INSTITUTO TECNOLOGICO DE BOCA DEL RIO

LICENCIATURA EN BIOLOGIA

MATERIA: Botanica estructural

Histoquimica

INTEGRANTES
Histoquímica es el estudio químico de los tejidos independientemente del método de análisis
empleado. Dentro de la histoquímica se incluyen a aquiellas técnicas que supongas una reacción
química en la que intervienen moléculas pertenecientes al propio tejido. El objetivo de la
histoquímica es poner de manifiesto una molecula o conjunto de moléculas presente en una
sección de histología y estudiar su distribución tisular “in situ”. Estas moléculas son difícilmente
discernibles con técnicas generales y por tanto es necesarion realizar pasos previos para poner de
manifiesto la molecula que queremos detectar. Se puede dividir la histoquímica en 2 tecnicas:
reacciones químicas e histoquímica enzimática.

La histoquímica determina la presencia de una enzima en los tejidos, al lograr in situ la coloración
de uno de los productos de la reacción que dicha enzima cataliza. Con este objeto se incuba el
tejido a estudiar en una solución que contiene un substrato artificial (AB) sobre el que la enzima
actua, descomponiéndolo en subproductos (A+B). Dicha solución contiene a la vez un reactivo (R)
que se una a uno de estos subproductos, coloreándolo y haciéndolo asi visible (BR).

PRINCIPIO DE LA HISTOQUIMICA
Enzima
1. A B A+B
(productos de la reacción)
Reactivo
2. B BR
(compuesto coloreado)

Las reacciones químicas consisten en la alteración química de las moléculas del tejido para
posteriormente poder colorearlas. Existen técnicas histoquímicas para detectar glúcidos, proteínas
y nucleótidos. del tejido de mantener funcional su centro activo tras el proceso de fijación. Estas
enzimas y las células que poseen se ponen de manifiesto mediante una reacción enzimática que
convierte a unos sustratos solubles e incoloros en productos insolubles y coloreados.

 Ejemplos de tinciones histoquímicas

1. La técnica histoquímica más empleada es la reacción de PAS (Periodic Acid Schiff). Se
utiliza para la detección de hidratos de carbono, libres o conjugados, cuando están en
cantidades relativamente grandes en los tejidos. La modificación química del tejido
consiste en la oxidación mediante el ácido periódico de los enlaces entre los carbonos
próximos que contienen grupos hidroxilos. Esto provoca la formación de grupos aldehídos
que serán reconocidos por el reactivo de Schiff, el cual se combinará con ellos para dar un
color rojizo brillante. Entre los componentes del reactivo de Schiff está la pararosanilina
(un componente de la fucsina básica) tratada con ácido sulfúrico. Una gran ventaja de la
tinción histoquímica PAS es su capacidad de discriminación de tipos de glúcidos con
pequeñas modificaciones de la técnica.
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Tinción con hematoxilina-eosina (imagen de la izquierda) y PAS-hematoxilina (imagen de la

derecha) de las vellosidades del intestino de humano cortadas transversalmente. Se puede
apreciar a las células caliciformes teñidas de rosado con la técnica de PAS por su alto contenido en
mucopolisacáridos, mientras que en una tinción general aparecen transparentes, sin teñir.

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Pasos de la tinción histoquímica PAS-Hematoxilina sobre cortes de parafina. Los pasos con letras
en color verde son los específicos para esta tinción.

2. La histoquímica enzimática o histoenzimología se basa en la capacidad que tienen algunos

enzimas del tejido de mantener funcional su centro activo tras el proceso de fijación. Estos
enzimas y las células que los poseen se ponen de manifiesto mediante una reacción
enzimática que convierte a unos sustratos solubles e incoloros en productos insolubles y
coloreados. Los sustratos son específicos para el enzima y los productos se depositan en el
lugar preciso donde se produjo la reacción, es decir, donde se localiza el enzima. Las
enzimas que se pueden detectar son variadas como las peroxidasas, fosfatasas,
deshidrogenasas, diaforasas, acetilcolinesterasa, etcétera. Hay que tener en cuenta que
cuando queremos detectar una actividad enzimática es recomendable no incluir el
material en medios como la parafina puesto que la deshidratación y la temperatura
elevada pueden dañar la conformación de la enzima y por tanto la actividad de su centro
 activo. Por ello estas técnicas se realizan normalmente en secciones obtenidas por
congelación o con el vibratomo.

La actividad NADPH diaforasa se asocia a las enzimas sintasas del óxido nítrico en sistema nervioso
y vascular. A estos enzimas se les ha relacionado con el control del flujo sanguíneo y con ciertos
aspectos de la fisiología del sistema nervioso. Esta técnica permite detectar neuronas que
expresan la enzima sintasa del óxido nítrico de una forma sencilla y rápida. La reacción es NADPH +
tetrazolio = NADP+ + formazán. Es el formazán el producto coloreado e insoluble que se puede
observar con el microscopio óptico, incluso con el microscopìo electrónico de transmisión.

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Imagen de un corte de 60 µm de grosor de cerebro obtenida con un criostato y procesada para

histoquímica enzimática que pone de manifiesto una actividad diaforasa perteneciente a la enzima
óxido nítrico sintasa neuronal que aparece en algunas neuronas (células con un color azul intenso).
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Los pasos para la detección histoquímica de la actividad diaforasa es muy sencilla. Tras una
fijación, preferentemente por perfusión, hay que permeabilizar el tejido con un disolvente de
lípidos como el Triton-X100. El revelado se produce a 37 oC y el final de la reacción se controla
mediante observaciones periódicas. Las concentraciones del sustrato (NADPH) y del azul de
tetrazolio varía según el tejido o el proceso de fijación.

3. Tincion con Hematoxilina-Eosina

es un compuesto que se obtiene de la planta leguminosa Haematoxylum campechianum ,

conocida también con el nombre de palo de Campeche. Es un producto natural que al ser oxidado
constituye una substancia de color morado oscuro denominada hemateína. Se utiliza en histología
para teñir los componentes aniónicos (ácidos) de los tejidos, a los que da una coloración violeta.
Tiñe intensamente los núcleos de las células, dado que estos contienen ácidos nucleicos ricos en
radicales ácidos.

(fuente: https://www.amaina.com/tinturas-y-compuestos/2180-tintura-
hematoxilina-25-ml-euromex-5286.html)
La Eosina es un colorante basofilo (afinidad con lo básico,
porque es acida), en forma de polvo rojo cristalino, de uso
ampliamente extendido en el ámbito industrial, desde la
industria textil hasta el estudio biológico e histológico. Como
curiosidad, también se utiliza en la coloración de la gasolina.

(fuente:
https://www.paraforme.es/mercuroc
hrome/solucion-eosina-2-p1735.html)

El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe
estructuras ácidas (basófilas) en tonos Azul y Púrpura, como por ejemplo los núcleos celulares; y el
uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidófilos) en tonos de color rosa, gracias a su
naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.

Técnica

Sumergir los preparados histológicos en xilol para eliminar los excesos de parafina.

Luego pasan por una serie de alcoholes (100°. 95° y 70°).

Se lava en agua para eliminar exceso de alcohol

Se sumerge en hematoxilina por 10 minutos, luego se lava en agua para eliminar excesos y se pasa
rápidamente por alcohol ácido.

Se lava nuevamente

Se sumerge 30 segundos en eosina.

Se pasa por otra serie de alcoholes, en orden creciente (70°, 95° y 100°).

Finalmente se deja remojar 10 minutos en xilol, antes de realizar el montaje final

Referencia

Megías, M.,Molist P.Y Pombal, M.(2018).Técnicas histológicas de tinción. Departamento de

Biolog´ıa Funcional y Ciencias de la Salud. Fcacultad de Biologıa. Universidad de Vigo.(26)
https://scielo.conicyt.cl/pdf/rcp/v47n2/art09.pdf

http://hematoxilina-eosina-uc.blogspot.com/
https://epidemiologiamolecular.com/histoquimica-citoquimica/
BIBLIOGRAFIA
https://mmegias.webs.uvigo.es/descargas/tecnicas-
tincion.pdf