Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Familia Enterobacteriaceae
Fam. Enterobacteriaceae
• bacili Gram negativi
• mobili (cu exceptia Shigella, Yersinia, Klebsiella)
• nesporulati
• nepretentiosi nutritiv
• aerobi facultativi anaerobi
• catalazo pozitivi
• oxidazo negativi
• fermenteaza glucoza (cu /fara producere de gaz)
• reduc nitratii la nitriti
1
3/24/2018
Fam. Enterobacteriaceae
• peste 40 genuri, dintre care 28 de interes medical
– Salmonella
– Shigella
– Yersinia
– Escherichia
– Klebsiella
– Enterobacter
– Serratia
– Proteus
Fam Enterobacteriaceae
• Bacterii ubicuitare
– majoritatea speciilor intra in componenta microbiotei
comensale intestinale la om si animale
– pot coloniza si mucoasa genito-urinara
– prezente in mediul extern (sol, apa, plante, suprafete);
prezenta in apa a unor bacili Gram negativi asemanatori E.
coli (“coliformi”): indice de poluare fecala
• Categorii de patogenitate
– Patogeni primari intestinali: Salmonella, Shigella, Yersinia
– Conditionat patogeni: pot produce infectii daca poseda
factori suplimentari de virulenta (ex patotipuri de E coli) sau
exista deficiente ale apararii imune
– Ocazional patogeni
2
3/24/2018
Fam Enterobacteriaceae
Categoria Gen Semnificatie
etiologica
Patogene Salmonella, Shigella, Certa
Yersinia, E coli (patotipuri)
Conditionat Citrobacter, Enterobacter, Izolate semnificativ
patogene Escherichia (alte localizari in probe
decat intestinala si necontaminate (LCR,
urinara), Klebsiella, colectii neabcedate),
Morganella, Proteus, hemoculturi
Serratia
Ocazional Hafnia, Kluyvera, Pantoea
patogene s.a.
Fam. Enterobacteriaceae
Clinic
A. Infectii intestinale (Salmonella, Shigella, Yersinia enterocolitica,
Escherichia coli patotipuri diareigene etc)
B. Infectii cu alte localizari
– Infectii urinare (E. coli, Proteus mirabilis, Enterobacter spp., Klebsiella
pneumoniae etc)
– Infectii respiratorii, frecvent nosocomiale (Klebsiella pneumoniae,
Enterobacter spp., E. coli etc)
– Meningite neonatale (E. coli)
– Infectii ale plagilor chirurgicale (Proteus)
C. Infectii sistemice
– Bacteriemii (E. coli, Enterobacter spp., K. pneumoniae, Proteus mirabilis)
– Septicemii (Salmonella Typhi, S. Paratyphi, Yersinia pestis)
3
3/24/2018
Fam. Enterobacteriaceae
• Caractere microscopice
– bacili gram negativi
Aspecte particulare:
– Yersinia – frecvent cocobacili
– Proteus – aspect polimorf
– Klebsiella – pot prezenta capsula (in produs patologic)
Fam. Enterobacteriaceae
• Caractere cultivare
• pe m simple, dupa 18-24 ore de incubare la 37°C formeaza
colonii de 2-3 mm, forma S; unele genuri pot prezenta aspecte
particulare
– Klebsiella, colonii mari, mucoase, cu tendinta la confluare
– Proteus – culturi cu caracter invaziv, in valuri concentrice
– Serratia – colonii pigmentate in rosu
• pe geloza sange – uneori colonii β hemolitice (caracter de
tulpina, nu de specie!)
• pe medii diferentiale sau selective – vizualizarea unor caractere
de diferentiere (ex. fermentarea lactozei)
4
3/24/2018
Fam. Enterobacteriaceae
Caractere biochimice – permit identificarea
• preliminara
• definitiva
prin utilizarea unor sisteme
• conventionale
• multitest – mai multe teste in acelasi mediu (TSI, MIU, MILF)
• microtest – (manuale / automate) baterii de teste biochimice,
unele cu citire rapida (4-6 ore)
Fam. Enterobacteriaceae
Identificare
• Caractere biochimice – medii multitest
– fermentarea unor zaharuri (glucoza, lactoza etc)
– producerea unor metaboliti (producerea de indol evidentiata
cu reactiv Erlich, de H2S)
– prezenta unor enzime (ureaza, lizin-decarboxilaza,
fenilalanin-dezaminaza etc)
5
3/24/2018
Fam. Enterobacteriaceae
Identificare
• Caractere antigenice – identificare prin r de aglutinare
- Ag O (somatic, din structura LPS)
– definesc grupuri
- Ag H (flagelar) – la tulpinile
mobile – definesc tipuri
- Ag de invelis: K (capsular) la
Klebsiella si E. coli, B la Shigella,
Vi la Salmonella
Fam. Enterobacteriaceae
• Bacteriocine
• proteine antibacteriene produse de unele tulpini de bacterii, cu actiune
bactericida asupra altor tulpini din aceeasi specie sau din specii inrudite
• codificate plasmidic
• constituite din 3 domenii:
– N terminal – implicat in transferul prin membrana externa
– central – recunoastere si cuplare cu receptor din membrana externa
– COOH- terminal – activitate antibacteriana
• mecansim de actiune
– formarea de pori in membrana interna
– degradarea ADN sau ARN (DNAze, Rnaze etc)
– degradarea precursorilor peptidoglicanului (peptidoglicanaze)
• se pot utiliza pentru identificare (tipare); utilizare potentiala in
tratamentul unor infectii, industria alimentara s.a.
6
3/24/2018
Fam. Enterobacteriaceae
Algoritmul izolarii si identificarii enterobacteriilor
1. in functie de sindromul clinic se recolteaza probe; acestea pot fi
– necontaminate (maduva osoasa, colectii inchise, sange)
– urina
– contaminate (materii fecale, bila, probe necroptice,
alimente suspecte)
Fam. Enterobacteriaceae
Algoritmul izolarii si identificarii enterobacteriilor
2. Izolarea pe medii de cultura, alese in functie de tipul probei si
de bacteriile potential implicate
– probe necontaminate: agar simplu + agar sange
– sange: hemoculturi
– urina: agar sange + agar Mac Conkey
– probe contaminate: m de imbogatire + m selective
(MacConkey, ADCL, XLD, Hektoen, SS, Wilson Blair) ± m
cromogene
colonii izolate
7
3/24/2018
Fam. Enterobacteriaceae
Algoritmul izolarii si identificarii enterobacteriilor
3. Identificarea izolatelor
• preliminara – caractere biochimice - medii multitest (ex. TSI,
MIU/MILF)
• definitiva
– caractere metabolice - teste biochimice
– caractere antigenice – testare serologica (pe lama/la tub)
– tipare
Escherichia coli
• component important al microbiotei colonului la om si animale
• mobil (majoritatea tulpinilor)
• fermenteaza glucoza cu producere de CO2,
• fermenteaza lactoza (majoritatea tulpinilor)
• produce indol, test rosu metil +
• nu produce H2S , ureaza, fenilalanin dezaminaza
• nu utilizeaza citratul ca unica sursa de carbon (nu cultiva pe
mediul Simmons)
8
3/24/2018
Escherichia coli
E. coli – conditionat patogen; variantele patogene (denumite
patotipuri sau patovaruri) poseda gene suplimentare care
codifica factori de virulenta
Escherichia coli
Clinic
• Infectii urinare (patotipuri urinare) - E. coli – cea mai frecventa
cauza de infectii urinare
• Infectii intestinale (patotipuri diareigene)
• Meningite neonatale (E. coli K1)
• Pneumonii
• Peritonite, colecistite
• Bacteriemii – tranzitorii (ex. in cursul unor investigatii invazive
la nivelul unor mucoase colonizate) sau intermitente (ex. in
pielonefrite)
• Infectii ale plagilor (obisnuit in asociere cu alte bacterii)
9
3/24/2018
Consum Consum,
• E. coli enteroinvaziv EAEC expunere
EHEC ETEC
(EIEC)
Contact direct
Alimente Apa irigatii EHEC
Apa
• E. coli enteropatogen EHEC ETEC
EAEC EIEC
EPEC
EIEC
EHEC ETEC
EIEC
Contaminare
(EPEC)
fecala
• E. coli enteroagregativ Contaminare Contaminare
(EAEC) fecala
Animale
fecala
10
3/24/2018
11
3/24/2018
12
3/24/2018
13
3/24/2018
14
3/24/2018
15
3/24/2018
16
3/24/2018
17
3/24/2018
Infectii urinare
Factori favorizanti
• perturbarea fluxului urinar – calculi, stricturi uretrale, hipertrofia
prostatei, tumori pelvine, sarcina, malformatii ale aparatului
urinar
• manopere medicale la nivelul cailor urinare (ex. sondare vezicala,
cistoscopie)
• sexul feminin
Escherichia coli
• alte patotipuri
– ex. E. coli K1 - factor de patogenitate: antigen capsular K1
(similitudine structurala cu Ag capsular de grup B al Neisseria
meningitidis si cu glicopeptide cerebrale); determina
meningite neonatale (ca si Streptococcus agalactiae si
Listeria monocytogenes)
18
3/24/2018
19
3/24/2018
20
3/24/2018
21
3/24/2018
Escherichia coli
• alte patotipuri
– ex. E. coli K1 - factor de patogenitate: antigen capsular K1
(similitudine structurala cu Ag capsular de grup B al Neisseria
meningitidis si cu glicopeptide cerebrale); determina
meningite neonatale (ca si Streptococcus agalactiae si
Listeria monocytogenes)
22
3/24/2018
Klebsiella
• Specii de interes medical
– K. pneumoniae (susp pneumoniae, subsp ozenae, subsp rhinoscleromatis),
– K. oxytoca
– K. granulomatis
• fermenteaza glucoza cu producere de CO2, fermenteaza lactoza
• imobile
• formeaza colonii mucoide (sinteza crescuta de polizaharid capsular)
• produce ureaza
• nu produce H2S
• producerea de indol – rezultat
– negativ - K. pneumoniae (susp pneumoniae, subsp ozenae, subsp
rhinoscleromatis),
– pozitiv - K. oxytoca
Klebsiella pneumoniae
• prezenta in microbiota colonului; poate coloniza mucoasa oro-
faringiana
• Factori de virulenta
– capsula polizaharidica
• principalul factor de virulenta, codificat de gena cps; previne
recunoasterea de catre fagocite si C3b
• 77 serotipuri; serotipurile K1 si K2 – mai virulente
• fenotipul hipermucos (caracterizat prin sinteza abundenta de
polizaharid capsular, determinata de gena plasmidica rmp care regleaza
expresia genei cps) este asociat infectiilor invazive;
– LPS – inhiba fixarea complementului pe membrana
citoplasmica, stimuleaza eliberarea de citokine
– siderofori (aerobactin)
– adezine (pili)
23
3/24/2018
Klebsiella pneumoniae
Clinic – poate produce variate infectii, mai ales nosocomiale,
asociate unor investigatii invazive sau unor deficiente ale
apararii antiinfectioase (diabet, alcoolism, neutropenie s.a):
• infectii pulmonare
• infectii ale plagilor si arsurilor,
• bacteriemii, septicemii
• infectii urinare (serotip K2)
• abcese hepatice (serotip K1), colecistite
• peritonite – la pacienti cu ascita
• endoftalmita (secundar septicemiilor)
• meningita postoperatorie
Klebsiella pneumoniae
Alte infectii (rare)
• Klebsiella pneumoniae subsp ozaenae – izolata in ozena –
atrofie cronica a mucoasei nazale asociata cu exsudat
mucopurulent
• Klebsiella pneumoniae subsp rhinoscleromatis – izolata in
rinoscleromatoza – granulom distructiv la nivelul
nazofaringelui
• K oxytoca – bacteriemii, septicemii neonatale, in special la
prematuri sau nou nascuti din sectii de terapie intensiva
• K. granulomatis – determina ulceratii genitale cronice
(granulom inghinal) la pacienti din zone tropicale
24
3/24/2018
Klebsiella pneumoniae
• Identificare
– Microscopie
– Cultivare pe m simple sau slab selective – colonii mari,
mucoide, cu tendinta la confluare
– Biochimica preliminara – m multitest (TSI, MIU, MILF)
– Biochimica definitiva – set largit (20 teste) sau sisteme
microtest
Klebsiella pneumoniae
• Tratament
– rezistenta naturala (intrinseca) la aminopeniciline
– sensibilitate variabila; Atb potential active – cefalosporine de
generatia a IIIa, carbapeneme, aminoglicozide, fluorochinolone
– tulpinile nosocomiale - frecvent multirezistente, prin producerea
• β lactamaze cu spectru extins (extended spectrum beta-
lactamases, ESBL) - rezistenta la majoritatea β lactaminelor,
inclusiv ureidopeniciline, cefalosporine, aztreonam
• carbapenemaze - rezistenta la carbapeneme, cefalosporine,
fluorochinolone, aminoglicozide
Utilizarea extinsa a Atb cu spectru larg la pacientii spitalizati a
determinat cresterea portajului de Klebsiella pneumoniae si
selectia tulpinilor multirezistente (producatoare de ESBL sau
carbapenemaze).
Infectiile nosocomiale produse de aceste tulpini sunt dificil de tratat
si se asociaza cu mortalitate crescuta.
25
3/24/2018
ESKAPE!
• Enterococcus faecium
• Staphylococcus aureus
• Klebsiella pneumoniae
• Acinetobacter
• Pseudomonas aeruginosa
• Enterobacter
Enterobacter
• Enterobacter cloacae, Enterobacter aerogenes
• mobili
• fermenteaza Glu cu producerea unor cantitati mari de gaz
• fermenteaza Lactoza
• nu produce indol, H2S, fenilalanin dezaminaza
• cultiva pe m. cu citrat (mediu Simmons)
• doar Enterobacter aerogenes produce lizindecarboxilaza
• poate produce capsula
• clinic - infectii similare cu K. pneumoniae
• natural rezistente la aminopeniciline, cefalosporine gen I (β
lactamaza codificata cromosomal)
• rezistenta variabila la alte Atb – tulpini nosocomiale – frecvent
multirezistente
26
3/24/2018
Serratia
• principala specie: Serratia marcescens
• fermenteaza lactoza
• mobila
• nu produce H2S
• cultiva pe m cu citrat (mediu Simmons)
• produce acetoina din glucoza (r. Voges-Proskauer poz.)
• unele tulpini (10%) produc un pigment rosu
• clinic - poate produce infectii nosocomiale: pneumonii,
bacteriemii, endocardite
• tratament - frecvent multirezistente
Proteus
• specii de interes medical: Proteus mirabilis, P. vulgaris, P. penneri
• componente ale microbiotei intestinale la om si animale
• mobili
• lactozo neg
• produc ureaza, H2S, fenilalanin-dezaminaza
• Nu produc lizindecarboxilaza; P. mirabilis, P. penneri - indol neg.
• Clinic
– Infectii urinare – a treia cauza de infectie urinara nosocomiala
ca frecventa; se asociaza obisnuit cu litiaza urinara (ureaza
elibereaza amoniac, alcalinizeaza urina, favorizand
precipitarea sarurilor de Ca si Mg si formarea calculilor; pe
suprafata calculilor persista Proteus)
– bacteriemii, infectii ale plagilor
27
3/24/2018
Proteus
Patogenitate
• ureaza
• flagelii – exista variatie antigenica
• capacitate de invazie pe medii solide neselective – cultura realizeza mai
multe etape: dupa o etapa initiala, de multiplicare bacteriana (cu fisiune
binara) urmeaza o etapa in care replicarea ADN nu mai este urmata de
formarea septurilor de diviziune. Rezulta celule lungi (20-80 um),
poliploide, cu foarte numerosi flageli, celule capabile de invazie. Dupa
un interval de timp se opreste invazia si bacteriile revin la forma scurta
(etapa de consolidare). Succesiunea etapelor de invazie si consolidare
confera aspectul caracteristic al culturii pe m. neselective (valuri
concentrice)
• fimbrii
• hemolizina
• capacitate de a forma biofilm
Proteus
• crestere cu caracter invaziv pe medii neselective
– in medii lichide – Proteus – bacili scurti, cu flageli peritrichi
– pe medii solide neselective – cultura cu caracter invaziv - de
la locul inocularii valuri succesive de cultura migreaza
concentric pana la marginea mediului (in aprox 24 h)
28
3/24/2018
Proteus
Crestere invaziva pe medii neselective
• daca pe aceeasi placa se intalnesc valuri de la colonii ale aceleiasi
tulpini rezulta confluarea
• daca pe aceeasi placa se intalnesc doua tulpini diferite (din aceeasi
specie de Proteus) aflate in etapa de invazie apare intre cele doua
culturi o linie de demarcatie - fenomenul Dienes – utilizat pentru
caracterizarea epidemiologica a izolatelor
Proteus
Tratament
• Natural rezistente la polimixine si tetracicline
• Sensibilitate variabila la alte Atb
• Testarea sensibilitatii la Atb – obligatorie
29