“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”

● Facultad: Ciencias

● E.A.P. : Biotecnología

● Curso: Bioprocesos II

● Docente: Rogger Armando Romero Usquiano

● Integrantes:
Arroyo Achu Gabriel
Lizano Villanueva Carlos
Moncada Chavez Luisalexis
Sánchez Castillo Carlos

Peru, Ancash 2018

 DETERMINACIÓN DE BIOMASA POR MÉTODO DE DENSIDAD ÓPTICA

INTRODUCCIÓN

Biomasa es un término general que se refiere a los microorganismos presentes en un sistema.

A la vez también se puede referir como la cantidad de células, de personas o masa de seres
vivos. El objetivo de labiomasa es la reproducción de células.La determinación de la biomasa
es una de las variables más importantes de un bioproceso ya que su determinación nos lleva a
la comprensión de la eficiencia del mismo. Se trata de una variable clave para establecer las
tasas de producción, de consumo de nutrientes y el cálculo de los balances de masa de cualquier
proceso biológico. Los métodos clásicos de determinación de biomasa son métodos directos
que se basan en el número de células o en el peso celular. Para determinar la biomasa es
necesario calcular el número de células en una determinada muestra. Esto es importante en
ciertas circunstancias; por ejemplo,para determinar la inocuidad de muchos alimentos o drogas
se requiere cuantificar los microorganismos en esos productos. Los métodos para estimar el
número de microorganismos pueden medir la cantidad de células, la masa celular o la actividad
celular. Los métodos que cuantifican la cantidad de células son útiles principalmente para
enumerar organismos como bacterias o levaduras, mientras los que miden la masa o actividad
celular pueden utilizarse para todos los microorganismos, incluidos los hongos filamentosos,
en los que es difícil cuantificar las células individuales.

A. Medida de biomasa

La medida de la masa de los constituyentes de la célula bacteriana es utilizada frecuentemente

como base para la medida de una actividad metabólica, o de un constituyente metabólico o
químico. Algunos de los métodos para cuantificar la biomas son obvios y confiables, pero
pueden volverse complicados si se busca exactitud.

1. Peso húmedo
Se obtiene a partir de una muestra en suspensión que es pesada luego de la separación de las
células por filtración o centrifugación. Es una técnica útil para grandes volúmenes de muestra.
La principal desventaja es que el diluyente queda atrapado en el espacio intercelular y
contribuye al peso total de la masa. La cantidad de líquido retenida puede ser importante, por
ejemplo, un pellet de células bacterianas muy empaquetadas puede contener un espacio
intercelular que aporta entre el 5-30% del peso, de acuerdo a la forma y deformación
celular.Para corregir el peso húmedo se determina la cantidad de líquido que queda retenida en
el espacio intercelular luego de una centrifugación, para ello se utilizan soluciones de polímeros
no iónicos (como el Dextran) que pueden ingresar en el espacio intercelular pero no pueden
atravesar las paredes bacterianas.

2. Peso seco
La cantidad total de biomasa presente en una muestra puede medirse en términos de peso seco
por unidad de volumen, ya sea como sólidos en suspensión totales (SST) o sólidos en
suspensión volátiles(SSV). Las células se separan del líquido bien por centrifugación bien por
filtración. Se expresan en g.m.s/mL.La principal desventaja de estas técnicas es que su
determinación incluye no sólo microorganismos activos sino microorganismos muertos,
material inerte, polímeros extracelulares y materia orgánica adsorbida.Además, no puede
aplicarse cuando los sustratos a degradar son insolubles. Los métodos gravimétricos son
simples, pero consumen bastante tiempo y son poco reproducibles. A la vez este método este
método los componentes volátiles de las células pueden perderse en el secado y puede existir
alguna degradación.También la muestra seca pude recobrar humedad durante el pesado,
principalmente si el ambiente tiene humedad relativa alta.

3. Absorción
Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una partícula en suspensión, parte de la luz
es reflejada,parte es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida. La nefelometría mide
la luz dispersada por una solución de partículas. La turbidimetría mide la luz dispersada como
un decrecimiento de la luz.

4.Turbidimetría
La turbidimetría mide la reducción de la transmisión de luz debido a partículas de una
suspensión y cuantifica la luz residual transmitida. Estudios teóricos y experimentales han
mostrado que soluciones diluidas de diferentes tipos de bacterias, independientemente del
tamaño celular, tienen casi la misma absorbancia por unidad de concentración de peso seco.
Esto quiere decir que, en soluciones diluidas, la absorbancia es directamente proporcional al
peso seco, independientemente del tamaño celular del microorganismo.
Sin embargo, se encuentran absorbancias muy diferentes por partícula o por UFC (Unidad
Formadora de Colonia) cuando los tamaños de las células bacterianas son diferentes. Por esta
razón, para estimar el número de microorganismos totales o el número de microorganismos
viables de una suspensión bacteriana debe realizarse una "curva de calibración" con cada tipo
de microorganismo, sólo de esta forma es posible relacionar Absorbancia (Densidad Óptica)
con el número de microorganismos totales o con UFC.

K:constante que varía con la longitud de onda utilizada y representa la inversa del peso seco
del microorganismo que produce un aumento de 10 veces en el valor de la absorbancia (1/W0)

Peso seco:Concentración celular bacteriana expresada en unidades de peso seco (µg/ml-

mg/ml).
La relación directa entre la absorbancia y el peso seco sólo se aplica para suspensiones diluidas
de bacterias. Estas suspensiones no deben tener una absorbancia mayor a 0.3, ya que valores
mayores producen desviaciones de la ley de Beer. Sin embargo, el inconveniente de utilizar
suspensiones diluidas puede involucrar un mayor error de pipeteo y menor sensibilidad por el
bajo nivel de absorción.

OBJETIVOS

● Determinar la concentración en peso húmedo (g mH/mL) y peso seco (g mS/mL)

● Determinar la biomasa de una solución mediante el método de densidad óptica

MATERIALES

● Biomasa
● Papel aluminio
● Matraz
● Pipeta
● Tubo de ensayo
● Vaso de precipitación
● Centrífuga
● Estufa
● Espectrofotómetro

FLUJOGRAMA
RESULTADOS
DISCUSION

Según Arnáiz, et al (1992), el peso húmedo se obtiene a partir de una muestra en suspensión
que es pesada luego de la separación de las células por filtración o centrifugación. Demostrando
una técnica útil para grandes volúmenes de muestra. La principal desventaja es que el diluyente
queda atrapado en el espacio intercelular y contribuye al peso total de la masa. De modo que
las células estarán hidratadas y gran parte de ellas podrían ser visibles.

Según Rodríguez, et al (2005), nos señala que para que sean visibles las trazas de turbidez es
necesario más de un millón de células por ml., como para ser medida por un espectrofotómetro.
Por lo que la turbidimetría no es un método útil para medir la contaminación de líquidos para
un número relativamente pequeño de bacterias y levaduras. Se comprobó en la práctica con
éxito en el experimento ya que tanto la muestra original analizada como la muestra problema
sobrepasaban dicha cantidad,; además, todas las muestras de concentraciones se leyeron a 540
nm,(longitud de onda comúnmente utilizada para la determinación de crecimiento por el
método de turbidimetría en las investigaciones).
Según Toro (2005), la relación directa entre la absorbancia y el peso seco sólo se aplica para
suspensiones diluidas de bacterias. Sus absorbancias no deben ser mayores a 0.3, ya que valores
mayores producen desviaciones. Esto se comprobó con el peso Seco de la muestra problema,
su peso real y su peso teórico, presentando estos un % de error mayores y donde su absorbancia
resultó 0.0045.

CONCLUSIONES

● Se determinó la biomasa mediante el método de densidad óptica de peso húmedo, peso

seco y por turbidimetría, encontrando su Absorbancia y su variabilidad.

● Se aprendió y conoció los métodos más empleados en la determinación de biomasa.

● La determinación de biomasa mediante peso seco y peso húmedo es un método fácil y

rápido de realizar pero que también es un método impreciso debido a diversos factores
que se presentan en laboratorio.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

● ARNÁIZ,C., ISAC,L. Y LEBRATO, J. (2000).Determinación de la biomasa en

procesos biológicos.

● RODRÍGUEZ, E., GAMBOA, M., HERNÁNDEZ, F Y GARCÍA, J. (2005).

Bacteriología General: Principios y prácticas de laboratorio. Editorial Universidad de
Costa Rica.

● TORO R. (2005), Manual de Introducción al Laboratorio De Microbiología, editorial

universidad de caldas,2005