CITRATOS

Fundamento
En el medio de cultivo, el fosfato monoamónico es la única fuente de nitrógeno y el citrato de
sodio es la única fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios para el desarrollo
bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el magnesio es cofactor enzimático. El
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, el azul de bromotimol es el indicador de pH, que
vira al color azul en medio alcalino y el agar es el agente solidificante. El medio de cultivo es
diferencial en base a que los microorganismos capaces de utilizar citrato como única fuente de
carbono usan sales de amonio como única fuente de nitrógeno, con la consiguiente producción
de alcalinidad. El metabolismo del citrato se realiza, en aquellas bacterias poseedoras de citrato
permeasa, a través del ciclo del ácido tricarboxílico. El desdoblamiento del citrato genera
progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este último, en presencia de un medio alcalino, da
origen a ácidos orgánicos que al ser utilizados como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y esto es indicativo de la producción de
citrato permeasa
Interpretación Condiciones de incubación
- Positivo: crecimiento bacteriano con un Estriar la superficie del medio de cultivo.
intenso color azul en el pico de flauta. - En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24-72 horas.
Negativo: ausencia de crecimiento y Algunos microorganismos pueden requerir
permanencia del color verde del medio de hasta 7 días de incubación.
cultivo.
Azul = indica condiciones alcalinas = cuando el
ácido cítrico se metaboliza, se produce
amonio y Na+

SIM
Medio de cultivo en el cual la tripteína y la peptona aportan nutrientes para el desarrollo
microbiano. El triptófano es un aminoácido constituyente de muchas peptonas y particularmente
de la tripteína y puede ser metabolizado por algunas bacterias para formar indol. En el proceso
interviene un conjunto de enzimas llamadas triptofanasa. El indol producido se combina con el
aldehido del reactivo de Ehrlich o de Kovac ś , para originar un compuesto de color rojo. A partir
del tiosulfato de sodio los microorganismos pueden generar ácido sulfhídrico que reacciona con
el hierro presente formándose un compuesto de color negro. El agar es el agente solidificante y
a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para
detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que
difunde mas allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio.
Interpretación Condiciones de incubación
Movilidad: Observar si el crecimiento o Con ansa puntiforme, en profundidad y en el
turbidez va más allá de la línea de siembra. centro del tubo.
Positivo: se observa un crecimiento y turbidez Incubar en aerobiosis 18-24 hs a 35-37 °C
que abarca más allá de la línea de siembra.
Negativo: se observa crecimiento sólo en la
línea de siembra, el resto de la superficie se
observa límpida.
Producción de SH2:
Positivo: ennegrecimiento del medio.
Negativo: no se observa cambio de color en el
medio de cultivo.
Indol: agregar 3 a 5 gotas del Reactivo de Indol
(Provisto separadamente). Observar el cambio
de color en la parte superior del tubo.
Positivo: La parte superior del tubo cambia a
rojo.
Negativo: No se observa color rojo.

TSI
Fundamento
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados
para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono
fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido
sulfhídrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con
el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador
de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por
fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de
fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de
hidrógeno que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro
de color negro.
Interpretación Condiciones de incubación
Observar el color del medio de cultivo y la Con aguja de inoculación inocular el medio de
producción de gas. cultivo, picando el fondo y extendiendo sobre
1- Superficie alcalina/profundidad ácida (pico la superficie del mismo.
rojo/fondo amarillo): el microorganismo En aerobiosis, a 35-37°C durante 18 a 24
solamente fermenta la glucosa. horas.
2- Superficie ácida/Profundidad ácida (pico
amarillo/fondo amarillo): el microorganismo
fermenta glucosa, lactosa y/o sacarosa.
3- Superficie alcalina/Profundidad alcalina
(pico rojo/fondo rojo): el microorganismo es Los resultados de la prueba deber ser leídos luego de 18 a 24
horas de incubación. Si la lectura se efectua a tiempos menores
no fermentador de azúcares. pueden existir falsos positivos por la presencia de acidez o la
4- La presencia de burbujas o la ruptura del acidez generada no sea suficiente para producir el viraje del
medio de cultivo indican que el indicador rojo de fenol del color rojo al amarillo. Si se lee luego
de 24 horas se pueden obtener resultados falsos negativos por
microorganismo produce gas. consumo de peptonas durante el crecimiento de los
5- El ennegrecimiento del medio indica que el microorganismos con la consecuente alcalinidad del medio de
cultivo.
microorganismo produce ácido sulfhídrico.

Urea
Fundamento
En el medio de cultivo, la tripteína y la glucosa, aportan los nutrientes para el desarrollo de
microorganismos. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el rojo de fenol es el
indicador de pH. El agar es el agente solidificante. Las bacterias hidrolizan la urea por medio de
la enzima ureasa liberan amoníaco y dióxido de carbono. Estos productos alcalinizan el medio
de cultivo haciendo virar el indicador rojo de fenol del color amarillo al rojo. Es recomendado
especialmente para la detección de la actividad ureásica en bacterias que hidrolizan lentamente
la urea ya que la fermentación de la glucosa presente activa la enzima ureasa microbiana. Este
es el caso de Klebsiella spp., Enterobacter spp y Citrobacter spp
Interpretación Condiciones de incubación
Microorganismos que hidrolizan la urea: el A partir de un cultivo puro del microorganismo
medio de cultivo es de color rosado-rojizo. en estudio, estriar la superficie del medio en el
Microorganismos que no hidrolizan la urea: el pico de flauta. Se recomienda no punzar la
medio de cultivo permanece de color amarillo. capa profunda para controlar el color.
En aerobiosis, a 35-37 ºC, durante 18-24
horas. Los microorganismos que hidrolizan la
urea lentamente pueden requerir hasta 72
horas de incubación.
INSTRUCCIONES Suspender 24 g del polvo en 950 ml de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos. Calentar con agitación frecuente y
llevar a ebullición para disolución total. Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Enfriar a 50°C y agregar 50 ml de una solución de urea al 40% previamente esterilizada por filtración o cloroformo. Fraccionar en tubos
y dejar solidificar el medio en pico de flauta con fondo profundo.

MIO
Fundamento
Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia de extracto de levadura, peptona y
tripteína. La tripteína aporta gran cantidad de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa a
partir del cual se forma indol que puede ser revelado con el reactivo de Ehrlich (Indol Reactivo
REF B1550361) o de Kovac´s por la formación de un compuesto de color rojo. La glucosa es el
hidrato de carbono fermentable, la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina
decarboxilasa, el púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color
púrpura y en medio ácido es amarillo. El agar es el agente solidificante y a esta concentración le
otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que
se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea
de inoculación del microorganismo en estudio. Los microorganismos fermentadores de glucosa
acidifican el medio de cultivo y producen viraje del color púrpura al amarillo. Las condiciones de
acidez son favorables para la actividad enzimática ornitina decarboxilasa, que actua sobre la
ornitina generando putrescina, con la consecuente alcalinización del medio de cultivo y viraje al
color púrpura.
Interpretacion Condiciones de incubación
Movilidad: Sembrar por punción profunda utilizando
Resultado positivo: presencia de turbidez o aguja de inoculación.
crecimiento mas allá de la línea de siembra. En aerobiosis, a 35-37 °C durante 18-24 horas
Resultado negativo: crecimiento solamente
en la línea de siembra.
Ornitina decarboxilasa:
Resultado positivo: color púrpura.
Resultado negativo: color amarillo. A veces se
puede desarrollar un color violáceo en la
superficie del medio.
Prueba del indol:
Agregar al medio de cultivo 3-5 gotas de Indol Reactivo.
Resultado positivo: color rojo.
Resultado negativo: el color del reactivo
revelador permanece incoloro-amarillento.

MR-VP Medio
Fundamento
En el medio de cultivo, la pluripeptona aporta los nutrientes necesarios para el desarrollo
bacteriano y la glucosa es el hidrato de carbono fermentable. La glucosa puede ser metabolizada
por los microorganismos, a través de distintas vías metabólicas. Según la vía utilizada, se
originarán productos finales ácidos (ácido láctico, ácido acético, ácido fórmico), o productos
finales neutros (acetil metil carbinol). Esta diferencia en el metabolismo bacteriano, podría ser
reconocida por la adición de un indicador como rojo de metilo, para revelar la presencia de
productos ácidos, y por la adición de alfa naftol e hidróxido de potasio para evidenciar la
presencia de productos finales neutros. Voges y Proskauer, describieron una coloración rojiza que
aparecía después de adicionar hidróxido de potasio a los cultivos de ciertos microorganismos en
medio con glucosa. Esta coloración se debe a la oxidación del acetilmetil carbinol a diacetilo el
cual reacciona con la peptona del medio para dar un color rojo.
Interpretación Condiciones de incubación
Examinar los tubos y revelar las pruebas bioquímicas En aerobiosis, a 35-37°C durante 48 a 72
Prueba del rojo de metilo: añadir unas gotas de una horas.
solución de rojo de metilo al 0.04%, observar el color del
medio.
Prueba del Voges Proskauer: añadir 0,6 ml de alfa naftol
al 5% en alcohol etílico absoluto y 0.2 ml de hidróxido de
potasio al 40% a 2.5 ml de cultivo. Agitar vigorosamente
el tubo, y dejar a temperatura ambiente durante 10-15 Extra
minutos. Observar el color de la superficie del medio. Rojo de metilo. El rojo de metilo es un indicador de pH.
Prueba del rojo de metilo: Act˙a entre pH 4,2 y 6,3 variando desde rojo (pH 4,2) a
Resultado positivo: color rojo. amarillo (pH 6,3). Mediante esta prueba se comprueba la
Resultado negativo: color amarillo. capacidad de un microorganismo de producir y mantener
estables los productos terminales acidos de la
Prueba de Voges Proskauer:
fermentacion de la glucosa por la vÌa de la fermentacion
Resultado positivo: desarrollo de un color rojo acidomixta. Se utiliza como parte de la identificacion a
en pocos minutos después de una completa nivel de especie de los bacilos entÈricos gramnegativos.
agitación del tubo.
Resultado negativo: ausencia de color rojo Limitaciones
Examinar los tubos y realizar la prueba de Rojo de Metilo
y Voges Proskauer luego de la incubación durante 48 a 72
horas. No realizar las pruebas a las 24 horas debido a la
presencia de resultados falsos positivos y falsos negativos
respectivamente.