“UNIVERSIDAD NACIONAL

FEDERICO VILLAREAL”

FACULTAD DE ODONTOLOGÍA

CURSO : Microbiología general y aplicada

DOCENTE : Blg. Nora Bravo Cruz

PRÁCTICA: Nº 10

TEMA : Pruebas inmunológicas: pruebas de

aglutinación, látex, hemaglutinación (grupo
sanguíneo), inmunocromatográfica, pruebas de
Elisa.
ALUMNA : Pérez Gonzales Eveline K.

Lima -PERU

2018
I. INTRODUCCIÓN
El sistema inmune está compuesto por células y sustancias químicas que participan
como defensa contra sustancias extrañas que tienen posibilidad de hacernos daño.
Las pruebas serológicas son muy utilizadas para el diagnóstico de enfermedades
que puede padecer un paciente.
En algunos casos cuando el paciente tiene sintomatología, se utiliza para el
diagnóstico determinándose si sufre de una enfermedad u otra, como el caso de las
aglutinaciones para el diagnóstico de fiebre tifoidea o la prueba de ELISA para el
diagnóstico de hepatitis viral en un paciente que puede estar ictérico.
En otros casos se puede determinar si el paciente es portador de una enfermedad
que puede estar en ese momento asintomática, como el caso de búsqueda de
antígeno de superficie de la hepatitis B en una persona que está aparentemente sana,
pues supone un riesgo en su atención.
Los grupos sanguíneos son un ejemplo de lo que nuestro cuerpo tiene y que se
diferencia de otros con antígenos y anticuerpos diferentes.

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II. OBJETIVO

Identificar el estado inmune de un paciente de acuerdo a las pruebas utilizadas.

Conocer las metodologías utilizadas en las diferentes pruebas serológicas
disponibles en el laboratorio clínico.
Identificar las pruebas utilizadas para diferentes enfermedades que se pueden
diagnosticar mediante pruebas serológicas y sus valores de referencia

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III. MATERIALES
Guantes
Láminas portaobjetos (2 por alumno)
Agitadores descartables (3 por alumno)
Pipetas descartables (1 por alumno)
Envase duro para descarte de láminas y agitadores
Gradillas: 1 por grupo de 4 alumnos
Láminas de cartón descartables (tarjetas)

Aglutinación
o Antígeno de Brucella para prueba en placa con gotero
o Antígeno de Salmonella para prueba en placa
o Suero positivo para
Brucella

o Micropipeta de 10-50 µL
o Muestras de suero
sanguíneo
Prueba de látex: rotavirus y prueba de embarazo
o Kit de embarazo prueba de látex
o Kit de rotavirus
Inmunocromatografía – Lateral flow – pruebas rápidas
o Kit de Legionella, Estuche para rotavirus, Streptococcus pyogenes,
influenza A y B.
Hemaglutinación – Grupo sanguíneo
o Kit de reactivos para grupo sanguíneo
o Muestras de sangre (una por alumno)
Plumón indeleble, plumón de pizarra y mota
Mandil, Jabón líquido, Alcohol gel y papel toalla

PROCEDIMIENTO
Realizar la lectura sobre grupos sanguíneos 10’
Precauciones de bioseguridad: uso de guantes.
Pruebas de aglutinación: explicación y demostración
Prueba de látex: explicación y demostración
Prueba de inmunocromatografía: explicación y demostración
Prueba de Elisa: explicación y demostración
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 Grupo sanguíneo: explicación y demostración
Realizar una prueba de aglutinación por alumno
o Colocarse guantes
o Entregar una muestra a cada alumno
o Entregar un gotero y una lamina
o Obtener plasma del tubo y colocar una gota en cada extremo de la lámina.
o Colocar una gota de antígeno de Brucella en placa y el de Salmonella
o Mezclar con el palito
o Balancear por dos minutos
o Leer si hay aglutinación o no
Entregar material para descarte en autoclave

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 IV. MARCO TEORICO

Las pruebas inmunológicas usan uno de los siguientes:

 Antígeno para detectar anticuerpos contra un patógeno en una muestra del

paciente
 Anticuerpo para detectar un antígeno del patógeno en una muestra del paciente

El procesamiento de las muestras varía, pero si es necesario retrasar el análisis, deben

refrigerarse o congelarse para impedir la proliferación de contaminantes bacterianos.

4.1. Pruebas de aglutinación

En las pruebas de aglutinación (p. ej., aglutinación con látex, coagregación), una
partícula (cuenta de látex, bacteria) se acopla con un reactivo antigénico o un anticuerpo.
La partícula compleja formada se mezcla con la muestra (como LCR o suero); si el
anticuerpo o el antígeno buscados están presentes en la muestra, producirán el
entrecruzamiento de las partículas, lo que se observa como una aglutinación.

Si los resultados son positivos, se realizan diluciones seriadas de la muestra y se

prueban nuevamente. La aglutinación de las soluciones más diluidas indica que existen
mayores concentraciones del anticuerpo o del antígeno en estudio. El título se informa
como la recíproca de la solución más diluida que produce aglutinación; p. ej., un título de
32 indica que la aglutinación se observa hasta la dilución 1/32 de la concentración inicial.

Generalmente, las pruebas de aglutinación son rápidas pero menos sensibles que
muchos otros métodos. También permiten determinar los serotipos de algunas bacterias.

4.2. Fijación del complemento

Esta prueba mide la cantidad de anticuerpos consumidores de complemento (o que lo
fijan) de una muestra de suero o LCR. Se usa para el diagnóstico de algunas infecciones
virales o micóticas, especialmente para la coccidioidomicosis.

La muestra se incuba con cantidades conocidas de complemento y del antígeno que es

el blanco del anticuerpo en estudio. El grado de fijación del complemento indica la
cantidad relativa de anticuerpos en la muestra.

La prueba permite medir los títulos de anticuerpos IgM e IgG, o puede modificarse para
detectar determinados antígenos. Es precisa, pero tiene aplicaciones limitadas, es
laboriosa y requiere muchos controles.

4.3. Enzimoinmunoensayos
Estas pruebas utilizan anticuerpos unidos a enzimas para detectar antígenos, y para
detectar y cuantificar anticuerpos. Entre ellas, se encuentran el enzimoinmunoanálisis
(EIA) y el enzimoinmunoanálisis de adsorción (ELISA).

Como la sensibilidad de la mayoría de los inmunoensayos es elevada, suele utilizárselos

con fines de rastreo o cribado. Pueden determinarse los títulos mediante la dilución
seriada de las muestras, como en los ensayos de aglutinación.
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Las sensibilidades de estas pruebas, aunque suelen ser bastante elevadas, pueden
variar de acuerdo con la edad del paciente, el serotipo del microorganismo o el estadio
clínico de la enfermedad.

4.4. Pruebas de precipitación

Estas pruebas miden la cantidad de antígeno o de anticuerpo en los líquidos corporales
a partir del grado de precipitación visible de complejos de antígeno-anticuerpo dentro de
un gel de agarosa o en solución. Hay muchos tipos de pruebas de precipitación (p. ej.,
doble difusión de Ouchterlony, contrainmunoelectroforesis), pero sus aplicaciones son
limitadas.

En general, una muestra de sangre se mezcla con un antígeno de prueba para detectar
los anticuerpos del paciente, en general cuando se sospecha una infección micótica o
una meningitis piógena. Para obtener un resultado positivo, se requiere una gran
cantidad de anticuerpo o de antígeno, y por ello la sensibilidad es baja.

4.5. Prueba de inmunotransferencia de Western

Esta prueba detecta anticuerpos contra el microorganismo en una muestra del paciente
(que puede ser suero u otro líquido corporal) mediante su reacción con antígenos blanco
(p. ej., componentes virales) que se hallan inmovilizados en una membrana mediante
electrotransferencia.

La inmunotransferencia de Western suele tener una buena sensibilidad, aunque menor

a la de las pruebas de cribado como el ELISA, y generalmente su especificidad es
elevada. Por ello, suele utilizársela para confirmar un resultado positivo obtenido con una
prueba de cribado.

Las modificaciones técnicas del procedimiento de Western blot son

 El inmunoensayo lineal (LIA)

 Ensayo de inmunotransferencia recombinante (RIBA), que utiliza antígenos
sintéticos o recombinantes
 Los ensayos de inmunocromatografía, que pueden evaluar rápidamente las
muestras para detectar los antígenos microbianos específicos o los anticuerpos
del paciente

De los tres, el ensayo inmunocromatográfico es el más fácil de hacer, y el que se utiliza

con mayor frecuencia, p. ej., para detectar los microorganismos productores de
shigatoxina, el antígeno capsular de Cryptococcus neoformans y el virus de la influenza.

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 PRUEBAS PARA DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO

Alumno Grupo Fecha

Identificación del paciente:

Tifoidea en placa dibujo

Brucella prueba en placa:

Grupo sanguíneo:

D A B

Etiqueta

Solicitud de pruebas
auxiliares

Paciente mujer de 58 años que necesita varias extracciones, tiene como antecedentes
diabetes melllitus tipo II desde hace 12 años, se le nota pálida al momento de la
entrevista. Su procedencia es la ciudad
de Huanta, indica que es frecuente que las personas tengan un color amarillo en la piel.
Solicítele un hemograma, hemoglobina, hematocrito, pruebas para determinar la
coagulación sanguínea, evalue la glucosa y descarte la presencia de hepatitis.

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 BIBLIOGRAFIA
 https://www.msdmanuals.com/es-pe/professional/enfermedades-
infecciosas/diagn%C3%B3stico-de-laboratorio-de-las-enfermedades-
infecciosas/pruebas-inmunol%C3%B3gicas-para-las-enfermedades-
infecciosas

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