FACULTAD DE TECNOLOGÍA MÉDICA

ESCUELA DE LABORATORIO Y ANATOMÍA PATOLÓGICA

ESPECIALIDAD: LABORATORIO

CURSO: BIOLOGIA MOLECULAR

DOCENTES: ALARCON JHONATAN

RIVAS CARDENAS ARTURO

ALUMNA: TICONA JUSTO XIMENA DANNA

2018
DETERMINACION DE LA CONCENTRACION DEL ADN:

INTRODUCCION:

La determinación de la concentración de ADN consiste en utilizar métodos en

las cuales una cierta cantidad de ADN extraido es utilizado para contabilizar su
concentración. Una de las propiedades del ADN es la eficiente absorción de luz
UV debido a la presencia de bases nitrogenadas a lo largo de la cadena, Cada
una de las bases tiene su propio y único espectro de absorción y por lo tanto
contribuye de manera diferente a la propiedad total de absorción de UV de una
molécula de DNA. Los ácidos nucleicos tienen un máximo de absorción a una
longitud de onda de 260nm

Los métodos más conocidos para determinar la concentración son: por

espectrofotometría, por fluorescencia con bromuro de etidio (electroforesis).

La espectrofotometría es una serie de métodos cuantitativos de análisis

químico que utiliza la luz para medir la concentración de sustancias químicas.
Se conocen como métodos espectrofotométricos según sea la radiación
utilizada como espectrofotometría de absorción visible, ultravioleta, infrarroja.

OBJETIVOS:

 Determinar la concentración del ADN mediante la espectrofotometría

 Conocer los protocolos para la realización de esta practica

 Observar si las muestras son puras o si existe algún contaminante.

LECTURAS

230 nm 260 nm 280 nm

Muestra 1 0.200 0.210 0.115

Muestra 2 0.175 0.350 0.210

Muestra 3 0.150 0.260 0.130

Muestra 4 0.260 0.390 0.300

Muestra 5 0.250 0.500 0.220

Muestra 6 0.190 0.430 0.350

Muestra 7 0.300 0.550 0.260

Muestra 8 0.220 0.330 0.270

CUESTIONARIO

1) DETERMINAR LAS CONCENTRACIONES DE ADN DE CADA UNA DE

LAS MUESTRAS

Para determinar la concentración de ADN en las muestras se calculara

con la siguiente formula:

[ADN] = A260 * factor de dilución * factor conocido

Donde: A260: absorbancia a 260 nm

El factor de dilución: 1/50 → 50

Factor conocido: Una absorbancia de 1,0 a 260 nm se corresponde con

una concentración de 50 ng/µL

(50 µg/mL) de dsDNA puro.

2) DETERMINAR LA PUREZA DE LOS PREPARADOS Y REALIZAR UN

COMENTARIO AL RESPECTO, CON CADA UNA DE LAS MUESTRAS

Pureza: DO260/DO280: determina la pureza del ADN, el rango de la

relación es de ≥ 1.8-2, <1.6 presencia de compuestos aromáticos, >2.1
contaminación con ARN

Si la relación es menor al rango significa que la muestra esta

contaminada

Capacidad de absorbancia de sustancias posiblemente encontradas en

la muestra:

Proteínas: 280 nm

Sales caotropicas, fenol, hidratos de carbono: 230 nm

DO260/DO230: Determina si existe contaminación por sales caotropicas,

fenol, hidratos de carbono. Si la relación da valores de 2.0-2.2 la
muestra es óptima. Si da menor a la relación está contaminada la
muestra
 3) LLENAR LA TABLA:

ADN DO260/DO280 DO260/DO230 COMENTARIO

Muestra 1 525 1.82 1.05 ADN de pureza aceptable,

contaminación por sales,
carbohidratos, fenoles

Muestra 2 875 1.67 2 Contaminación con

compuestos aromáticos o
proteinas, ADN puro sin
(carbohidratos, fenol, etc.)

Muestra 3 650 2 1.73 ADN de pureza optima

Muestra 4 975 1.3 1.5 Contaminación por

compuestos aromáticos o
proteinas, adn sin
contaminantes
(carbohidratos, fenol, etc.)

Muestra 5 1250 2.27 2 Contaminación por ARN,

ADN sin (carbohidratos,
fenol, etc.)

Muestra 6 1075 1.23 2.16 Contaminación por

compuestos aromáticos o
proteínas, ADN
sin(carbohidratos, fenol,
etc.)

Muestra 7 1375 2.115 1.83 ADN de pureza optima

Muestra 8 825 1.22 1.5 Contaminación por

compuestos aromáticos o
proteínas, ADN optimo sin
(carbohidratos, fenol, etc.)

BIBLIOGRAFIA

 BANCO NACIONAL DE ADN CARLOS III (Universidad de Salamanca);

PROGRAMA CONTROL DE CALIDAD DE MUESTRAS, (PAGINAS : 1-
4) DISPONIBLE EN : http://www.bancoadn.org/docs/programa-control-
calidad-muestras.pdf

 DNA Genotek Inc., una filial de OraSure Technologies, Inc ; Protocolo de

laboratorio para purificación manual de ADN a partir de una muestra de
0,5 mL 2012 ( paginas 3-4) disponible en :
https://www.dnagenotek.com/us/pdf/PD-PR-00216.pdf

 Unidad de síntesis y secuencias de ADN,Instituto de biotecnología de la

Universidad Nacional Autonoma de México; Cuantificacion del ADN,
[pagina web] URL disponible en:
http://www.ibt.unam.mx/sintesis/cuantificacion.html#top