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FACULTAD DE INGENIERÍAS
PROGRAMA DE INGENIERÍA DE ALIMENTOS
Asignatura : Biotecnología
Docente : Óscar Julián Sánchez Toro
Tema : Cinética Enzimática Básica y Reactores Enzimáticos
Tabla 1.
Tiempo, min Concentración de Glucosa, μmol/mL
1 0,05
5 0,23
10 0,38
15 0,52
30 1,03
2. Se requiere procesar 20 ton de harina de maíz (maizena) como materia prima para
la producción de jarabe de glucosa. La harina contiene 91,3% (w/w) de almidón.
Dos proveedores de glucoamilasa comercial ofrecen sendos preparados
enzimáticos para este proceso. El proveedor A suministra el preparado AMG® 300
de Novozymes a un precio de $750.000 el litro; en la ficha técnica de este
preparado se indica que su actividad enzimática es de 300 GAU/mL. Por su parte, el
proveedor B comercializa el preparado OPTIDEX® L-400 de Genencor a un precio
de $850.000 el kilogramo; la actividad enzimática de este segundo preparado es de
350 GAU/mL de acuerdo con su ficha técnica. En el laboratorio de la empresa
procesadora de harina de maíz se realizaron ensayos con cada uno de los dos
preparados, arrojando los datos de la Tabla 2; para ello, se incubaron 100 mL de
una solución de 4% de almidón de Lintner con 1 mL del preparado enzimático y se
midió la concentración de glucosa formada al minuto de reacción en condiciones
estándar para esta enzima (pH de 4,5 y temperatura de 60ºC). Se definió una
unidad de actividad glucoamilasa (U) como la cantidad de enzima que en una
1
solución al 4% de almidón de Lintner forma 1 µmol de glucosa en 1 minuto bajo
condiciones estándar. Por su parte, los fabricantes de los preparados enzimáticos
emplearon la unidad GAU como medida de la actividad enzimática; una unidad GAU
es la cantidad de glucoamilasa que libera 1 g de azúcares reductores (como
glucosa) a partir de una solución de almidón soluble por hora en las condiciones
especificadas en cada ensayo. Según la literatura científica, la dosis más adecuada
para convertir el almidón de maíz en glucosa empleando glucoamilasa es de 22 U/g
de almidón; en contraste, el rango de las dosis de preparado enzimático de
glucoamilasa recomendado por los fabricantes es de 0,36 a 1 kg (de 0,29 a 0,88 L)
por tonelada de almidón a procesar (en base seca). Compare las actividades
enzimáticas específicas de cada preparado en U/mL y U/mg obtenidas en el
laboratorio con las indicadas por los proveedores. ¿Cuál preparado enzimático
recomendaría usted?
Tabla 2.
Preparado Concentración de Contenido de proteína en Densidad del
enzimático glucosa, el preparado, preparado,
mol/L mg/mL g/L
AMG 300® 0,25 0,40 1140
OPTIDEX L-400® 0,31 0,30 1160
2
d. Mostrar las gráficas de grado de transformación y de rendimiento en función
del tiempo de reacción.
Tabla 3. Tabla 4.
S0, mmol/L V0, mmol/(L.min) S0, mmol/L V0, mol/(L.min) × 106
0,20 0,034 4,100 177
0,29 0,051 0,950 173
0,50 0,067 0,520 125
1,00 0,100 0,103 106
2,50 0,133 0,049 80
1,06×10-2 67
5,1×10-3 43
3
Tabla 5.
S0, mmol/L V0, mmol/(L.min)
1 0,20
2 0,22
3 0,30
5 0,45
7 0,41
10 0,50
15 0,40
25 0,33
4
10. La velocidad de una reacción enzimática para la síntesis de un compuesto
biológicamente activo se puede describir de acuerdo a la siguiente ley de
segundo orden:
v = k S2
v = k 5 S3
Vmáx S
v=
S
KM + S +
Ki
5
35% mayor que el tiempo requerido de la reacción enzimática en un
proceso por lotes debido a la necesidad de preparar los reactores para el
siguiente lote.
b. El tiempo de residencia requerido para el proceso continuo en el biorreactor
y la cantidad de producto obtenido durante un año.
Datos: KM = 2 g/L, Ki = 1 L1/2/g1/2, Vmáx = 1,8 g/(L.h).
Vmáx S
v=
S
S 1 + + K M
Ki
6
15. Usted llevó a cabo una reacción enzimática en un reactor CSTR de 5 L. La
concentración de sustrato en la alimentación fue de 100 mmol/L y el caudal se
ajustó a 1 L/h. Después que se alcanzó el estado estacionario, la
concentración de sustrato en el efluente fue de 10 mmol/L. La enzima no
abandona el biorreactor debido a la ubicación de una membrana que retiene
las proteínas en la tubería de salida del mismo.
a. ¿Cuál es la velocidad de la reacción enzimática dentro del reactor?
b. Usted midió la concentración en estado estacionario del sustrato en el
efluente como una función del caudal de alimentación y encontró los
resultados que se consignan en la Tabla 6. Estime los parámetros cinéticos
del modelo de Michaelis-Menten usando el mejor método de linealización
que tenga en cuenta el peso de todos los puntos.
Tabla 6.
Caudal, L/h Concentración de Sustrato
en el Efluente, mmol/L
0,70 4,0
0,80 7,0
1,00 10,0
1,16 14,0