http://www.youtube.com/watch?v=oZiAwqo77GM&feature=related

 Fluxo da
Informação
Genética
 Tópicos

1. Replicação do DNA é semiconservativa

2. DNA Polimerases
3. Mecanismos da Replicação do DNA
4. Replicação do DNA Eucariotico
 Replicação e Ciclo celular
A replicação e ciclo celular
devem estar conectados de tal
forma que a frequência dos ciclos
de replicação se ajuste à
velocidade do crescimento da
célula.
A relação entre os 2 ciclos é
necessária pois na divisão de uma
bactéria, por exemplo, dois
cromossomos têm que estar
completos e a célula com um
tamanho mínimo necessário para
divisão.
 Replicação do DNA
A replicação é o processo que envolve a
duplicação do material genético.
O processo é catalisado por um grupo de
enzimas constituído de:
•  topoisomerases (I e II),
•  helicases,
s d a
n te
•  proteínas SSB,
on e ??
o m p N A
•  primase,
s c d o D
•  girase,is o ã o
u a c a ç
•  Q p li
r e
polimerase I e III e
•  DNA ligase.
 Replicação: Início da Biologia
Molecular
ü Mecanismo:
ü separação física das duas fitas
ü cada fita separada serve como molde
para síntese de outras complementares.
 Replicação do DNA

O Modelo Semiconservativo
Matthew Meselson e Franklin Stahl
mostraram que a replicação do
DNA resulta em uma dupla fita de
DNA na qual uma fita é
proveniente da dupla fita parental e
a outra é completamente nova.
 Carateristicas da replicação do DNA
Replicação do DNA é bidirecional
Ø Replicação bidirecional apresentam 2 forquilhas
de replicação, que movem em direção opostas.

Replicação do DNA é semidescontinua

Ø Uma fita contínua (replicação direta e contínua)
Ø Uma fita descontínua gerada em fragmentos
(fragmentos de Okazaki) que precisam ser
ligados posteriormente.
oriC
Carateristicas da replicação do DNA
Ø Replicação
do DNA acontece no
lado 3’OH da fita
 Elongação 5’ 3’

C C G

PPP OH 3’ P OH 3’
PPP
5’

dGTP PPi
 A Enzimologia
1.  Uma enzima catalisa a duplicação do DNA a
partir de um molde.
2.  Arthur Kornberg (1957) demonstraram a
existência de uma DNA polimerase - DNA
polimerase I (DNA-Pol I)
3.  Foi a primeira enzima descrita que é dirigida
por um molde.
 A Enzimologia
da replicação do DNA

Velocidade catalítica é de 100 nucleotídeos

Velocidade ?????????
polimerizados/seg

DNA Pol I tem um papel crítico na replicação, e

também no reparo de DNA.
 A Enzimologia
da replicação do DNA

■ DNA-Pol I precisa dos 4

desoxiribonucleotideos (dATP, dGTP,
dTTP, dCTP), Mg, um molde de leitura
e um primer (com um 3'-OH livre)
 DNA-Pol I é um monomero de 103 kD que
adiciona passo a passo, unidades de nucleotídeos
do lado 3’OH da cadeia de DNA

Reação:
(DNA)n resíduos + dNTP (DNA)n+1 + ppi

precisa de: todos os nucleotídeos e Mg 2+

um primer
fita molde de DNA
 ç ã o a
r e a p e l
l é a a d a
Q u a a lis
c a t ? ?
ic a o l I
u ím A P
q D N
Ø A
DNA-Pol I têm 3 sítios de atividade
em sua estrutura: polimerase,
exonucleases 5’>3 e 3’>5’

Ø A
DNA-Pol I têm a capacidade de
corrigir erros de adição de
nucleotídeos por atividade de
exonuclease nas orientações
5’ > 3’ e 3’> 5’.
Ø  Atividade3’ > 5’ corrige antes da polimerização
da base e a 5’ > 3’ remove o primer de RNA e
dímeros de timina gerados por exposição de DNA
a UV.

Ø  Ocentro ativo de exonuclease é diferente da

atividade de polimerase.

Ø  A
atividade de exonuclease da DNA-Pol I tem
uma função de revisão na polimerização.
 • C não pareada na ponta de uma
sequência de T.
• A DNA-Pol I retira o dCMP, então mais
T são adicionadas.
• A Pol I remove nucleotídeos mal
pareados no terminal do primer antes de
continuar a polimerização.
• A Pol I examina o resultado a cada
polimerização que ela catalisa antes de
passar para a próxima.

Esta atividade de exonuclease 3'-> 5'

aumenta a precisão da replicação do DNA.
A atividade exonuclese 5'-3’

A clivagem pode ocorrer na

ligação fosfodiéster terminal ou
em uma ligação distante em
vários nucleotídeos do lado 5'.
 Importante:
• A polimerização e a revisão ocorrerem
simultaneamente sem que o DNA se separe
da enzima.
• A proximidade entre o centro de ação
exonucleásica 3'-5' e o de polimerase permite
que o terminal 3' da cadeia em crescimento
desloque-se para trás e para frente.
 DNA Polimerase III

A Pol III sintetiza a maior parte do novo DNA.Tem

como característica alta processividade, potência
catalítica e fidelidade. Isso a diferência da Pol I
que tem como função o reparo e preenchimento
de espaços, além de ter uma processividade
menos eficiente.
Ela tem 10 subunidades e tem uma massa de ~900
KDA.
• A fenda de 35 A de diâmetro em seu centro acomoda uma
molécula dúplex de DNA. O molde é captado, e há espaço
suficiente entre o DNA e a proteína para permitir o rápido
deslizamento e giro do DNA durante a replicação.
ß2 tem um papel importante servindo como grampo
deslizante do DNA.

Velocidade
velocidade catalíticade polimerização
e de ???????
1.000 nucleotídeos /seg
 Caraterísticas da replicação
§  Início: Localiza-se oriC, inciando a
separação das fitas e a helicase
desenovela o DNA.
§  A dupla fita precisa ser desenovelada
pela helicase.
§  Superenovelamento compensado por
DNA girase e topoisomerases.
 Caraterísticas da replicação
•  DNA Pol III usa um RNA primer
•  A primase forma o requerido primer
•  DNA Pol I corta o primer
•  DNA ligase sela os fragmentos de
Okazaki
•  Topoisomerase II (DNA girase) libera
o superenovelamento remanescente
5

3’ 3’ 5’
3’
5’ 3’
Replicação do DNA em Eucariotos
Mais complexa que em E. coli, mas idêntica em sua concepção
■  Celula Humana : 3 bilhões de bases de DNA para copiar
■  Multiplas origens de replicação: 1 para 3- 300 kbp

Procariotos
o tempo de replicação curto
uma "bolha" de replicação
Existem três tipos de DNA
polimerases: I, II e III
Eucariotos
o tempo de replicação é longo;
cromossomos e histonas
várias "bolhas" de replicação
Existem quatro tipo de DNA
polimerases: a, b, g e d
 
http://www.youtube.com/watch?v=-mtLXpgjHL0&feature=related


Café ??