UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

FACULTAD DE INGENIERIA QUIMICA

CURSO: LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

TEMA: IDENTIFICACION DE ESCHERICHIA COLI

PROFESOR: Dra. SONIA ELIZABETH HERRERA SANCHEZ

GRUPO HORARIO: 90 G

ALUMNA: MALLQUI RIOS ODALIS

FECHA: 05/07/18

SEMESTRE: 2018 – A

CALLAO – PERÚ
INDICE

I. INTRODUCCION ................................................................................................... 3
II. OBJETIVOS .......................................................................................................... 4
III. MARCO TEORICO............................................................................................. 5
3.1 HISTORIA ...................................................................................................... 5
3.2 MICROBIOLOGIA........................................................................................... 5
3.2.1. CLASIFICACION ......................................................................................... 6
IV. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS DE LABORATORIO ......................... 8
4.1 MATERIALES Y REACTIVOS ........................................................................ 8
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL .................................................................... 9
VI. CONCLUSIONES ............................................................................................ 12
6.1 INFORME DE ENSAYO ............................................................................... 12
6.2 RESULTADOS OBTENIDOS ....................................................................... 12
VII. RECOMENDACIONES .................................................................................... 12
VIII. Bibliografia ....................................................................................................... 14
IX. Anexos ............................................................................................................. 15
 I. INTRODUCCION

Por lo general, las bacterias Escherichia coli (E. coli) viven en los intestinos de
las personas y de los animales sanos. La mayoría de las variedades de
Escherichia coli son inofensivas o causan diarrea breve en términos relativos.
Sin embargo, algunas cepas particularmente peligrosas, como la Escherichia coli
O157:H7, pueden causar cólicos abdominales intensos, diarrea con sangre y
vómitos.

Puedes estar expuesto a la Escherichia coli proveniente del agua o de los

alimentos contaminados, sobre todo de los vegetales crudos y de la carne de res
molida poco cocida.

La intención del presente trabajo es identificar la bacteria en una ensalada,

cuantificar al grupo microbiano, indicándonos la correcta o mala manipulación de
los alimentos que refleja la calidad sanitaria.
II. OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL

 Identificar la presencia de escherichia coli en una muestra de ensalada

de verduras sin tratar.

OBJETIVO ESPECIFICO

 Analizar si la cantidad de colonias están en el límite máximo permisible.

III. MARCO TEORICO

3.1 HISTORIA
En general, los hongos son microorganismos eucariotas pluricelulares
filamentosos, no presentan pigmentos fotosintéticos y son quimioheterótrofos
aerobios estrictos. A diferencia de las plantas, presentan un bajo grado de
diferenciación en los tejidos. Poseen pared celular contiene quitina un
polisacárido que le da rigidez y es responsable de su morfología y en ocasiones
celulosa. Algunos hongos presentan cápsula, formada por polisacáridos, con
propiedades inmunógenas y antifagocitarias.

La estructura o cuerpo vegetativo de un hongo se denomina talo. El talo está

formado por filamentos, o hifas, de unas 5 um de diámetro, que generalmente
están ramificadas. Las hifas son tubos largos que están formadas por la pared
celular de quitina (componente mayoritario) y el citoplasma con sus inclusiones
y núcleos con la información genética. En el citoplasma se realiza la actividad
bioquímica del hongo. Las hifas pueden estar separadas en células por paredes
transversales (septos) en los hongos superiores (Eumicetos), o carecer de
paredes en los hongos inferiores (Ficomicetos). El conjunto de hifas se llama
micelio. En el micelio se distinguen dos partes: una que penetra en el medio de
cultivo y se extiende por su superficie (micelio vegetativo), y otra que se proyecta
y contiene las esporas (micelio reproductor o aéreo).

Los hongos crecen por el extremo de las hifas (crecimiento apical). Una pequeña
cantidad de micelio es suficiente para la formación de un nuevo talo.

Se da comúnmente el nombre de moho a ciertos hongos multicelulares

filamentosos, dotados de un micelio verdadero, microscópicos, y cuyo
crecimiento en los alimentos se conoce fácilmente por su aspecto aterciopelado
o algodonoso.

3.2 MICROBIOLOGIA

Debido a que su pared celular es rígida no pueden englobar los alimentos

(pinocitosis, fagocitosis). Los extremos en crecimiento de las hifas expulsan
enzimas sobre la materia orgánica en que crecen. Las cadenas de carbohidratos
se rompen en compuestos más sencillos como glucosa o aminoácidos, lo
suficientemente pequeños como para absorberlos por las paredes de las hifas,
hasta el citoplasma del hongo. Según el tipo de sustrato nutritivo que empleen
se clasifican en:

1. Hongos saprófitos (utilizan materia orgánica muerta)

2. Hongos parásitos (organismos vivos, plantas o animales)

3.2.1. CLASIFICACION

Las formas y mecanismos de reproducción sexual y asexual son muy variados y

constituyen la base de la clasificación de los hongos. (Fig. 7.1)

1. Reproducción sexual: (Hongos perfectos) Por unión de gametos, estado

teleomorfo. Zigósporas, Ascósporas, Basidiósporas.

Zigomicetos. Hongos que se reproducen sexualmente por zigosporas.

Constituyen el grupo de Ficomicetos más evolucionado y mejor adaptado a la
vida terrestre.

Eumicetos (hongos superiores) abarcan a los ascomicetos y a los

basidiomicetos. Es característico de los mismos la posesión de un micelio
septado y la formación de conidiosporas. No presentan células flageladas.

Setas (hongos erectos): En el momento propicio, y en lugares cercanos a la

superficie, las hifas del micelio vegetativo de un hongo basidiomiceto, forman
una masa de crecimiento (cuerpo fructifero) de aspecto tisular denominado
plecténquimas (setas). Es la parte reproductiva de un conjunto más amplio. Una
vez desarrollado emite esporas de forma variable según las especies (p.ej.
100.000 esporas/h durante 4-5 días).

2. Reproducción asexual (hongos imperfectos) Los hongos que tienen

reproducción asexual o desconocida (estado anamorfo) se denominan
Deuteromycetos.

a. Gemación6 en levaduras (unicelulares)

b. Fragmentación de las hifas (utilizado para resiembras en laboratorio)
c. Esporulación por germinación de esporas

Las esporas son estructuras unicelulares de resistencia que contienen toda la

información genética necesaria para el desarrollo completo de un nuevo hongo.
La estructura del hongo que produce las esporas asexuales se denomina
conidiófora. Se forman por estrangulamiento del extremo de las hifas. Los
conidióforos son hifas especializadas que presentan gran diversidad de forma,
color, tamaño, tipo de septación, etc. Dichas estructuras formadoras de esporas
tienen gran importancia en la determinación taxonómica de los hongos. Las
agrupaciones de esporas que allí se forman se denominan conidios. Otros tipos
de estructuras formadoras de esporas son los Esporangios, Clamidosporas, etc.
Fig. 7.1.

Las esporangiosporas (esporas formadas en el interior de esporangios) de

hongos inferiores presentan a menudo flagelos y se denominan zoosporas.
Algunos hongos, como los dermatofitos, producen macroconidias y
microconidias (fig. 7.1).

Si las conidias se forman por fragmentación de la hifa en células individuales, se

habla de artroconidias o atrosporas (oidios). Estas células, se hallan rodeadas
en algunos hongos de una pared gruesa formada por condensación del
citoplasma y espesamiento de la pared, son formas de reproducción y resistencia
denominadas clamidosporas o clamidoconidias.
IV. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS DE
LABORATORIO

4.1 MATERIALES Y REACTIVOS

BOLSA ZIPLOC PLACA PETRI

MECHERO DE BUNSEN PIZETA

MUESTRA PROBLEMA PROBETA

AGAR: SABOURAUD SOLUCION SALINA

PIPETA LEJIA

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

 Desinfectar el área de trabajo con lejía y posteriormente esterilizar la placa

Petri, flameando hasta evaporar toda el agua contenida.
 Pesar 10g de la muestra problema (azúcar rubia), en base a la norma.

 Preparar la solución salina 0.08%, disolviendo 0.08g de NaCl en 1L de

agua destilada.
 Calentar el medio de cultivo (Agar Sabouraud), en baño maria, hasta que
todo el agar se funda. Luego se mide la temperatura, debe de estar a
60°C. La coloración del agar cambia a un tono translucido.

 La dilución se realiza en base a la norma; en el caso de la azúcar rubia,

se lleva a cabo 2 diluciones.
La primera consiste en agregar en un vaso precipitado la muestra y 90ml
de solución salina, agitar hasta obtener una mezcla homogénea.
La segunda, se ejecuta al pipetar 1ml de la mezcla de la primera dilución
y agregar 9ml de la solución salina, agitar.

 Colocar 1ml de la segunda dilución (10-2) en la placa Petri, de manera que

este esparcida por toda la placa, luego se añade 15ml de medio de cultivo.
 Tapar la placa de manera inmediata y dejar enfriar a temperatura
ambiente, hasta observar una apariencia gelatinosa.
 Incubar la muestra de 24-72 horas.

 Después de 72 horas, se hace la lectura de las placas.

 Se procede a llevar las placas al contador de colonias, el cual

proporcionara de manera más eficiente el número de colonias.

 Los mohos son identificados a través de sus características morfológicas:

filamentoso y por su color blanquecino.
VI. CONCLUSIONES

ANTES DESPUES

6.1 INFORME DE ENSAYO

 Muestra: Azúcar rubia

 Lugar de muestreo: Jr. Miguel Grau 373 - A.H. Año Nuevo
 Fecha de muestreo: 23/04/2018
 Fecha de ejecución: 24/04/2018

6.2 RESULTADOS OBTENIDOS

MUESTRA MICROORGANISMO LMP* RESULTADO

Azúcar rubia Moho 10 UFC/g 22x102 UFC/g

*Límite máximo permisible

VII. RECOMENDACIONES
 La muestra no cumple con las condiciones microbiológicas de calidad
sanitaria e inocuidad según la norma RM-591-2008/MINSA y RM-1020-
2010/MINSA, al presentar un UFC por encima del límite permisible, por lo
que no es apta para el consumo humano.

El factor que causo este resultado fue el numero de diluciones, se dio una
mala lectura de la norma y se realizo 2 diluciones cuando en realidad se
establece para el análisis 1 dilución.
VIII. Bibliografia
 http://sisbib.unmsm.edu.pe/m_recursos/publicacion/congresos/icbar_xvii/
pdf/cap06.pdf
 http://www.adiveter.com/ftp_public/E.coli.pdf
 Pierson M. & Smoot L. (2001) Indicator Microorganisms and
Microbiological Criteria. In: Food Microbiology. Fundamentals and
Frontiers. 2nd ed. Doyle M. Beuchat L. & Montville T. (Eds.) ASM Press.
USA.
 Maria Del Rosario & Vicente Calderón (1999) microbiología alimentaria:
metodología analítica para alimentos y bebidas. 2da ed. Madrid, España.
 Luis Roberto Alarcón (2004) manual de prácticas de microbiología básica
y microbiología de alimentos. 1ra ed. chihuahua, México.
IX. Anexos

ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA DE MIELES DEL SUDESTE DE LA

PROVINCIA DE BUENOS AIRES FRENTE A ESCHERICHIA COLI

En este trabajo se estudió la sensibilidad de Escherichia coli frente a mieles mediante

diferentes técnicas de evaluación de la actividad antimicrobiana. Empleando mieles del
sudeste de la provincia de Buenos Aires en concentraciones de 0, 1, 5, 10, 25 y 50% (p/v)
se analizó la actividad antimicrobiana de este producto natural frente a Escherichia coli
ATCC 25922. La concentración inhibitoria mínima (CIM) se determinó por el test de
dilución en serie, en medio líquido (caldo Mueller-Hinton y caldo Mac Conkey). La
concentración bactericida mínima (CBM) se evaluó en agar nutritivo y en agar Mac
Conkey. Además, se midió la actividad antibacteriana total por el método de difusión en
agar en placa. Se observó una reducción del crecimiento promedio del 96% en caldo
Mueller-Hinton y del 90% en caldo Mac Conkey, coincidiendo con CIMs de 50 y 25%
(p/v), respectivamente. Para las concentraciones evaluadas, en agar nutritivo no se
observó acción bactericida, mientras que en agar Mac Conkey se obtuvo una CBM
promedio de 25% (p/v). Con el método de difusión en agar en placa, todas las mieles al
50% (p/v) inhibieron el crecimiento de E. coli y una de ellas presentó actividad aún a
concentraciones menores (25, 10 y 5% p/v). Las diferentes metodologías resultaron
adecuadas para medir la magnitud de la actividad antibacteriana y mostraron que las
mieles son activas frente a E. coli a concentraciones de 25 y 50% (p/v). Los métodos de
dilución en caldo Mueller-Hinton y de difusión en agar en placa arrojaron valores de
inhibición concordantes.

Resultados

Los ensayos en caldo Mueller-Hinton mostraron que para todas las mieles la CIM fue
50% (p/v), entendiéndose por CIM la concentración que produjo una reducción mínima
de 90% en el crecimiento del microorganismo. Los valores promedio de inhibición del
crecimiento en relación con los cultivos control (en los cuales no se adicionó miel y se
midió el máximo crecimiento del microorganismo) fueron de 96%. Por otro lado, no fue
posible establecer en agar nutritivo las CBMs, esto es, las menores concentraciones de
miel que producen una reducción del crecimiento microbiano del 99,9%, ya que en todas
las placas se observó crecimiento. La siembra en caldo y en agar Mac Conkey mostró que
tanto la CIM como la CBM se obtuvieron con soluciones al 25% (p/v) de miel. Estos
resultados representaron diferencias significativas (p < 0,05) con respecto a los valores
de CIM y CBM obtenidos en caldo Mueller-Hinton y agar nutritivo, respectivamente.

Con el método de difusión en agar en placa se observó la presencia de halos de inhibición

del crecimiento de E. coli para todas las mieles, cuyos valores pueden observarse en la
Tabla 1. Los valores de los halos, superiores a 20 mm de diámetro, reflejarían que E. coli
sería extremadamente sensible a las soluciones de miel. La actividad antimicrobiana
debida a compuestos no peróxido de hidrógeno se detectó principalmente en la muestra
4.

En nuestro estudio, E. coli mostró susceptibilidad frente a todas las mieles evaluadas por los
métodos de dilución en serie y difusión en agar. Por este último método, se observó claramente
que la muestra 4 al 50% (p/v) tuvo la máxima actividad inhibitoria frente a E. coli, y fue además
la única miel que presentó actividad con soluciones al 25, 10 y 5% (p/v). La actividad
antimicrobiana total determinada por el método de difusión en agar muestra que E. coli es
sensible a todas las mieles en concentraciones de 50% (p/v). Esto podría deberse a que altos
niveles de la actividad antimicrobiana se asocian particularmente a los contenidos de peróxido
de hidrógeno, como resultado de una mayor actividad de glucoxidasa que de catalasa.

Resulta interesante señalar que las zonas de inhibición obtenidas en nuestro estudio para las
soluciones de miel al 50% (p/v) fueron mayores que las encontradas por Nzeako y Hadmi (8),
quienes también evaluaron mieles frente a E. coli ATCC 25922.

Los diferentes métodos mostraron que todas las mieles presentaron actividad antimicrobiana
en soluciones concentradas (25 y 50% (p/v)). La sensibilidad de E. coli frente a soluciones de
miel concentradas puede ser evaluada mediante las metodologías ensayadas, y los métodos
en caldo Mueller-Hinton y de difusión en placa muestran valores de inhibición concordantes.