Paola Campiño Rosero1

Andrea García Leal1

Javier García Leal2

Virología
Estudiantes de Microbiología1 - Biología2
Facultad de Ciencias Básicas
Universidad de Pamplona
Pamplona, 2016
 Historia
• ¿ Como surgió el termino prion ?
El prion, palabra acuñada en 1982
por Stanley B. Prusiner al
investigar una serie de patologías
de carácter crónico e irreversibles
que afectan al sistema nervioso
central , en un acrónimo ingles
derivado de las palabras proteína e
infección

Fuente : Web
 ¿Cuál fue el trabajo de Prusiner?
Prusiner sometió los priones a distintos tratamientos
par alterar las proteínas o los ácidos nucleicos
intentando alterar su capacidad infecciosa. Observo
que perdían infectividad si se trataban con fenol .
Aunque eran resistentes a algunos de los procesos de
degradación proteica (como las enzimas proteasas)

Sin embargo, si los sometía a la distintos

tratamientos para acción de enzimas que
atacaban específicamente a los ácidos nucleicos
alterar las proteínas o los (nucleasas para ADN y
ARN), a ácidos nucleicos, intentando radiación
UV o a la modificación con alterar su capacidad
infecciosa. hidroxilamina, las partículas no Observó
que perdían perdían su infectividad.
• 1700:Primera descripción del Scrapie
• 1985:Aislamiento del gen PrP y
secuenciación de las proteínas sanas y
enfermas
• 1989: Prusiner descubrió una mutación del
gen PrP en una víctima de Gerstmann-
Straussler-Scheinker (GSS)
Fuente : Web
• 1994:Obtencióndeprionesinvitro
• 1994: Prusiner creó el primer ratón
transgénico con mayor predisposición a
contraer una patología espongiforme
• 1996:Comprobación de que los monos
enfermaban de Kuru al ingerir tejido cerebral

Fuente : Web
Priones “Proteinaceous Infectious particle”

Es el agente infeccioso responsable de

enfermedades neurodegenerativas encontradas
en mamíferos, formado por una proteína,
carente de genoma y ácidos nucleico.

- Miden aprox . 0.2 nm Fuente : Web

- Se conocen 6 priones actualmente , pero
científicos ignoran cuantos existen
actualmente
- Todos producen Encefalopatias ,
Espongiformes , es decir hacen “poros” al
cerebro de animales o humanos

Fuente : Web
Se conocen varios tipos de prion, en mamíferos
se encuentra el prion PrP , responsable de las
encefalopatias espongiformes transmisibles
(TSEs), que son enfermedades neurológicas
invariablemente letales y que actualmente no
tienen tratamiento.

Este prion puede existir en dos conformaciones:

PrPsc y PrPc. PrPsc es la versión infecciosa, Fuente : Web
que causa TSE, mientras que PrPc es la versión
normal de la proteína y no produce
enfermedad, al contrario cumpliría funciones
celulares normales.

Los demás priones conocidos actualmente son

los de levaduras y hongos filamentosos.

Gemuqui , 2012
En Saccharomyces cerevisiae se encuentran los priones
que forman amiloides, denominados URE3, PSI y PIN
Además, actualmente, la proteasa vacuolar beta de
levadura también es considerada un prion. La versión
normal de esta proteína es simplemente una proteasa
que degrada proteínas innecesarias. La versión
infecciosa es denominada simplemente beta y activa a
su propio precursor, de esta forma se autorreplica
comportándose como prion
Fuente : Web

Por otra parte, en el hongo filamentoso Podospora

anserina se encuentra el prion Het-s

Dalstra et.al .2005

Propiedades fisicoquímicas
Propiedades fisicoquímicas PrPsc
Invisibles al microscopio óptico y electrónico. No
presentan estructuras de partículas (como los virus)
definidas al microscopio electrónico.
Filtrable con poros de 25 nm. Fuente: Web

Resistente a:
- Formaldehido
- EDTA
- Proteasas (Tripsina, pepsina)
- Radiación ultravioleta (2540 A)
- Radiación ionizante
- Nucleasas
- Autoclavado

Fuente: Web
Propiedades biológicas
Prpsc no solo se acumula en retículo donde desencadena la respuesta
UPR, sino también en lisosomas y citoplasma.
Propiedades
Existencia de cepas (“strains”)
biológicas
Composición proteica exclusivamente: proteína del prión (PrP)

Propiedades fisicoquímicas y biológicas. PrPc

Presentan barrera de especie
Prolongado período de incubación
Soluble en detergentes aniónicos
Patología crónica progresiva
Pueden existir en múltiples formas moleculares Sensible a la digestión por proteasas

Carecen de cuerpos de inclusión Es monomerica y se degrada rápidamente.

Periodo de adaptación a nuevos hospedadores

Fatal en todos los casos No inducen respuesta inmune en el hospedador
infectado.
No inducen respuesta inmune en el hospedador infectado
Composición proteica exclusivamente: proteína
del prión (PrP)

Se ubica en dominios de membrana donde se

produce endocitosis
Glosario

Fuente: Virus Taxonomy. 8 Report

Clasificación taxonómica

Fuente: Virus Taxonomy. 8 Report

Proteína priónica mutada y normal

Comparación PrPsc PrPc

Estructura Globular Extendida
Resistencia a la Si No
proteasa

Presencia de Scrapie Si No
en fibrillas

Localización dentro Vesículas Membrana

o sobre las células Citoplasmáticas Plasmática

Multiplicación Días Horas

PrPc (cellular prion protein)

Es una proteína celular normal que se expresa

en las neuronas y células de la glía en el cerebro
y médula espinal. También está presente en
otros tejidos, principalmente tejido linfoide como
el bazo y en las células del sistema inmune tales
como células dendríticas y linfocitos B .

Esta proteína se localiza en la superficie celular

(es una glicoproteína de membrana) esto
sugiere que podría tener alguna función
relacionada con la transducción de señales,
uptake de ligandos, adhesión celular y
reconocimiento celular.
Entre las funciones que se cree que posee
Prpc se pueden destacar
El posible papel en el metabolismo del cobre
y defensa antioxidante

PrPc cumpliría funciones relacionadas con la

defensa frente a los radicales libres. Esta
defensa la ejercería mediante su capacidad de
secuestrar iones cobre libres del medio celular
y mediante su asociación con superoxido
dismutasas (SODs).
Interacción con otras proteínas: supervivencia,
diferenciación y transducción de señales

PrPc es capaz de unirse a heparinas y compuestos

similares a esta. La heparina es un polianión sulfatado
similar a los glicosaminoglicanos.
Los glicosaminoglicanos forman parte de la composición
de las placas amiloides que se forman en presencia de
PrPsc. Aparentemente, las moléculas de heparina
secuestran PrPc impidiendo que se una a los
glicosaminoglicanos por competencia. En un ensayo de
union de PrPc a los polianiones mediante la técnica de
surface plasmon resonance muestra que la afinidad de
PrPc recombinantes por los polianiones esta
correlacionada con una menor capacidad de interactuar
con PrPsc
 PrPc y transducción de señales

A través de su localización en la membrana, PrPc

podría participar en vías de transducción de señal.
Según algunos autores, la infección por priones
afecta la función de canales de calcio. Por ejemplo,
se vio que en células infectadas estimuladas con
bradikinina (un estimulante de la función de los
canales de calcio) presentaron una menor respuesta
de los mismos en comparación a células control no
infectadas.
Migración celular:

PrPc en celulas endoteliales que forman parte

de la barrera hematoencefálica se acumula en
las uniones celula-celula y participa de la
transmigración de monocitos de los tejidos
periféricos hacia el cerebro posiblemente
mediante reconocimiento específico de ciertas
moléculas de la superficie de los monocitos.

Histología de Células endoteliales

Mecanismo de multiplicación
Mecanismo transmisión

TRANSMISION HEREDITARIA

- 15% de todos los casos de

enfermedades por priones
- Herencia automática y dominante
- La mutación es responsable de una
mayor susceptibilidad a la
enfermedad

Fuente : Web
 TRANSMISIÓN INFECTOCONTAGIOSA

Comprende :
- La aparición de la partícula infecciosa
en el huésped
- El desarrollo de la enfermedad o
proliferación del patógeno

Proceso transmisión infectocontagiosa

Fuente : Web
 TRANSMISIÓN ESPONTANEA

La aparición espontánea de PrPSc

involucraría una mutación somática
producida a nivel del gen de PrPc, cuyo
producto sería una proteína con una
predisposición al plegamiento erróneo. Una
vez producida PrPSc, la conversión de PrPc
a PrPSc es exponencial.

Fuente Web
Enfermedades
Enfermedades o patologías asociadas a la priones

Fuente : Web Fuente : Web

 Enfermedades o patologías asociadas a la priones

• Las encefalopatias espongiformes transmisibles (TSEs), son enfermedades neurodegenerativas

fatales, con periodo de incubación lento, pueden tardar años o décadas en manifestar
síntomas, y actualmente no tienen tratamiento. Se producen debido a la acumulación de
priones PrP (específicamente la conformación PrPsc de dicho prion) en el sistema nervioso.
Esto desencadena la muerte neuronal por apoptosis.

También conocida como enfermedad de las vacas locas, es una

enfermedad bastante reciente. Surgió en el Reino Unido en al
década del 80 , desde donde se extendió a otros países
europeos. Se origino debido al uso de harinas fabricadas con
restos de ovejas presumiblemente infectadas con scrapie.
Los animales infectados desarrollan trastornos en la locomoción
y en el
comportamiento tales como posturas anormales, agresividad,
nerviosismo, dificultad para alimentarse e incorporarse (66).
En la BSE aparece vacuolización bilateral simétrica en el tronco
encefálico
Fuente Web
Proteína priónica en levaduras
• En microorganismos, y concretamente en levaduras, también existen los priones, aunque su
presencia no tiene el mismo componente patogénico que en animales. Ya hace casi 10 años
se describió que, en levaduras, los priones podían resultar evolutivamente útiles: algunas
proteínas normales podían pasar a la conformación priónica, alterándose así su función
biológica y permitiendo que se adquiriese una nueva función que, además, podría transmitirse
a la siguiente generación (recordar que en este caso no se trata de cambios en la secuencia
de los ácidos nucleicos, pero como los priones intervienen en el fenotipo, serían igualmente
heredables, siempre y cuando las proteínas priónicas llegasen a las células hijas, vía la división
del citoplasma, por ejemplo).

Fuente: Web Fuente: Web

Proteína priónica en levaduras
• Saccharomyces cereviasiae puede albergar un elemento denominado [URE3] que en
la reproducción sexual con células carentes [URE3] es heredado por toda la
progenie en lugar de hacerlo en concordancia con las leyes de Mendel.
• El elemento genético de levadura Psi, es la forma inactiva del terminador de la
traducción sup35 con semejantes a un prion que participa en la terminación de la
transcripción.

Diferencias entre variantes de

priones débiles y fuertes [PSI +].
(A) Diferencias de color de la
colonia. La cepa débil [PSI +] es rosa
y da lugar a colonias rojas ([psi2])
más frecuentemente que la cepa
fuerte [PSI +] que es más blanca.

Fuente: Susan W. Liebman, et al. Prions in Yeast

Prion Características
Se trata de un prion con función enzimática. La forma infecciosa se denomina beta y es la forma activa de la proteasa vauolar beta.
Esta conformación es esencial para activar al precursor inactivo. La presencia de la forma beta es esencial para las células de
Beta levadura, en su ausencia son incapaces de esporular y mueren más fácilmente al ser cambiadas de medio.

Es un prion que determina la inducibilidad del prion psi. La habilidad de la sobrexpresión de sup35 de inducir la aparición
espontanea de psi es mayor en presencia de PIN. Existe en dos formas, la conformación normal se denomina rnq1p y esta
PIN codificada en el gen RNQ1 y la conformación prionica (pues es la que se puede propagar) es PIN. En presencia de PIN, la proteína
rnq1p se agrega en amiloides y toma la conformación de PIN.

Este prion tiene dos conformaciones: sup35 que es la versión normal con función en la traducción y psi que es la forma infecciosa
que se propaga a si misma mediante conversión de las moléculas de sup35. También forma amiloides como URE3 y su propagación
puede ser tanto inhibida como favorecida por chaperonas como por ejemplo hsp104,hsp40 y hsp70.
PSI La presencia de la forma infecciosa psi depleta a las células de sup35 y de esta manera la síntesis de proteínas continua más allá
del codón de terminación. El dominio prionico N-terminal de sup35 al igual que el de ure2p es rico residuos de glutamina y
asparagina.

Mutaciones en el gen ure2 que codifica la proteína ure2p no presentan la represión de los genes involucrados en el metabolismo
de compuestos pobres en nitrógeno aun en presencia de compuestos ricos en nitrógeno como el amonio.
La proteína codificada por el gen ure2 puede existir en dos conformaciones, una de ellas es la proteína ure2p mencionada y la otra
se denomina URE3 que tiene comportamiento infeccioso en forma análoga al caso de prp. En presencia de URE3, las levaduras
URE3 presentan el mismo fenotipo que las levaduras mutantes nulas para el gen ure2 pues URE3 convierte a ure2p en más copias de sí
misma.
URE3 posee las tres propiedades esperadas para los priones de levadura. Las células que presentan URE3 tienen también ure2p
parcialmente resistente a proteasas y esta resistencia es característica de los amiloides.
Características que los distinguen de los
virus:
• “Curabilidad reversible”:
• La presencia de la conformación
no replicativa es necesaria para
la propagación de la
conformación infecciosa.
• La sobre-expresión de la forma
no infecciosa incrementa la
frecuencia con que esta aparece
(es porque aumenta la
probabilidad del cambio
espontaneo).

Fuente: Web
Detección a nivel de laboratorio

El método más seguro para el diagnóstico de

una enfermedad priónica consiste en la
detección inequívoca de la proteína PrPSC por
lo que las técnicas basadas en la utilización de
anticuerpos específicos, (principalmente Western
blot e inmunohistoquimica), son las más
empleadas en el diagnóstico.

Actualmente se dispone de anticuerpos

monoclonales que distinguen entre PrPsc y PrPc

Anticuerpos monoclonales . Fuente Web

 Test Prionics
Este test emplea muestras de tejido cerebral de animales
enfermos, de animales clínicamente sanos y de otros con
enfermedades neurológicas no relacionadas con los priones
y la mayor desventaja que presenta es que su sensibilidad
no es suficientemente alta como para detectar las Test Prionics. Fuente : Web
isoformas patológicas en muestras de animales vivos, por
lo que únicamente se pueden analizar muestras de
cerebro tras el sacrificio

Para revelar la presencia de PrPsc se pueden emplear diversos pre tratamientos.

Uno de los más simples y efectivos para la tinción de la proteína, y también de
agregados amiloides, es el tratamiento con 90% de ácido fórmico. Además, se
puede utilizar microscopia electrónica para detectar fibrillas asociadas a scrapie
(SAF) por microscopia electrónica que permiten diagnosticar el scrapie .

Microscopio electrónico . Fuente : Web