FACULTAD DE MEDICINA HUMANA

CURSO

BIOQUMICA

TEMA

ESPECTROFOTOMETRIA

DOCENTE

LIC. NESQUEN JOSÉ TASAYCO YATACO

SECCIÓN

MD3T1 – PRÁCTICA C – L502

ALUMNOS

CALLO VÉLEZ, ANDREE JEFFERSON

ENRIQUEZ QUISPE, JOSE ALFREDO

FLORES BRICEÑO, AMADOR JOSE ANTONIO

LEÓN MENESES, ESTRELLA SADITH

PÉREZ ZARATE, NELSA ANALY

CICLO

III

AÑO

2018
OBJETIVOS

 El objetivo de la práctica es aprender el uso del espectrofotómetro, así como

también saber preparar un espectro de absorción y una curva estándar.
 Determina la concentración de muestra problema
 Adquirir habilidades y competencias básicas en el desempeño dentro de un
laboratorio de bioquímica.

MATERIALES

 01 Espectrofotómetro
 Azul de metileno
 Celdas para espectrofotómetro
 Agua destilada
 Tubos de ensayo
 Gradillas
 Probetas 50 mL
 Pipetas 10 mL
 Propipetas
 Beacker de 250 mL

PROCEDIMIENTO

Preparación de una curva de calibración: el experimento consiste en preparar tubos de

concentración creciente de un colorante y leerlos al espectrofotómetro, llevando a cero
(0) el aparato con agua destilada. Construir una gráfica usando papel milimetrado para
las lecturas hechas en DO (densidad óptica) o papel semilogarítmicos para las lecturas
hechas en % transmitancia. Para el efecto, preparar cinco tubos de acuerdo al esquema
y leer las soluciones al espectrofotómetro a 540 nm de longitud de onda. Practicar esta
lectura tanto en DO como en % de transmitancia. Con los datos obtenidos construir en
un papel milimetrado la gráfica de absorbancia en el eje de las Ordenadas vs
concentración de azul de metileno en el eje de las Abscisas. Una vez obtenida la curva
de calibración, medir la absorbancia de las muestras desconocidas 1 y 2.

Calcular la concentración de la muestra problema por los siguientes métodos:

a) Gráficamente extrapolando su absorbancia en la curva de calibración.

b) Usando Factor de Calibración, multiplicando su absorbancia por el factor de
calibración del standard.
1. Preparar 80 ml de azul de metileno 5 mg/ml.

 5 mg 1 ml
X 80 ml

X= 80 ml x 5 mg/1 ml
X= 400 mg

 20 gts = 1 ml = 1g
20 gts 1g
X 0.4 g
X= 8 gotas

2. Utilización del azul de metileno para preparar la muestra.

3. Muestra del azul de metileno terminada.

4. Preparación de los tubos de ensayo con las cantidades tanto de agua destilada
como de azul de metileno detalladas en el cuadro.
5. Llevado de las muestras al espectrofotómetro para que sean leídas tanto la
absorbancia como la transmitancia.

6. Procesamiento de la información obtenida gracias al espectrofotómetro de las

muestras leídas.
CONCLUSIONES

 Esta práctica sirvió no solo para ver cómo se utiliza el espectrofotómetro

sino también para saber utilizar los datos que éste arroja. Además de conocer el
funcionamiento correcto del espectrofotómetro pues se tiene que ajustar siempre
a cero con la muestra "BLANCA" al término de cualquier análisis de distintas
concentraciones.
 Gracias al trabajo experimental concluido, se pudieron relacionar y entrelazar
diversos conceptos ya antes manejados y estudiados.
 La absorbancia y la transmitancia son características de todos los líquidos y nos
permiten conocer su concentración de soluto, además se manifiestan a través
del color.
 La medida de la absorbancia con el espectrofotómetro es un excelente método
ya que es muy confiable y brinda valores que ayudan a calcular la
concentración de soluto de las sustancias que absorben luz en diferentes
intervalos de longitud de onda, las cuales se pueden graficar en una curva de
calibración donde se demuestra que la absorbancia y la concentración son
directamente proporcionales.

 La colorimetría tiene una amplia aplicación en diferentes campos como el control

de calidad de alimentos, en farmacia, en la industria del papel y celulosa,
cuantificación de proteínas y muchos más.