Marco Teórico

Agar Cetrimida

USO. El medio Cetrimide Agar, es un medio selectivo para el aislamiento e

identificación del Pseudomonas aeruginosa.

PRINCIPIO. King y cols. Desarrollaron un medio denominado Medio A con el fin

de poner en evidencia la producción de Piocianina por la Pseudomonas. El
Cetrimide Agar es una modificación donde se ha incorporado la Cetrimida
(Bromuro de Cetiltrimetilamonio), compuesto de amonio cuaternario, como agente
inhibidor de la mayoría de la flora acompañante de Pseudomonas. Las cepas de
Pseudomonas son diferenciadas de otras especies por la producción de
Piocianina, pigmento azul, soluble en agua , que unido a la morfología de las
colonias y la producción de un característico olor a Aminoacetofenona, permite la
identificación de la P. aeruginosa. La producción de Piocianina es estimulada por
la presencia de Cloruro Magnésico y del Sulfato Potásico.

COMPOSICION POR LITRO DE MEDIO EN AGUA PURIFICADA

Hidrolizado Pancreático de Gelatina 20.0g

Cloruro de Magnesio 1.4g
Sulfato Potásico 10.0g
Cetrimida 0,3g
Agar 15g

pH : 7,2+/- 0,2

CARACTERISTICAS y LIMITACIONES DE USO. Las colonias que están

rodeadas de pigmentos azul-verdoso y presentan fluorescencia a la luz ultravioleta
(254 nm) en este medio pueden ser identificadas presuntivamente como
Pseudomonas aeruginosa. Aunque algunas cepas de P. aeruginosa no producen
Piocianina. Algunas especies de Pseudomonas pueden ser inhibidas en este
medio. La tinción de Gram, los test bioquímicos y serológicos son de ayuda para
confirmar los resultados. Las peptonas que intervienen en la composición pueden
afectar a la producción de pigmentos. Algunos microorganismos entéricos, pueden
presentar brillos amarillentos en el medio, pero carecen de la propiedad de
fluorescencia. Algunas cepas de Serratia, pueden presentar pigmentaciones
rosadas 3 Estudios de Lowbury y Collins han informado que la P. aeruginosa
puede disminuir su fluorescencia al ultravioleta cuando llevan un tiempo a
temperatura ambiente, pero esta fluorescencia reaparece si son incubadas de
nuevo.
Agar Vogel Johnson

Es un medio selectivo utilizado para el aislamiento de Staphylococcus aureus

coagulasa y manitol positivo.

COMPOSICION

pH final 7,2 ± 0,2

PREPARACION. Suspender los ingredientes en el agua destilada. Calentar

agitando frecuentemente y dejar hervir hasta disolver completamente. Esterilizar
en autoclave a 121ºC (15 lb de presión) durante 15 minutos. Enfriar entre 45ºC y
50ºC y agregar 20 mL de solución de telurito de potasio al 1% esterilizado por
filtración. Mezclar suavemente, colocar 20 mL de medio por cada placa y dejar
solidificar.

COLONIAS TIPICAS. Las colonias típicas del Staphylococcus aureus son

pequeñas, negras, rodeadas de una zona amarilla.

Staphylococcus aureus

El género Staphylococcus está formado por

cocos Gram positivos, con un diámetro de
0.5 a 1.5 μm, agrupados como células
únicas, en pares, tétradas, cadenas cortas o
formando racimos de uvas. Los estafilococos
fueron clasificados inicialmente en un género
común en la familia Micrococacea además
de los géneros Micrococcus, Stomacoccus y
Planococcus. Sin embargo, en estudios
recientes se observaron diferencias con
estos géneros, una de las principales es la cantidad de guanina-citosina (G+C de
30 a 39%), mientras que los Micrococcus tienen un contenido mayor de G+C de
63 a 73 El género Staphylococcus contiene 32 especies, de las cuales 16 de ellas
se localizan en los humanos, algunas forman parte de la microbiota de piel y
mucosas en humanos, y otras se encuentran sólo entre la flora de otros mamíferos
y aves

MEDIOS DE AISLAMIENTO. En los medios de cultivo tradicionales la mayoría de

las especies crecen después de incubarse durante 18-24 horas, formando
colonias de 0.5-1.5 mm de diámetro. Las colonias de S. aureus se observan lisas,
elevadas, brillantes y de bordes enteros, presentan consistencia cremosa y
pigmentación que va del amarillo a dorado debido a la producción de
carotenoides, la mayoría de las cepas producen β-hemólisis o hemólisis total
alrededor de las colonias cuando se cultivan en agar sangre.

IDENTIFICACION La identificación de S. aureus se realiza con el empleo de la

tinción de Gram, pruebas bioquímicas como: prueba de la catalasa, fermentación
de glucosa, que permite diferenciar al género Staphylococcus del género
Micrococcus, que también se considera una catalasa positiva pero no fermenta la
glucosa.

Variantes de colonias de S. aureus. La incubación prolongada es un factor

importante para detectar la presencia de colonias pequeñas, cuyo tamaño es 10
veces menor a las cepas originales de S. aureus que desarrollan en medios de
agar sangre. Son colonias que no producen pigmentación, no son hemolíticas,
además para su crecimiento requieren de mayor tiempo de incubación, como un
mínimo de 48 horas, que son difíciles de distinguir y por lo general se descartan
erróneamente como contaminantes

Pseudomona aeruginosa

Pseudomona aeruginosa pertenece a la

familia Pseudomonaceae. Se trata de un
bacilo recto o ligeramente curvado Gram
negativo, con un tamaño de 2–4 x 0,5-1
micras, y móvil gracias a la presencia de un
flagelo polar. En relación con su metabolismo,
es aerobio (aunque puede desarrollarse en
condiciones anaerobias utilizando nitrato),
catalasa positivo y oxidasa positivo. Se
caracteriza por producir una variedad de pigmentos, como la piocianina (de color
azul verdoso), la pioverdina (pigmento fluorescente de color verde amarillento) y la
piorrubina (de color rojo).

MECANISMO DE PROPAGACION Y TRANSMISION. La transmisión se produce

principalmente a través del contacto de la piel lesionada o reblandecida y de las
mucosas con el agua o con los objetos contaminados. En el ámbito sanitario,
constituyen una fuente de infección para los pacientes el instrumental quirúrgico,
los respiradores, los catéteres o las manos del personal sanitario contaminadas,
entre otros. Otros mecanismos de transmisión son la inhalación de bioaerosoles o
gotitas de agua o fluidos contaminados, así como la ingesta de agua contaminada,
si bien esta última no constituye una vía importante de transmisión.

Tinción de Gram

Tinción de Gram Esta tinción es un procedimiento de gran utilidad empleado en

los laboratorios donde se manejan pruebas microbiológicas. Es defi nida como una
tinción diferencial, ya que utiliza dos colorantes y clasifica a las bacterias en dos
grandes grupos: bacterias Gram negativas y bacterias Gram positivas.10 Fue
desarrollada por el científico danés Hans Christian Gram en 1884; hoy en día,
sigue siendo una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo
económico, sencillo y efi caz que resulta.11 En microbiología clínica resulta de
gran utilidad, ya que a partir de muestras clínicas directas provenientes de sitios
estériles se puede saber de manera rápida las características de la muestra y
hacer una diferencia de los potenciales microorganismos causantes de una
infección.12 Los principios de la tinción de Gram están basados en las
características de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades
determinantes a cada microorganismo. La pared celular de las bacterias Gram
negativas está constituida por una capa fi na de peptidoglicano y una membrana
celular externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared
celular gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana
celular externa; así pues, la composición química y el contenido de peptidoglicano
en la pared celular de las bacterias Gram negativas y Gram positivas explica y
determina las características tintoriales
ya que carecen de pared celular (micoplasma) o su pared celular tiene una
composición química diferente (micobacterias, que cuentan con una gran cantidad
de ácidos micólicos).18,19 Las muestras útiles para su uso son líquidos estériles,
biopsias para cultivo, abscesos, hisopados, crecimiento de colonias aisladas en
medios de cultivo. Las bacterias Gram positivas se observan de color azul obscuro
a morado, mientras que las Gram negativas se observan de color rosa a rojo
(Figura 2)

Análisis de Resultados

Hernández Dimas Jhoan Manuel

Sembrado de Pseudomona y
Staphylococcus aureus por
Hernández Dimas Jhoan
Manuel.

Se puede observar que no hubo

crecimiento alguno, esto debido
a una mala técnica de sembrado
ya que probablemente los
microorganismos murieron al no
ser enfriada adecuadamente el
asa en el Agar