UNIVERSIDAD POLITECNICA AMAZONICA

FACULTAD DE INGENIERIA

ESCUELA DE INGENIERIA AGRONOMICA

ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA
DOCENTE: MARTHA QUIJANO ANACLETO
TEMA: INFORME DE PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
CICLO V “B”
INTEGRANTES:
 AURELIO SAJAMI TUANAMA
 ELAR HUBER DELGADO CASTILLO
 EMERSON TENORIO ROJAS
 EDY NUNCAMQUIT QUIROZ

BAGUA GRANDE -- UTCUBAMBA 25 DE JUNIO 2018

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FUNDAMENTO

PREPARACIO
N DE MEDIOS
DE CULTIVO
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El Medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el

crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie
que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían
considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en
medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan
determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer. MERK(2002)
OBJETIVOS
Aprender a preparar los medios de cultivo mas comunes que se utilizan para el cultivo
de los microorganismos
Diferenciar los diversos tipos de medios y su aplicación adecuada de acuerdo al tipo
de microorgaanismo a cultivar

MARCO TEORICO:
MEDIOS DE
CULTIVO:
Un Medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que
los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. (López T. & Torres
C.,
2006)

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en
condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una
amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los requerimientos más importantes
para su desarrollo están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e
hidrógeno. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de factores de
crecimiento específicos en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre
otros. (Ramón P. & Juárez A., 2002)

Fig. 1 Microorganismo
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El desarrollo de un microorganismo en un medio de cultivo depende de

diversos factores, entre los cuales los más importantes son:
- Disponibilidad de los elementos nutritivos necesarios
- Existencia del oxígeno requerido
- Grado de humedad apropiado
- Valores de pH adecuados: Usualmente neutro o ligeramente alcalino (7.2 –
7.4), salvo excepciones.
- Temperatura de incubación precisa: 35 – 37°C para las bacterias patógenas.
- Condiciones de esterilidad del medio y protección de
posibles contaminaciones.
(García M., Fernández T. & Paredes S., 2005)
CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE
CULTIVO: Según su origen:
 Naturales: Son los preparados a partir de sustancias naturales de
origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y
cuya composición química no se conoce exactamente.
 Sintéticos: Son los medios que contienen una composición química
definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener
resultados reproducibles.
 Semisintéticos: Son los sintéticos a los que se les añaden factores de
crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como
por ejemplo extracto de levadura.
(López T. & Torres C., 2006)

Según su consistencia:
 Líquidos: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en solución
acuosa. Favorecen mucho el desarrollo y la multiplicación de las
bacterias porque al difundirse estas por todo el medio encuentran
con facilidad las sustancias que necesitan para nutrirse.
 Sólidos: Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido (caldo). El
agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato de carbono) que se
extrae de las algas. Como esta sustancia no es digerida por las
bacterias no constituye ningún elemento nutritivo, en ellos las
bacterias crecen con mayor dificultad, pues los nutrientes se agotan
con rapidez en el punto donde se desarrollan.
 Semisólidos: Se utilizan para determinar la motilidad de las especies en
estudio. Actualmente se encuentran disponibles comercialmente con el
agregado de agar.
(García M., Fernández T. & Paredes S., 2005)
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Fig. 2 Cultivos sólidos y líquidos

su composición:
 Comunes o universales: Su finalidad es el crecimiento de la mayor parte
de los microorganismos poco existentes. Es el medio más
frecuentemente utilizado para mantener colonias microbianas. Por
ejemplo: agar común o caldo común.
Según  Selectivos: Son sólidos en los que la selectividad se consigue
alterando las condiciones físicas del medio o añadiendo o suprimiendo
componentes químicos específicos con el fin de inhibir el crecimiento de
especies químicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio sólo
permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibiendo el
de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar microorganismos a partir de
poblaciones mixtas. Por ejemplo Agar salado-manitol o Chapman
(permite el crecimiento de ciertos estafilococos).
(López T. & Torres C., 2006)

Según su aplicación:
 Generales: También llamados comunes, son apropiados para el cultivo
de la mayoría de los microorganismos por la facilidad con que se
desarrollen en ellos.
 Especiales: Conocidos también como específicos, van dirigidos al cultivo
de determinadas especies bacterianas o son utilizadas con fines de
diferenciación.
 Enriquecidos: Van añadidos de nutrientes muy ricos que permiten el
crecimiento de ciertas bacterias difíciles de cultivar.
COMPONENTES USUSALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

 Extractos: Para su preparación, ciertos órganos o tejidos animales o vegetales

(por ejemplo carne, hígado, semillas, etc.) son extraídos con agua y calor, y
posteriormente concentrado hasta la forma final de pasta o polvo. Estos
preparados deshidratados son frecuentemente empleados en la confección de
medios de cultivo. Ejemplos: extracto de carne, de levadura, de malta, etc. En
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el caso del extracto de carne en polvo o pasta, provee sustancias

nitrogenadas, minerales y vitaminas, mientras que el extracto de
levaduras provee vitaminas del grupo B, nitrógeno y carbono.
 Peptonas: Son mezclas complejas de compuestos orgánicos nitrogenados y
sales minerales que carecen de identidad química definida; se obtienen por
digestión enzimática o química de proteínas animales o vegetales (soja, carne,
gelatina, caseína, etc.). Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos,
pero pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales.
 Fluidos Corporales: Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma o suero
sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios empleados para el
cultivo de algunos patógenos. La sangre no puede ser esterilizada y debe, por
tanto, ser obtenida en condiciones asépticas directamente de un animal sano.
Los fluidos corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento,
sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del crecimiento de
algunas bacterias.
 Sistemas amortiguadores: Algunos componentes son incorporados al medio de
cultivo para mantener el pH dentro del rango óptimo del crecimiento
bacteriano. Los microorganismos más comunes son neutrófilos (el pH óptimo
para su crecimiento está próximo a la neutralidad), y sales como fosfatos
bisódicos o bipotásicos, o sustancias como las peptonas, previenen una
desviación del pH.
 Indicadores de pH: Indicadores ácido- base se añaden a menudo a los medios
de cultivo con objeto de detectar variaciones del pH.
 Agentes reductores: Cisteína, tioglicolato y otros son agentes reductores que
se añaden a los medios de cultivo para crear condiciones que permitan el
desarrollo de los gérmenes microaerófilos o anaerobios.
 Agentes selectivos: La adición de determinadas sustancias al medio de cultivo
puede convertirlo en selectivo (ver más adelante, clasificación de los medios de
cultivo). Por ejemplo, cristal violeta, sales biliares, ácida sódica, telurito
potásico, antibióticos, etc., a la concentración adecuada, actúan como agentes
selectivos frente a determinados microorganismos.
(Rodríguez C., Gamboa C. & Hernández Ch., 2005)

MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS EN LABORATORIO:

 AGAR NUTRITIVO:
Es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de
bacteria. Es muy útil porque permanece solido incluso a relativas altas
temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la
superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. En un caldo de
nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una sustancia
espesa, con colonias difícilmente
observables. (Uberoa F, 1981)
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Fig. 3 Agar nutritivo

 AGAR NUTRITIVO:
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El medio contiene extracto de carne, peptona y agar, siendo una formulación

suficiente para el desarrollo de los microorganismos. El extracto de carne
proporciona al medio fuente de carbohidratos, de nitrógeno y vitaminas. El
empleo de este medio es de acuerdo al tipo de estudio por realizar.
(García M., Fernández T. & Paredes S., 2005)

Fig. 5 Agar nutritivo

PARTE EXPERIMENTAL DE AGAR NUTRITIVO

Materiales:
 Espátula
 Balanza mecánica
 Papel kraft
 Balón de base plana
 Probetas
 Autoclave
 Extracto de carne
 Peptona
 Agar
 Agua destilada
 Agar tripticasa soya
 Agar TSI( agar con hierro y tres azucares)
 Tubos de ensayo
 Tubos con campanas Durham
 Lápiz marcador

Procedimiento:
1. Preparación de medio de cultivo de Agar nutritivo:

 Se midió en una probeta de 500 ml, 300ml de agua destilada.

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Fig.1: Probeta con 300 ml de agua destilada

 Se pesó 8.4 g de agar nutritivo en un papel kraft.

Fig.2: Agar nutritivo Fig.3: Pesado de los 8.4 g de agar

nutritivo
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 Se pasó el agar nutritivo del papel kraft a un balón de base plana y se

agregó los 300ml de agua destilada.

Fig.4: Agar nutritivo siendo pasado a

un matraz Fig.5: Agar nutritivo
siendo mezclado con
agua destilada

 Se homogenizo y se colocó un tapón de

algodón en el pico del balón.

Fig.6: Medio de cultivo final de

agar nutritivo

 Se calentó a la llama del mechero el balón hasta que este hierva.

 Finalmente se cubrió con papel kraft el balón y con un lápiz marcador se le

puso fecha y hora de entrada al autoclave.

 Luego agregamos los tubos a una lata, se envolvió con papel y se rotulo.
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PARTE EXPERIMENTAL DEL CALDO

NUTRITIVO MATERIALES

 Espátula
 Balanza de torsión
 Papel Kraft
 Balones
 Probetas
 Agua destilada
EQUIPO

 Autoclave
 Mechero Bunsen
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Ilustración 4.

 Se calentó agitando constantemente para que termine de disolverse y no

se queme.

Ilustración 5. Preparación del medio de cultivo

 Se distribuyó el medio de cultivo en tubos de ensayo, luego se taponó los

tubos con algodón no absorbente, dándole el ajuste necesario para que
impida la contaminación después del proceso de esterilización.
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Ilustración 8. Distribución de medio de cultivo en Ilustración 9.

tubos de ensayo.

 Se colocaron los tubos en un envase de hojalata forrado con papel y se

rotuló.

Ilustración 10. .

 Se esterilizó en autoclave a 121°C durante 15 minutos y se retiró

inmediatamente.
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RESULTADOS
Se obtuvo un medio de cultivo en buenas condiciones.

Ilustración 7

DISCUSIÓN
Para poder identificar los microorganismos es necesario observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales. La mayoría de las bacterias
patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los
líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por ello, la base de muchos medios de
cultivo es una infusión de extractos de carne y peptona a la que se añaden
otros ingredientes. Estos materiales sirven al medio de cultivo como fuente de
carbono, nitrógeno, fósforo y azufre. Con el extracto de carne y otros materiales
se puede preparar un caldo nutritivo utilizado para el mantenimiento de cultivos
de bacterias (Pinto & Martín, 2012).
El uso de extracto de carne para preparar medios de cultivo como caldo
nutritivo es muy importante para poder observar el crecimiento de
microorganismos, estamos de acuerdo con el autor.

PARTE EXPERIMENTAL DEL CALDO BRILA

1. Materiales
 Probeta de 250 ml
 Balón de 1000 ml
 Pipeta de 5 ml
 Tubos de ensayo
 Gradilla
 Espátula

 Papel kraft
 Algodón
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2. Equipos de laboratorio
 Balanza mecánica
 Mechero Bunsen
 Autoclave

3. Muestra
 Extracto de carne (caldo brila)

Figura 1. Extracto de carne

4.Procedimiento experimental

 Con un papel kraft doblado se pesó 10g del extracto de tierra en la balanza
mecánica.

Figura 2. Peso de la
muestra
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 Se midió 200 ml de agua destilada en la probeta.

Figura 3. Medida de 200 ml de agua

destilada

 Se disolvió el polvo ya pesado añadiendo una pequeña cantidad de agua para

evitar que el polvo se adhiera al balón, luego se agregó el agua restante hasta
el volumen deseado y se agito el balón con el contenido.

Figura 4. Adición de la muestra y agua destilada

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 En una bureta se distribuyó el medio de cultivo en tubos de ensayo previamente

esterilizados y en cantidades constantes ().

Figura 5. Agregando el medio de cultivo a la bureta

Figura 6. Distribución del medio de cultivo en tubos

 Se colocó tapones de algodón a los tubos de ensayo para evitar una contaminación
después de la esterilización.
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Figura 7. Cerrando con tapones de algodón

 Se distribuyó los tubos de ensayo en un recipiente y se llevó posteriormente a la

autoclave para la esterilización a 1210C por 15 minutos.
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RESULTADOS

Figura 10. Cultivo de caldo brila

DISCUSIONES
Durante la fase confirmativa se emplea como medio de cultivo caldo lactosado bilis verde
brillante el cual es selectivo y solo permite el desarrollo de aquellos microorganismos
capaces de tolerar tanto las sales biliares como el verde brillante.
En nuestra practica elaboramos el cultivo brila (caldo verde), éste nos determinará las
probabilidades de microorganismos coliformes

CONCLUSIONES.

 Se aprendió a preparar los medios de cultivo como el caldo nutritivo, caldo brila
y agar nutritivo
 Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que permite el
desarrollo de microorganismos.

Nuestro cuerpo también es un excelente portador de microorganismos
 Se diferenció los tipos de medios de cultivo y su aplicación adecuada
BIBLIOGRAFIA:
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 Delgado A., Polanco A. & Prieto S. (2001) Manual de laboratorio clínico

básico “Microbiología”. España: Mc Graw
 García M., Fernández T. & Paredes S. (2005) Microbiología clínica práctica.
España: Repeto
 López T. & Torres C. (2006) Microbiología General. Argentina
 Ramón P. & Juárez A. (2002) Bioquímica de los microorganismos. España:
Editorial Reverté
 Rodríguez C., Gamboa C. & Hernández Ch. (2005) Bacteriología General:
Principios y prácticas de laboratorio. Costa Rica
 Uberoa F. (1981) Medios de cultivo para microbiología. Barcelona: ADSA –
MICRO
 Camacho A., Giles M., Ortegón A., Palao M., Serrano B. y Velázquez O. 2009.
Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de
Química, UNAM. México
o G. Prats Microbiología Clínica. Editorial panamericana.2007.
 Pinto, G., & Martín, M. (2012). Enseñanza y Divulgación de la Química y la
Física. Madrid: Garceta.
 Merck. 2002. Microbiology Manual