CRONOGRAMA DE INGENIERÍA DE ENZIMA

FECHA 2018
ACTIVIDADES JULIO
AGOSTO
SEMANA 28 SEMANA 29 SEMANA 30 SEMANA 31 S 32
0 1 1 1 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 0 0 0 0 0
9 0 1 2 3 6 7 8 9 0 3 4 5 6 7 0 1 1 2 3 6 7
Recolecció
n de
informació
n
Presentaci
ón del Pre
informe
Acopio de
materiales
Esterilizaci
ón de
materiales
de vidrio
Preparació
n de
reactivos
Curvas de
calibrado
de glucosa
Monlabtest
Obtención
del caldo
crudo de
Kluyverom
yces
marxianus
NRRL Y-
7571
Preparació
n del DNS
y
obtención
de la curva
de
calibrado
Determina
ción de
curva de
calibrado
de
Proteínas
mediante
el método
de
Bradford
Determina
ción de
rango de
 linealidad
y actividad
de
inulinasa
Determina
ción de los
parámetro
s cinéticos
de la
enzima
soluble
Diseño,
montaje y
puesta en
marcha el
sistema
mini-
reactor.
Determina
ción de la
cinética de
producción
de
fructosa
por
hidrólisis
de inulina
Tiempo
para
imprevisto
s
Presentaci
ón del
informe
final y
sustentaci
ón

DNS
(materiales de reactivo)
Materiales de la curva de calibrado
3.3.1. Materiales e instrumentos:
Espectrofotómetro
Agitador magnético
Mechero bunsen
Balanza analítica
Espátula
Papel aluminio (capachos)
Vaso precipitado de 1L
Matraz de aforo de 1L
Pipeta
Gradilla
 3.3.2. Reactivos:
10 g /L de ácido 3,5 dinitrosalicilico (DNS)
200 mL / L de NaOH 2N
300 g/L de tartrato de sodio y potasio tetrahidratado
Sacarosa Estándar

Procedimiento de reactivo
Se disuelve el tartrato en aproximadamente 500 o 600 ml de agua. paralelamente se
disuelve el ácido DNS.
Ambas soluciones se mezclan en un matraz aforado de 1 litro
Se agita hasta la completa disolución de todos los componentes
Aforar hasta un litro.

curva de calibrado)
Se precisa realizar los siguientes pasos para el análisis de la muestra:
I.- Se añade un volumen del reactivo DNS a un volumen de muestra a analizar.
2. Se mantiene la mezcla en un baño de agua a ebullición durante 5 minutos para luego dejar
enfriar.
3. Se añaden 10 volúmenes de agua destilada.
4. Se lee la absorbancia a 540 nm utilizando agua como blanco.
5. La concentración se obtiene interceptando la medida de absorbancia en la curva de
calibrado.
La curva de calibrado para sacarosa se obtiene a partir de muestras de concentración
conocida y analizadas según este procedimiento, previo hidrólisis ácida de cada muestra.
 Pesar 0.1 g Coomasie G-250

Disolver 50 ml de etanol
Preparación del
reactivo
Añadir 100 ml de ácido fosfórico

Aforar 1 Lt. Agua destilada

Verter Albúmina (tubo de ensayo)

Añadir Tampón citrato

Obtención curva
de calibrado
Agregar 5 ml reactivo Bradford

Agitar Agitador vortex

Reposar 5min

Lecturar Abs a 595 mm.

Descongelar Muestras del medio

fermentación

Tomar 100 µl de muestra

Obtención de los
puntos de la Añadir
curva 5 ml reactivo Bradford
(experimento)

Agitar Agitador vortex

Reposar 5min

Lecturar Abs. a 595 mm.