (Rodríguez, 2017), sin embargo en la práctica se usó el
verde malaquita el cual es un colorante débilmente básico y por lo cual se une débilmente a
la bacteria, este colorante al ser calentado logra penetrar las paredes de esta y llegar a
introducirse a las endoesporas (Hunter, 2016).
Él método de la gota pendiente se utiliza para observar la movilidad de microorganismos
vivos ya qué se encuentran en un medio líquido; presenta además multitud de planos de
enfoque, con lo cual resulta más fácil la observación. Para nuestro caso utilizamos como
muestra streptococcus aureus y se observó la movilidad empleando él lente objetivo de
inmersión. Este método como resultado nos permite distinguir el movimiento debido a
flagelos (caótico e irregular), del movimiento debido a las corrientes (todas las células se
desplazan en la misma dirección) y del movimiento browniano (de las partículas inertes de
pequeño tamaño cuando se encuentra suspendidas (movimiento vibratorio e irregular)
(Narvaez, 2015).
Resultados
Tabla N. 1: Método de tinción de ácido resistente.
Muestra Colorantes
Tinción ácido resistente Fucsina fenicada
Alcohol ácido
Azul de metileno

Figura 1: Bacteria ácido resistente en lente de 100x microscopio óptico.

Tabla N. 2: Forma de la bacteria en muestra de tinta china.

Muestra Colorante
Tinción de cápsulas Tinta china

Figura 1: Objetivo 100X microscopio óptico con aceite de inmersión

Tabla N. 3: Bacterias en tinción de endoesporas.
Muestra Colorante
Tinción de endoesporas Verde malaquita (5%)
Safranina

Figura 3: Tinción de endoesporas (verde) y células (rosado) con él lente de 100x

microscopio óptico (inmersión).

Tabla N. 4: Movilidad de la bacteria en medio líquido.

Muestra Dilución
Método de la gota pendiente Agua destilada

Figura 4: Método gota pendiente en lente de 100x (inmersión).Movilidad y

presentación de seres vivos (streptococcus aureus).
Conclusiones

 Se identificó distintas técnicas de tinción, las que se utilizaron en la práctica de

laboratorio fueron la tinción de ácido resistentes, tinción de capsulas, tinción de
endoesporas utilizando y el método de la gota pendiente.
 Se identificó los colorantes para el desarrollo de cada uno de las técnicas de tinción
anteriormente mencionadas para la tinción acido resistente se utilizó para decolorar
alcohol ácido y azul de metileno para el contraste, tinción de capsulas se necesitó de
tinta china para así poder observar las capsulas en el microscopio óptico, en la tinción
de endoesporas se usó verde malequita debido que este colorante logra traspasar las
paredes de la célula y llegar a la espora que se encuentra dentro de esta. .
 Se observó el movimiento que producían las bacterias mediante el método de gota
pendiente las bacterias observadas tenían forma esférica por lo cual se determinó que
lo que vimos con ayuda del microscopio fueron cocos.
 Se identificó la forma de las bacterias mediante el uso de tinta china las cuales fueron
las capsulas y eran de color blanco debido al contraste que daba la tinta china.
Recomendaciones
 En necesario tener suma precaución al momento de realizar el método de gota
pendiente ya que el porta objetos es más dificultoso ya que este debe ser fijado en el
cubre objetos antes de ser adherido al porta objetos.
 En la tinción por capsula es recomendable el uso de una pequeña cantidad de muestra
ya que el uso excesivo de la misma podría ocasionar el no poder observar bien la
formas deseadas en el microscopio.
 El uso del microscopio es fundamental para observar bacterias por ello es
recomendable aprender a usarlo propiamente para no tener complicaciones en la
práctica, se debe tener cuidado en su manipulación.
Cuestionario

1. Señale 5 ventajas que proporcionan las cápsulas a las bacterias que lo

poseen
Es capaz de retener agua, actuando como fuente de reserva de agua para la
propia célula.
Actúa como medio de desplazamiento de las células que cuentan con esta
estructura, ya que no disponen de flagelos
También funciona como matriz adherente entre bacterias, aunque no llega a
formar colonias.
Actúa como medio de defensa impidiendo la acción fagocitico de otras
células.
La cantidad de agua en ella impide la deshidratación de la bacteria.

2. Indique las características más importantes de las endosporas

encontradas en bacterias.
Las endoesporas observadas con microscopía óptica muestran una gran
refringencia. Esto es debido al elevado índice de refracción, resultante de las
proteínas deshidratadas y concentradas en el pequeño espacio de la espora.
Prácticamente toda la materia seca de la bacteria está en la espora que posee
un volumen igual a la décima parte de la bacteria que la origino. Se colorean
en caliente con carlbolfucsina y no se decoloran cuando el frotis es lavado con
etanol.
3. Existen patógenos bacterianos que producen endosporas ¿Qué causan?
Los microorganismos detectan y se adaptan a los cambios en su
ambiente. Cuando se agotan los alimentos favorecidos, algunas bacterias
pueden llegar a ser motile para buscar alimentos, o pueden producir enzimas
para explotar recursos alternativos formando endoesporas.
4. Determine que sustancias químicas están presentes en los
microorganismos ácido-resistentes, ¿qué función cumplen?
Los ácidos micólicos
Son un tipo de ácidos grasos que están presentes en las paredes celulares de
las bacterias ácidos resistentes los cuales ayudan a resistir la decoloración
después de la tinción con colorantes básicos
 Micolatos de trehalosa
Constituyen el llamado factor de crecimiento en cuerdas, debido
a que son responsables de la agregación de los individuos bacterianos en
forma de cuerdas

Sulfolípidos de trehalosa:
Están localizados en la periferia de la P.C y parecen ser importantes factores
de
virulencia.En Mycobacteriumtuberculosis estos sulfolípidos de trehalosa fun
cionan como evasinas, esdecir, facilitan el que la bacteria escape a la acción
de los macrófagos inhibiendo la fusión fagosoma con el lisosoma

Bibliografía
Hunter, A. (24 de Agosto de 2016). Ugr.es. Obtenido de Ugr.es: http://www.ugr.es/~pomif/pom-
bac/pb-iii/pb-iii-3-esporas.htm
Jimenez, J. (2 de Marzo de 2012). Lab. Obtenido de Practice:
https://es.lab.com/doc/51863770/PRACTICA-4-ZHIEL-NEELSEN
Narvaez, J. (15 de Abril de 2015). Campus.Usal.es. Obtenido de Campus.Usal.es:
http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_odontologia/unidades/labv/LabMicro/Diag_dire
cto.html
Ordoñez, A. (14 de agosto de 2016). Tecnica de tinta china en celulas adherentes. Obtenido de
Artículo original producto de La investigación:
http://www.scielo.org.co/pdf/nova/v14n25/v14n25a01.pdf
Rodríguez, F. (27 de Octubre de 2017). franrzmn. Obtenido de franrzmn:
http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-esporas.htm
Villegas, R. (10 de Septiembre de 2014). Universidad de Sevilla. Obtenido de Universidad de
Sevilla: http://tv.us.es/tincion-de-endospora-bacteriana/