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GENÉTICA
La Nueva Biotecnología
Ingeniería Genética
• Ingeniería Genética: es la biotecnología que se concentra en el
estudio de la manipulación genética de un organismo con un
propósito determinado.
Nota: los ARNm de bacterias suelen ser policistrónicos, es decir que un mismo
ARNm codifica para varias enzimas.
Regulación de la expresión génica - Operón
En ausencia de lactosa:
Regulación de la expresión génica – Operón lactosa
En presencia de lactosa:
Regulación de la expresión génica – Operón triptofano
En ausencia de triptofano:
Regulación de la expresión génica – Operón triptofano
En presencia de triptofano:
Tecnología del ADN Recombinante - Elementos
• Vector: molécula de ADN que transfiere el ADN a clonar al genoma del huésped.
• ADN ligasa: enzima que forma enlaces covalentes entre el extremo 5’ de una
cadena polinucleotídica y el extremo 3’ de otra cadena polinucleotídica, uniendo
fragmentos de ADN. Se utiliza luego de la restricción.
Tecnología del ADN Recombinante - Etapas
5) Inserción del vector en el huésped. Esta célula posee la maquinaria genética necesaria
para expresar la información contenida en el ADN recombinante. A esta célula
modificada se la denomina célula recombinante.
ADN recombinante.flv
Tecnología del ADN Recombinante - Huésped
En procariotas:
• Transformación: se somete a la célula a tratamientos físicos y químicos para
que pueda captar moléculas de ADN que se encuentran en el medio externo.
Por ejemplo: Se Incuban las células y el plásmido a 0°C en solución de
CaCl2..Se aplican shocks térmicos a 40°C. Se pueden agregar agentes
permeabilizantes.
• Transducción: se introduce el ADN de interés mediante infección con un
virus.
En Eucariotas:
• Transfección: análogo a la transformación en procariotas.
Tecnología del ADN Recombinante – Identificación de la célula recombinante
• Gen reportero: expresa una proteína que proporciona al huésped una característica particular
fácilmente visible y que no posee en su forma salvaje. Por ejemplo, la producción de una proteína
fluorescente.
• Zona de origen: es donde se origina la replicación. Es necesaria para la replicación del plásmido.
• Zona de restricción: es la zona en la que debe actuar la enzima de restricción y donde se debe
insertar el ADN de interés. Es necesario que la enzima actúe en esta zona para evitar la pérdida de
las características antes mencionadas.
• Promotor: regulan la expresión del gen reportero y del gen de interés, convirtiéndolos en genes
constitutivos o regulados.
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) - Elementos
Es una metodología que permite obtener “in vitro” un gran número de copias de un
fragmento de ADN a partir de una cantidad mínima.
• Desoxinucleótidos trifosfato (dNTPs): que son el sustrato para polimerizar nuevo ADN.
• Dos cebadores (o primers): que son, cada uno, complementarios a una de las dos hebras del
ADN. Son secuencias cortas de nucleótidos, que son reconocidos por la polimerasa permitiendo
iniciar la reacción. Delimitan la zona de ADN a amplificar.
• ADN polimerasa: con temperatura óptima alrededor de 70ºC (la más común es la Taq
polimerasa).
• Termociclador: aparato que va a mantener la temperatura necesaria en cada una de las etapas
que conforman un ciclo.
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) - Etapas
1) Desnaturalización: consiste en separar las dos hebras del ADN molde mediante
el empleo de la temperatura (se rompen uniones puente de hidrógeno entre las
bases). Es una fase corta que dura entre 20 y 30 a una temperatura de 94 a 95°C.
Pc r.av i
Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) - Mutagénesis