Titulo I - Anexo 3

ENSAYO DE INTERLABORATORIO
DIRECCIÓN GENERAL DE INFORME DE RESULTADOS

LABORATORIOS Y CONTROL TÉCNICO Página 1 de 46
ENSAYOS SEROLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE
BRUCELOSIS EN SUEROS BOVINOS
RONDA 1/2011
INFORME FINAL
Ensayos serológicos para el diagnóstico de Brucelosis en sueros bovinos
Ensayos realizados:
BPA (Buffered plate antigen)

RB (Rosa de Bengala)
SAT (Seroaglutinación en tubos)
FC (Fijación de complemento)
c-ELISA (ELISA de competencia)
i-ELISA (Elisa Indirecto)
FPA (Polarización Fluorescente)
Coordinación del Interlaboratorio
Responsables M.V., Msc., Ana M. Nicola

Laboratorio de Referencia de la OIE para Brucelosis (Coordinación de
Bacteriología)
anicola@senasa.gov.ar
Lic. Eva Sacco

Area de Estadística (Coordinación General de Control de Gestión Operativa y
Normas de Laboratorio)
esacco@senasa.gov.ar
Dirección General de Laboratorios y Control Técnico (DILAB-SENASA)

Av. Fleming 1653
Código Postal 1640
Martínez, Buenos Aires, ARGENTINA
Teléfono +54 11 48361992/+54 11 48360065 Fax + 54 11 4836 1992
Fecha: 30 de septiembre de 2011

INDICE
4
1. INTRODUCCIÓN
5
2. LABORATORIOS PARTICIPANTES
6
3. MUESTRAS ENVIADAS
3.1 Preparación de las muestras 6

3.2 Codificación de las muestras enviadas 6
3.3 Distribución de las muestras 6
3.4 Homogeneidad y estabilidad 6
3.5 Repetibilidad 7
4. RESULTADOS DE LOS PARTICIPANTES 7
5. ESTADÍSTICOS DE DESEMPEÑO 8
5.1 Técnica BPA y Rosa de Bengala 8

5.2. Técnica SAT 8
5.3 Técnicas C-Elisa e I-Elisa: 8
5.4 Técnica FPA 9
5.5 Técnica FC 10
Anexo I: Codificación de las muestras para cada 11
Laboratorio
Anexo II 13
Estabilidad y Homogeneidad de las muestras
Anexo III 15
Análisis de Resultados Prueba BPA
Anexo IV 18
Análisis de Resultados Prueba RB
Anexo V 24
Análisis de Resultados Prueba SAT
Anexo VI 27
Análisis de Resultados cELISA
Anexo VII 33
Análisis Resultados iELISA
Anexo VIII 36
Análisis de Resultados FPA
Anexo IX 40
Análisis de Resultados de la Prueba de Fijación de
Complemento
Anexo X 43
Tabla de correlación entre las diferentes diluciones
empleadas en FC
6. DISCUSIÓN 44
7. REFERENCIAS 46
1. INTRODUCCIÓN
Los ensayos interlaboratorios son una herramienta fundamental para la estandarización

del diagnóstico y los reactivos utilizados.
La participación en interlaboratorios permite demostrar la competencia técnica de los

laboratorios y de este modo poder asegurar la calidad de los resultados.
Los ensayos de aptitud mediante las comparaciones entre laboratorios sirven para
determinar el desempeño de los participantes y también para realizar el seguimiento de
dicho desempeño.
Una vez obtenido el informe de resultados, les da la posibilidad a los participantes de

tomar acciones correctivas o preventivas según corresponda.
A partir de los resultados obtenidos, los participantes podrán evaluar, no sólo los
métodos de ensayo; sino también el desempeño del personal y los equipos utilizados.
Por otro lado, en caso de encontrar algún error, les permitirá identificar la causa del
mismo o también evaluar los desvíos, para luego tomar acciones correctivas o
preventivas según corresponda.
Se distribuyeron simultáneamente a los participantes de distintos laboratorios muestras

idénticas codificadas individualmente para preservar la confidencialidad de los
resultados.
En el presente informe se evaluó métodos cuali y cuantitativos utilizados rutinariamente

para el diagnóstico serológico de Brucelosis.
2. LABORATORIOS PARTICIPANTES
Laboratorio País
Laboratorio de Referencia Argentina
SENASA-OIE
Laboratorio de Investigación y Diagnostico Bolivia
Veterinario Cochabamba (LIDIVECO-SENASAG
Laboratorio de Investigación y Diagnostico Bolivia
Veterinario Santa Cruz de la Sierra (LIDIVET –
SENASAG)
Laboratório Nacional Agropecuário- LANAGRO – Brasil
Recife - Pernambuco
Laboratório Nacional Agropecuário – LANAGRO Brasil
Pedro Leopoldo – Minas Gerais
Laboratório Nacional Agropecuário – LANAGRO Brasil
– Belém - Para
Servicio Agrícola y Ganadero – Departamento de Chile
Laboratorios y Estaciones Cuarentenarias
Agrícola y Pecuaria.
Instituto Colombiano Agropecuario ICA Colombia
Laboratorio Regional Huerta Norte Costa Rica
Laboratorio Regional Brunca Costa Rica
Laboratorio Regional Chorotega (LRCH). Costa Rica

LANASEVE. SENASA
Laboratorio Regional Barreal - Heredia Costa Rica
LANASEVE. SENASA
Laboratorio de Diagnóstico y Control de Calidad, El Salvador
Ministerio de Agricultura y Ganadería (MAG).
San Salvador
Instituto Hondureño de Investigaciones Médicos Honduras
Veterinarias (I.H.I.M.V)
División Laboratorios Veterinarios DILAVE “ Uruguay
Miguel C. Rubino” Montevideo
DIVISION LABORATORIOS VETERINARIOS Uruguay
DILAVE “ Miguel C. Rubino” Paysandú
DILAVE “ Miguel C. Rubino” Treinta y Tres
DILAVE “ Miguel C. Rubino” Tacuarembo
3. MUESTRAS ENVIADAS
3.1 Preparación de las muestras.
Los sueros empleados para la preparación del panel son sueros normales de bovinos.
Los sueros negativos utilizados provenían de animales de un establecimiento
oficialmente libre de Brucelosis.
Los sueros positivos fueron preparados a partir de un animal serologicamente positivo
con aislamiento de Brucella abortus biovar 1. Con el suero fuertemente positivo se
prepararon diluciones con suero negativo en las siguientes diluciones 1/2, 1/5, 1/10,
1/15.
Los sueros fueron filtrados por membrana de 22 µm de porosidad, posteriormente
alicuotados en un volumen de 1 ml en envase de vidrio y liofilizados.
Código de suero SENASA
A NEGATIVO
F Positivo 1/2
B Positivo 1/5
C Positivo 1/10
D Positivo 1/15
3.2 Codificación de las muestras enviadas
Todos los laboratorios recibieron las mismas muestras codificadas individualmente

(Anexo I: Tabla 1 y 2)
3.3 Distribución de las muestras
Las muestras fueron enviadas por vía área entre los días 25/07/2011/ al 5/08/2011
acompañadas con una copia del formulario de recepción de las muestras y el formulario
para el registro de los resultados.
3.4 Homogeneidad y estabilidad
Se verifica la homogeneidad y estabilidad de las muestras para asegurar su calidad y

que se van a mantener estables a lo largo del ensayo de aptitud, almacenamiento y
transporte.
Las muestras utilizadas para esta ronda fueron preparadas y analizadas por diferentes
operadores, luego congeladas y liofilizadas. Posteriormente, las muestras fueron
reconstituidas y mantenidas a – 20°C, 4ºC, 37°C y a temperatura ambiente (22°C ± 4)
para considerar las peores condiciones de transporte y almacenamientos de las mismas.
No hubo evidencia de que bajo condiciones extremas de conservación se afecte

dramáticamente los resultados. (Anexo II, Tabla 3)
3.5 Repetibilidad
El valor de referencia asignado a cada muestra fue determinado por la repetición

(mínimo 5 veces) de las mismas.
4. RESULTADOS DE LOS PARTICIPANTES
4.1 Declaración de la confidencialidad.

Los resultados obtenidos por los participantes y la información sobre los mismos serán
mantenidos en confidencialidad. Los participantes son identificados con un código y éste
es sólo conocido por el participante y por los involucrados en la coordinación del ensayo
de aptitud.
4.2 Repetibilidad del Laboratorio Participante
Las diferentes muestras utilizadas en el panel fueron incluidas repetidas veces para
evaluar la repetibilidad del operador (Anexo I, Tabla 1 y 2). En esta ronda no se evaluó el
resultado de repetibilidad de manera directa, pero para el caso del ensayo FPA se
incluye el máximo valor de coeficiente de variación obtenido en el conjunto de muestra a
manera informativa. En el caso del ensayo SAT se incluye la máxima diferencia en
puntos de desvío obtenido en el conjunto de muestra a manera informativa.
5. ESTADÍSTICOS DE DESEMPEÑO
5.1 Técnica BPA y Rosa de Bengala
Las Técnicas de BPA y Rosa de Bengala son técnicas eminentemente cualitativas, por lo
cual se utilizó como criterio de clasificación de las muestras la coincidencia o no
coincidencia del resultado informado con el obtenido por SENASA. Un resultado fue
clasificado como satisfactorio siempre que la concordancia entre ambas sea igual o
superior al 95%, coincidiendo esto con un número de muestras correctamente
clasificadas de 24 o superior. (Anexo III, Tablas 4,5 y 6; Anexo IV, Tablas 7 a 12)
5.2. Técnica SAT
Para evaluar la técnica SAT se midió la diferencia en puntos respecto del resultado de
SENASA. Este valor sin embargo no puede analizarse como un estadístico Z ya que a
tratarse de una distribución discreta los valores usuales de corte representan las
características requeridas. Existen dos criterios para considerar que un ensayo mediante
la técnica SAT está correctamente realizado:
Se puede tomar como valor de corte 2 puntos de desvío (considerando la diferencia
entre las diluciones completas, por ejemplo de 1:25 a 1:50), o 1 punto de desvío
(considerando la diferencia de medio punto entre la reacción completa con la incompleta
de la dilución). Se presentarán los resultados con ambos criterios. Luego de clasificar
cada muestra, el criterio seguido para evaluar el ensayo es el mismo que en las técnicas
BPA y RB: a menos de 24 muestras correctamente clasificadas se asigna un resultado:
No satisfactorio, en caso contrario, se asigna un resultado Satisfactorio. (Anexo V,
Tablas 13 y 14)
5.3 Técnicas C-Elisa e I-Elisa:
Para las Técnicas c-Elisa (40%I) e i-Elisa (53%P) se tomaron como valor de corte de
referencia el utilizado en la República Argentina para la interpretación de resultados,
clasificando como negativas las muestras que se encuentran por debajo de esos valor, y
como positivas las muestras que se encuentran por encima de los mismos. Luego de
clasificar cada muestra, el criterio seguido para evaluar el ensayo es el mismo que en las
técnicas BPA, RB y SAT: a menos de 24 muestras correctamente clasificadas se asigna
un resultado No satisfactorio, en caso contrario, se asigna un resultado Satisfactorio.
(Anexo VI, Tablas 15 a 20, Anexo VII, Tablas 21 a 23)
.
5.4 Técnica FPA
La técnica FPA es una técnica Cuantitativa, por lo que la evaluación del método se
realizó en función de los estadísticos Z. Los mismos se calcularon mediante la siguiente
fórmula:
x−X
Z=
σp
Siendo:
X : Valor Asignado, se toma el resultado obtenido por SENASA en las 5 replicaciones
x : valor informado por el Laboratorio participante
σ p : Desvío target, se toma el 20% de resultado obtenido por SENASA en las 5 replicaciones
Para realizar la evaluación se construyó un estadístico (CHI χ 2 ) como la suma

cuadrática de los Valores Z.
25
χ 2 = ∑ Z i2
i =1
Dado que los valores Z siguen una distribución normal con media 0 y desvío 1, entonces
su distribución será Chi-Cuadrada con 25 grados de libertad. El valor que corresponde a
un nivel de confianza del 95% para esta distribución es el 37.65, y ese es el valor límite
que se tomó para clasificar como Satisfactorio o No Satisfactorio. (Anexo VIII, Tablas 24
y 25)
5.5 Técnica de Fijación del Complemento
Para evaluar esta técnica se clasificó las muestras como positivas o negativas en
función del valor de corte correspondiente a la dilución 1:20 (para animales
vacunados), no considerando para esta ronda las Unidades internacionales a la
Fijación de complemento (IUFC). Si el resultado informado es inferior, se toma a la
muestra como negativa, y si el resultado es superior, se la toma como positiva.
Luego de clasificar cada muestra, el criterio seguido para evaluar el ensayo es el
mismo que en las técnicas SAT, BPA y RB: a menos de 24 muestras correctamente
clasificadas se le asigna el resultado “No satisfactorio”, en caso contrario el resultado
es “Satisfactorio”. (Anexo IV, Tablas 26 a 28)
Debido a que los laboratorios participantes informaron en diferente escala de
diluciones, se utilizó una tabla de correspondencia entre ambas (Anexo X).
Anexo I: Codificación de las muestras para cada Laboratorio
NUMEROS DE IDENTIFICIACION DE LABORATORIOS

Nº S ENAS A 19 5 34 97 13 4 14 58 62 10 2 26 72 18 8 48 94 68 22 56
Sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros N° de sue ros
1 A 126 16 79 75 5 1018 1016 170 11 903 513 455 477 4 8 25
2 B 236 28 95 93 19 1215 996 231 1032 7 635 14 15 20 544 39
3 B 248 64 102 99 45 1333 942 35 555 21 1044 26 27 489 32 73
4 A 332 113 116 114 80 987 905 681 319 57 2010 534 922 40 494 97
5 D 361 151 146 144 107 86 808 118 51 70 109 48 49 55 59 119
6 F 410 192 212 210 139 872 716 13 1008 187 138 61 62 63 68 154
7 D 425 222 239 237 193 860 621 149 33 504 227 69 71 838 1169 163
8 F 463 234 288 287 209 818 508 173 106 601 1013 846 496 78 84 177
9 A 502 295 312 313 229 771 44 215 203 36 904 85 87 88 89 184
10 D 561 308 344 341 242 756 424 238 1065 83 422 90 94 536 748 198
11 F 599 327 386 376 259 74 365 316 807 127 413 98 1102 101 103 207
12 D 614 400 415 382 303 692 324 351 67 240 1002 656 105 108 110 219
13 C 627 412 426 404 314 670 309 407 52 416 943 111 1187 1148 120 228
14 C 672 444 506 419 390 629 265 417 713 1076 959 122 123 124 130 310
15 C 705 503 512 500 406 594 23 439 617 1045 29 1080 736 135 136 1146
16 A 721 515 546 521 418 58 214 516 631 937 37 137 140 141 898 1118
17 B 746 532 626 560 435 522 172 54 408 948 131 588 145 147 148 1088
18 D 800 591 651 602 465 482 160 604 526 639 112 152 1156 644 1098 1006
19 F 826 600 688 620 529 47 128 615 241 618 414 156 157 161 164 988
20 C 868 612 708 668 533 442 82 633 421 707 2013 1136 168 1172 171 964
21 B 902 637 727 700 566 392 46 722 519 9 1030 174 179 175 178 946
22 D 914 699 763 710 792 350 41 759 18 12 1028 180 579 190 194 915
23 B 939 711 811 777 786 216 30 81 24 333 65 798 199 916 202 892
24 C 1010 787 842 810 815 158 22 890 3 296 56 206 208 211 558 852
25 C 1121 802 889 827 830 125 6 1050 1117 10 53 223 1096 230 235 832
Tabla 1
Anexo I: Codificación de las muestras para cada Laboratorio continuación
N° de La b.
Nº SEN A SA 12 0
S ue ros N° de sue ros
1 A 31
2 B 43
3 B 76
4 A 104
5 C 133
6 F 155
7 C 166
8 F 181
9 A 195
10 C 200
11 F 213
12 A 220
13 C 302
14 C 1154
15 C 1111
16 A 1082
17 B 1004
18 B 986
19 F 966
20 C 956
21 B 918
22 D 894
23 B 854
24 C 834
25 C 824
Tabla 2
Anexo II
BPA
4ºC 20ºC 37ºC 4ºC 20ºC 37ºC 4ºC 20ºC 37ºC 4ºC 20ºC 37ºC 4ºC 20ºC 37ºC
A A A B B B C C C D D D F F F
Día 0 Neg. Pos. Pos. Pos. Pos.
Día 7 Neg. Neg. Neg. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos.
Día 36 Neg. Neg. Neg. Pos. Pos. Pos. Pos. Neg. Pos. Pos. Neg. Pos. Pos. Pos. Pos.
RB
4ºC 20ºC 37ºC 4ºC 20ºC 37ºC 4ºC 20ºC 37ºC 4ºC 20ºC 37ºC 4ºC 20ºC 37ºC
A A A B B B C C C D D D F F F
Día 0 Neg. Pos. Pos. Pos. Pos.
Día 21 Neg. Neg. Neg. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Neg. Neg. Pos. Pos. Pos.
Día 36 Neg. Neg. Neg. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Pos. Neg. Neg. Pos. Pos. Pos.
Tabla 3
1 Dí a 0
2 Dí a 7
3 Dí a 13
4 Dí a 2 1
5 Dí a 3 6
Anexo III Análisis de Resultados Prueba BPA

Cuadro de informe resumido
Porcentaje de Falsos Falsos Verdaderos Verdaderos

Nº Laboratorio Coincidentes Errados Totales
Coincidencia Negativos Positivos positivos negativos Resultado
94 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
48 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
34 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
56 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
120 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
Tabla 4

Re sulta do Re sulta do Re sulta do Re sulta do Re sulta do Re sulta do
S ENAS A Mue stra Coinc ide nc ia S ENAS A Mue stra Coinc ide nc ia S ENAS A Mue stra Coinc ide nc ia
S e na sa La b 9 4 S e na sa La b 4 8 S e na sa La b 3 4
1 A 477 - - c oinc ide 1 A 455 - - Coinc idenc ia 1 A 16 - - Coincidenc ia
2 B 15 + + c oinc ide 2 B 14 + + Coinc idenc ia 2 B 28 + + Coincidenc ia
5 D 49 + + c oinc ide 5 D 48 + + Coinc idenc ia 5 D 151 + + Coincidenc ia
6 F 62 + + c oinc ide 6 F 61 + + Coinc idenc ia 6 F 192 + + Coincidenc ia
13 C 1187 + + c oinc ide 13 C 111 + + Coinc idenc ia 13 C 412 + + Coincidenc ia
Re sulta do S a tisfa c torio Re sulta do S a tisfa c torio Re sulta do S a tisfa c torio
Porc entaje de Porcentaje de Porc entaje de

100 100 100
Coinc idenc ias Coinc idenc ias Coincidenc ias
Número de Número de Número de

25 25 25
Número de No Número de No Número de No

0 0 0
Tabla 5

Re sulta do Re sulta do Re sulta do Re sulta do
S ENAS A Mue stra Coinc ide nc ia S ENAS A Mue stra Coinc ide nc ia
S e na sa La b 5 6 S e na sa La b 12 0
1 A 25 - - coincide 1 A 31 - - coincide
2 B 39 + + coincide 2 B 43 + + coincide
5 D 119 + + coincide 5 C 133 + + coincide
6 F 154 + + coincide 6 F 155 + + coincide
12 D 219 + + coincide 12 A 220 - - coincide
13 C 228 + + coincide 13 C 302 + + coincide
18 D 1006 + + coincide 18 B 986 + + coincide
22 D 915 + + coincide 22 D 894 + + coincide
Re sulta do S a tisfa c torio Re sulta do S a tisfa c torio
Porcentaje de Porcentaje de
100 100
Coincidencias Coincidencias
Número de Número de
25 25
Número de No Número de No
0 0
Tabla 6
Anexo IV Análisis de Resultados Prueba de Rosa de Bengala
Cuadro de informe resumido
Nº Porcentaje de Falsos Falsos Verdaderos Verdaderos

Correctos Errados Totales
Laboratorio Coincidencia Negativos Positivos positivos negativos Resultado
14 17 8 25 68% 8 0 13 4 No Satisfactorio
22 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
26 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
34 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
68 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
72 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
94 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
97 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
188 24 1 25 96% 1 0 20 4 Satisfactorio
195 25 0 25 100% 0 0 21 4 Satisfactorio
Tabla 7
Análisis de Resultados Prueba Rosa de Bengala

Resultado Resultado Resultado Resultado Resultado Resultado
SENASA Muestra SENASA Lab 14 Coincidencia SENASA Muestra SENASA Lab 22 Coincidencia SENASA Muestra Senasa Lab 26 Coincidencia
1 A 5 - - coincide 1 A 8 - - coincide 1 A 11 - - coincide

2 B 19 + + coincide 2 B 544 + + coincide 2 B 1032 + + coincide
5 D 107 + - no coincide 5 D 59 + + coincide 5 D 51 + + coincide
6 F 139 + + coincide 6 F 68 + + coincide 6 F 1008 + + coincide
7 D 193 + + coincide 7 D 1169 + + coincide 7 D 33 + + coincide

13 C 314 + + coincide 13 C 120 + + coincide 13 C 52 + + coincide
14 C 390 + - no coincide 14 C 130 + + coincide 14 C 713 + + coincide
23 B 786 + - no coincide 23 B 202 + + coincide 23 B 24 + + coincide
Resultado No satisfactorio Resultado Satisfactorio Resultado Satisfactorio
Porcentaje de Porcentaje de Porcentaje de
68 100 100
Coincidencias Coincidencias Coincidencias
17 25 25
8 0 0
Tabla 8

SENASA Muestra SENASA Lab 34 Coincidencia SENASA Muestra Senasa Lab 48 Coincidencia SENASA Muestra Senasa Lab 58 Coincidencia

5 D 151 + + coincide 5 D 48 + + coincide 5 D 86 + - no coincide
7 D 222 + + coincide 7 D 69 + - no coincide 7 D 860 + - no coincide
10 D 308 + + coincide 10 D 90 + - no coincide 10 D 756 + - no coincide
13 C 412 + + coincide 13 C 111 + + coincide 13 C 670 + - no coincide
Resultado Satisfactorio No satisfactorio Resultado No satisfactorio

Resultado
100 92 52
25 23 13
0 2 12
Tabla 9

SENASA Muestra Senasa Lab 62 Coincidencia SENASA Muestra Senasa Lab 68 Coincidencia SENASA Muestra Senasa Lab 72 Coincidencia
72 100 100
18 25 25
7 0 0
Tabla 10

Resultado Satisfactorio Resultado Satisfactorio Resultado No satisfactorio
52
Coincidencias 100 Coincidencias 100 Coincidencias
13
Coincidencias 25 Coincidencias 25 Coincidencias
Coincidencias 0 Coincidencias 0 12
Coincidencias
Tabla 11


7 D 237 + - no coincide 7 D 227 + - no coincide 7 D 425 + + coincide

80 96 100
20 24 25
5 1 0
Tabla 12
Anexo V Análisis de Resultados Prueba SAT
No Porcentaje de Porcentaje de Máximos

Nº Coincidentes Coincidentes Coincidencia Resultado Coincidentes No Coincidentes Coincidencia Resultado puntos de
Laboratorio (2 puntos) (2 puntos) Totales (2 puntos) (2 puntos) (1 punto) (1 punto) Totales (1 punto) (1 punto) desvío Muestras
No
26 24 1 25 96 Satisfactorio 18 7 25 72 Satisfactorio 3 ByC
No No
72 22 3 25 88 Satisfactorio 22 3 25 88 Satisfactorio 3 C
No
188 25 0 25 100 Satisfactorio 23 2 25 80 Satisfactorio 2 C
Tabla 13
Anexo V Análisis de Resultados Prueba SAT

N ° d e Lab 26 26 26 26 26 72 72 72 72 72 188 188 188 188 188
R esult ad o C la s if ic a c ió n C la s if ic a c ió n C la s if ic a c ió n C la s if ic a c ió n C la s if ic a c ió n C la s if ic a c ió n
C ó d ig o N ° de R e s ult a do s R e s ult a do s R e s ult a do s
Nº SEN A SA
asig nad o
s ue ro s inf o rm a do s
D esví o s co n co n N ° de s ue ro s
inf o rm a do s
D esví o s co n co n N ° de s ue ro s
inf o rm a do s
D eví o s co n co n
SEN A SA 2 de s v í o s 1 de s v í o 2 de s v í o s 1 de s v í o 2 de s v í o s 1 de s v í o
1 A 0 11 0 0 co incidencia co incidencia 903 0 0 co incidencia co incidencia 513 0 0 co incidencia co incidencia
2 B 100 1032 I 200 1 co incidencia co incidencia 7 I 200 1 co incidencia co incidencia 635 100 0 co incidencia co incidencia
3 B 100 555 100 0 co incidencia co incidencia 21 I 200 1 co incidencia co incidencia 1044 100 0 co incidencia co incidencia
5 D 25 51 50 2 co incidencia no co incidencia 70 I 200 5 no co incidencia no co incidencia 109 I 50 1 co incidencia co incidencia
6 F 200 1008 200 0 co incidencia co incidencia 187 200 0 co incidencia co incidencia 138 200 0 co incidencia co incidencia
7 D 25 33 25 0 co incidencia co incidencia 504 I 50 1 co incidencia co incidencia 227 I 50 1 co incidencia co incidencia
8 F 200 106 I 200 -1 co incidencia co incidencia 601 200 0 co incidencia co incidencia 1013 200 0 co incidencia co incidencia
10 D 25 1065 50 2 co incidencia no co incidencia 83 I 50 1 co incidencia co incidencia 422 50 1 co incidencia co incidencia
12 D 25 67 I 50 1 co incidencia co incidencia 240 I 50 1 co incidencia co incidencia 1002 50 1 co incidencia co incidencia
13 C 50 52 50 0 co incidencia co incidencia 416 I 100 1 co incidencia co incidencia 943 50 0 co incidencia co incidencia
14 C 50 713 100 2 co incidencia no co incidencia 1076 I 100 1 co incidencia co incidencia 959 50 0 co incidencia co incidencia
15 C 50 617 I 100 1 co incidencia co incidencia 1045 I 100 1 co incidencia co incidencia 29 50 0 co incidencia co incidencia
17 B 100 408 I 200 1 co incidencia co incidencia 948 I 200 1 co incidencia co incidencia 131 100 0 co incidencia co incidencia
18 D 25 526 50 2 co incidencia no co incidencia 639 I 50 1 co incidencia co incidencia 112 50 2 co incidencia no co incidencia
20 C 50 421 I 100 1 co incidencia co incidencia 707 I 100 1 co incidencia co incidencia 2013 50 0 co incidencia co incidencia
21 B 100 519 100 0 co incidencia co incidencia 9 I 200 1 co incidencia co incidencia 1030 100 0 co incidencia co incidencia
22 D 25 18 50 2 co incidencia no co incidencia 12 I 100 3 no co incdencia no co incidencia 1028 50 2 co incidencia no co incidencia
23 B 100 24 50 -2 co incidencia no co incidencia 333 I 200 1 co incidencia co incidencia 65 100 0 co incidencia co incidencia
24 C 50 3 50 0 co incidencia co incidencia 296 I 100 1 co incidencia co incidencia 56 50 0 co incidencia co incidencia
25 C 50 1117 I 200 3 no co incidencia no co incidencia 10 I 200 3 no co incdencia no co incidencia 53 50 0 co incidencia co incidencia
Tabla 14
Análisis de Resultados Prueba SAT
Puntos de Desvío respecto del resultado de SENASA

SAT
2 .5
1.5
1
Puntos de desvíos
0 .5
0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
- 0 .5
-1
- 1.5
-2
- 2 .5
Lab 26 Lab 72 Lab 188
Puntos de desvios Resultado
≤2 Satisfactorio
>2 No satisfactorio
Anexo VI Análisis de Resultados cELISA
Porcentaje de Falsos Verdaderos Verdaderos Resultado

Numero de Laboratorio Correctos Errados Totales Falsos Positivos
Coincidencia Negativos positivos negativos
Satisfactorio
14 25 0 25 100 0 0 21 4
Satisfactorio
22 24 1 25 96 1 0 20 4
Satisfactorio
48 24 1 25 96 1 0 20 4
Satisfactorio
56 25 0 25 100 0 0 21 4
Satisfactorio
68 25 0 25 100 0 0 21 4
Satisfactorio
94 25 0 25 100 0 0 21 4
Satisfactorio
97 25 0 25 100 0 0 21 4
Satisfactorio
134 25 0 25 100 0 0 21 4
Satisfactorio
195 25 0 25 100 0 0 21 4
Tabla 15
Laboratorio Nº 14 Laboratorio Nº 22
Promedio Prom edio
Interpretacion Interpretacion Interpretacion Interpretacion
SENASA SENASA
Nº Positivo >40 %I Nº sueros %I Positivo >40 %I Nº Positivo >40 %I Nº sueros %I Positivo >40 %I
1 A 29 - 5 6 - coincidencia 1 A 29 - 8 11 - coincidencia
2 B 79 + 19 76 + coincidencia 2 B 79 + 544 67 + coincidencia
5 D 66 + 107 41 + coincidencia 5 D 66 + 59 45 + coincidencia
6 F 95 + 139 93 + coincidencia 6 F 95 + 68 87 + coincidencia
7 D 66 + 193 44 + coincidencia 7 D 66 + 1169 38 - no coincidencia
13 C 52 + 314 52 + coincidencia 13 C 52 + 120 51 + coincidencia
Tabla 16
Prom edio Prom edio
SENASA SENASA
7 D 66 + 69 33 - no coincidencia 7 D 66 + 163 57 + coincidencia
Tabla 17
Prom edio Prom edio
SENASA SENASA
Tabla 18
Análisis de Resultados cElisa

Prom edio Prom edio
SENASA SENASA
9 A 29 - 313 -7 - coincidencia 9 A 29 - 502 12 - coincidencia
16 A 29 - 521 -0,3 - coincidencia 16 A 29 - 721 12 - coincidencia
Tabla 19

Laboratorio Nº 97
Prom edio
SENASA Interpretacion %I Interpretacion
Nº Positivo >40 %I Nº sueros No inform ado

1 A 29 - 79 - coincidencia
2 B 79 + 95 + coincidencia
5 D 66 + 146 + coincidencia
6 F 95 + 212 + coincidencia
13 C 52 + 426 + coincidencia
Tabla 20
Anexo VII Análisis de Resultados iELISA
Porcentaje de Falsos Verdaderos Verdaderos

Correctos Errados Totales Falsos Positivos Resultado
Coincidencia Negativos positivos negativos
Numero de Laboratorio
14 24 1 25 96 1 0 21 3 Satisfactorio
34 25 0 25 100 0 0 21 4 Satisfactorio
97 24 1 25 96 1 0 21 3 Satisfactorio
134 25 0 25 100 0 0 21 4 Satisfactorio
Tabla 21
Análisis de Resultados iELISA
Prom edio Prom edio Interpretacio
Interpretacion Interpretacion Interpretacion
SENASA SENASA n
Positivo Positivo Positivo Positivo
Nº > 53 %P Nº sueros %P > 53 %P Nº > 53 %P Nº sueros %P > 53 %P
9 A 22 - 229 80 + no coincidencia 9 A 22 - 295 26 - coincidencia
Tabla 22
Análisis de Resultados iELISA

Prom edio Prom edio Interpretacio
SENASA Interpretacion Interpretacion SENASA %P Interpretacion
n
Positivo Positivo Positivo
Nº > 53 %P Nº sueros %P > 53 %P Nº > 53 %P Nº sueros No inform ado
1 A 22 - 75 22 - coincidencia 1 A 22 - 79 - coincidencia
2 B 101 + 93 114 + coincidencia 2 B 101 + 95 + coincidencia
5 D 66 + 144 109 + coincidencia 5 D 66 + 146 + coincidencia
6 F 93 + 210 118 + coincidencia 6 F 93 + 212 + coincidencia
10 D 66 + 341 107 + coincidencia 10 D 66 + 344 - no coincidencia
13 C 86 + 404 108 + coincidencia 13 C 86 + 426 + coincidencia
Tabla 23
Anexo VIII Análisis Resultados FPA

Tabla 24
Laboratorio N° 72 Laboratorio N° 14
Interpretación
Resultado Negativo <94 mP N° de
Resultado Interpretación N° de Resultado Interpretación Resultados
SENASA Sospechoso 94<105 mP muestra Z Z^2 Resultados Z Z Z^2
Positivo >105 mP Lab mP Resultado Muestra Lab mP Resultado Z
mP mP
1 A 78 negativo 903 80 0.13 0.02 negativo satisfactorio 5 56 -1.41 1.99 negativo satisfactorio
2 B 172 + 7 174 0.06 0.00 + satisfactorio 19 144 -0.81 0.66 + satisfactorio
3 B 172 + 21 190 0.52 0.27 + satisfactorio 45 171 -0.03 0.00 + satisfactorio
5 D 100 sospechoso 70 117 0.85 0.72 + satisfactorio 107 90 -0.50 0.25 sospechoso satisfactorio
6 F 205 + 187 217 0.29 0.09 + satisfactorio 139 206 0.02 0.00 + satisfactorio
7 D 100 sospechoso 504 111 0.55 0.30 + satisfactorio 193 92 -0.40 0.16 sospechoso satisfactorio
8 F 205 + 601 220 0.37 0.13 + satisfactorio 209 196 -0.22 0.05 + satisfactorio
9 A 78 negativo 36 83 0.32 0.10 negativo satisfactorio 229 98 1.28 1.64 sospechoso satisfactorio
10 D 100 sospechoso 83 115 0.75 0.56 + satisfactorio 242 81 -0.95 0.90 negativo satisfactorio
12 D 100 sospechoso 240 117 0.85 0.72 + satisfactorio 303 106 0.30 0.09 + satisfactorio
13 C 118 + 416 151 1.40 1.96 + satisfactorio 314 131 0.55 0.30 + satisfactorio
17 B 172 + 948 171 -0.03 0.00 + satisfactorio 435 183 0.32 0.10 + satisfactorio
20 C 118 + 707 129 0.47 0.22 + satisfactorio 533 85 -1.40 1.96 negativo satisfactorio
21 B 172 + 9 168 -0.12 0.01 + satisfactorio 566 182 0.29 0.08 + satisfactorio
23 B 172 + 333 176 0.12 0.01 + satisfactorio 786 203 0.90 0.81 + satisfactorio
Chi 7.95 Chi 17.93
valor valor
crítico 37.65 crítico 37.65
Resultado satisfactorio Resultado satisfactorio
Estadístico
χ2 ≤37.65 Satisfactorio
χ2 > 37.65 No Satisfactorio
Valores Z según m uestras por laboratorios

FPA
2 .50
2 .0 0
1.50
1.0 0
0 .50
z-score
0 .0 0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
- 0 .50
- 1.0 0
- 1.50
- 2 .0 0
- 2 .50
Lab 72 Lab 14
|z|≤ 2 Satisfactorio
2<|z|<3 Discutible
|z| ≥ 3 No Satisfactorio

Valores Z para Muestras A Valores Z para Muestras C
FPA FPA
2.50
2.00
3.00
1.50
1.00 2.00
z-score
0.50
z-score
1.00
0.00
-0.50 1 4 9 16 0.00
13 14 15 20 24 25
- 1.00 - 1.00
- 1.50
-2.00
-2.00
-2.50 -3.00
Lab 72 Lab 14 Lab 72 Lab 14
Valores Z para Muestras B Valores Z para Muestras D

FPA FPA
2.50
2.00 3.00
1.50 2.00
1.00
z-score
1.00
z-score
0.50
0.00
0.00
-0.50 2 3 17 21 23
5 7 10 12 18
- 1.00 -1.00
- 1.50
- 2.00
-2.00
-2.50 - 3.00
Lab 72 Lab 14 Lab 72 Lab 14

Valores Z para Muestras F

FPA
2.50
2.00
1.50
1.00
0.50
0.00
-0.50 6 8 11 19
-1.00
-1.50
-2.00
-2.50
Lab 72 Lab 14
Número de Tipos de
laboratorio Chi Desición Número de |Z|<2 Porcentaje Número de |Z|>2 Porcentaje Máximo CV muestras
72 7.95 satisfactorio 25 100 0 0 25.43 B
14 17.93 satisfactorio 25 100 0 0 58.24 C

Tabla 25
Anexo IX Análisis de Resultados de la Prueba de Fijación de Complemento
Porcentaje de Falsos Falsos Verdaderos Verdaderos

Número de Laboratorio Coincidentes Errados Totales Resultado
Coincidencia Negativos Positivos positivos negativos
26 24 1 25 96 1 0 14 10 Satisfactorio
72 18 7 25 72 6 1 9 9 No Satisfactorio
188 19 6 25 76 0 6 15 4 No Satisfactorio
195 24 1 25 96 0 1 15 9 Satisfactorio
Tabla 26
Análisis de Resultados de la Prueba de Fijación de Complemento
Resultado Resultado
SENASA SENASA
Dilución Dilución
Nº Dilución Positivo ≥20 Nº sueros Positivo ≥20 Nº Dilución Positivo ≥20 Nº sueros Positivo ≥20
inform ada inform ada
1 A 5 - 11 0 - coincide 1 A 5 - 903 0 - coincide
2 B 40 + 1032 20 + coincide 2 B 40 + 7 20 + coincide
5 D 10 - 51 10 - coincide 5 D 10 - 70 10 - coincide
6 F 160 + 1008 40 + coincide 6 F 160 + 187 80 + coincide
13 C 20 + 52 10 - no coincide 13 C 20 + 416 10 - no coincide
14 C 20 + 713 20 + coincide 14 C 20 + 1076 10 - no coincide
16 A 5 - 631 0 - coincide 16 A 5 - 937 20 + no coincide
Resultado Satisfactorio Resultado No satisfactorio
96 72
Número de Número de No
24 18
1 7
Tabla 27
Análisis de Resultados de la Prueba de Fijación de Complemento

Resultado Resultado
SENASA SENASA
Dilución Dilución
Nº Dilución Positivo ≥20 Nº sueros Positivo ≥20 Nº Dilución Positivo ≥20 Nº sueros Positivo ≥20
inform ada inform ada
5 D 10 - 109 160 + no coincide 5 D 10 - 361 10 - coincide
10 D 10 - 422 40 + no coincide 10 D 10 - 561 20 + no coincide
13 C 20 + 943 40 + coincide 13 C 20 + 627 20 + coincide
Resultado No satisfactorio Resultado Satisfactorio
76 96
Número de Número de
19 24
6 1
Tabla 28
Anexo X Tabla de correlación entre las diferentes diluciones empleadas en FC

Dilución Grado de Fijación UIFC Dilución Grado de Fijación UIFC
+ 13 + 13
1:4 ++ 16 1:5 ++ 16
+++ 17 +++ 18
++++ 20 ++++ 21
+ 27 + 27
1:8 ++ 31 1:10 ++ 31
+++ 36 +++ 36
++++ 41 ++++ 41
+ 53 + 53
1:16 ++ 63 1:20 ++ 63
+++ 72 +++ 72
++++ 83 ++++ 83
+ 106 + 106
1:32 ++ 125 1:40 ++ 125
+++ 144 +++ 144
++++ 165 ++++ 165
+ 213 + 213
1:64 ++ 250 1:80 ++ 250
+++ 288 +++ 288
++++ 331 ++++ 331
+ 425 + 425
1:128 ++ 500 1:160 ++ 500
+++ 662 +++ 662
++++ 760 ++++ 760
+ 850 + 850
1:256 ++ 1000 1:320 ++ 1000
+++ 1150 +++ 1150
++++ 1323 ++++ 1323
6. DISCUSIÓN
Pruebas cualitativas
Del total de los laboratorios participantes cinco Laboratorios (5/17) realizaron la

prueba de BPA, todos con resultados satisfactorios.
Del total de los laboratorios participantes quince Laboratorios (15/17) realizaron la

prueba de RB, de los cuales seis presentaron resultados no satisfactorios, para lo
cual se recomienda evaluar la sensibilidad del antígeno empleado y el
entrenamiento del operador.
Pruebas cuantitativas
Del total de los laboratorios participantes tres Laboratorios (3/17) realizaron la

prueba de SAT, evaluando la concordancia de ½ punto (reacciones incompletas),
identificadas como desvíos de un punto en el análisis de los presentes datos y de
un punto (reacciones completas) identificadas como desvíos de dos puntos en el
análisis de los datos entre las diferentes diluciones empleadas. Con el criterio de
desvío de un punto (más exigente) los resultados fueron No satisfactorios. Para el
criterio de desvío de dos puntos, 2 laboratorios informan resultados Satisfactorios
y un Laboratorio como No Satisfactorio.
En la prueba de cELISA participaron siete laboratorios, uno de ellos no informó los

resultados en % de Inhibición sino en forma cualitativa.
Solo 2 laboratorios informaron una muestra cada uno en forma errónea. De
acuerdo al análisis estadístico empleado todos los Laboratorios informaron en
forma satisfactoria los resultados.
En la prueba de iELISA participaron 4 Laboratorios (4/17), uno de ellos no informó

los resultados en % de Positividad sino en forma cualitativa. Todos los resultados
fueron Satisfactorios.
Del Total de los Laboratorios, tres Laboratorios realizaron la prueba de FPA, uno
de ellos no informo los resultados en mP por lo tanto no fue considerado en el
análisis estadístico. Los resultados de los dos laboratorios evaluados fueron
satisfactorios.
En la prueba de FC participaron 5 Laboratorios, uno de ellos informó los

resultados en forma cualitativa, por lo tanto no fue considerado en el análisis
estadístico de los resultados. Las no coincidencias observadas en la prueba de FC
se encuentran en las diluciones de corte 1:10 y 1:20 donde se clasifican entre
negativos y positivos. Las otras no coincidencias se ven en una gran diferencia
entre los títulos de referencia asignados y los valores informados generalmente
más altos. Se debería revisar la titulación de los reactivos empleados y la
utilización de un suero patrón de referencia para la estandarización del ensayo.
7. REFERENCIAS
7.1 ISO/IEC 17043 Conformity assessment – General requirements for proficiency

testing. (First edition 2010-02-01).
7.2 IRAM 301 - ISO/IEC 17025 Requisitos generales para la competencia de los
laboratorios de ensayo y de calibración.
7.3 ISO 13528 Statistical methods for use in proficiency testing by interlaboratory
comparisons. (First edition 2005-09-01).
7.4 ISO 5725-1 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results.
Part 1: General principles and definitions. (First edition 1994-12-15).
7.5 ISO 5725-5 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results.
Part 5: Alternative methods for the determination of the precision of a standard
measurement method. (First edition 1998-07-15).
7.6 OIE Quality Standard and Guidelines for Veterinary Laboratories. 2008
7.8 IUPAC, THE INTERNATIONAL HARMONIZED PROTOCOL FOR THE

PROFICIENCY TESTING OF ANALYTICAL CHEMISTRY LABORATORIES, Iupac
Technical Report, Pure Appl Chem., Vol 78, No 1, pp 145-196, 2006.

Titulo I - Anexo 3

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ENSAYO DE INTERLABORATORIO

DIRECCIÓN GENERAL DE INFORME DE RESULTADOS

ENSAYOS SEROLÓGICOS PARA EL DIAGNÓSTICO DE

BRUCELOSIS EN SUEROS BOVINOS

Ensayos serológicos para el diagnóstico de Brucelosis en sueros bovinos

BPA (Buffered plate antigen)

Coordinación del Interlaboratorio

Responsables M.V., Msc., Ana M. Nicola

Lic. Eva Sacco

Dirección General de Laboratorios y Control Técnico (DILAB-SENASA)

Fecha: 30 de septiembre de 2011

3.1 Preparación de las muestras 6

4. RESULTADOS DE LOS PARTICIPANTES 7

5.1 Técnica BPA y Rosa de Bengala 8

Los ensayos interlaboratorios son una herramienta fundamental para la estandarización

La participación en interlaboratorios permite demostrar la competencia técnica de los

Una vez obtenido el informe de resultados, les da la posibilidad a los participantes de

Se distribuyeron simultáneamente a los participantes de distintos laboratorios muestras

En el presente informe se evaluó métodos cuali y cuantitativos utilizados rutinariamente

Laboratorio Regional Huerta Norte Costa Rica

Laboratorio Regional Brunca Costa Rica

Laboratorio Regional Chorotega (LRCH). Costa Rica

3.1 Preparación de las muestras.

Código de suero SENASA

3.2 Codificación de las muestras enviadas

Todos los laboratorios recibieron las mismas muestras codificadas individualmente

3.3 Distribución de las muestras

3.4 Homogeneidad y estabilidad

Se verifica la homogeneidad y estabilidad de las muestras para asegurar su calidad y

No hubo evidencia de que bajo condiciones extremas de conservación se afecte

El valor de referencia asignado a cada muestra fue determinado por la repetición

4. RESULTADOS DE LOS PARTICIPANTES

4.1 Declaración de la confidencialidad.

4.2 Repetibilidad del Laboratorio Participante

5.1 Técnica BPA y Rosa de Bengala

5.2. Técnica SAT

5.3 Técnicas C-Elisa e I-Elisa:

Para realizar la evaluación se construyó un estadístico (CHI χ 2 ) como la suma

5.5 Técnica de Fijación del Complemento

Anexo I: Codificación de las muestras para cada Laboratorio

NUMEROS DE IDENTIFICIACION DE LABORATORIOS

Anexo I: Codificación de las muestras para cada Laboratorio continuación

Estabilidad y Homogeneidad de las muestras

Anexo III Análisis de Resultados Prueba BPA

Porcentaje de Falsos Falsos Verdaderos Verdaderos

Análisis de Resultados Prueba BPA

Porc entaje de Porcentaje de Porc entaje de

Número de Número de Número de

Número de No Número de No Número de No

Análisis de Resultados Prueba BPA

Re sulta do S a tisfa c torio Re sulta do S a tisfa c torio

Anexo IV Análisis de Resultados Prueba de Rosa de Bengala

Cuadro de informe resumido

Nº Porcentaje de Falsos Falsos Verdaderos Verdaderos

Análisis de Resultados Prueba Rosa de Bengala

1 A 5 - - coincide 1 A 8 - - coincide 1 A 11 - - coincide

7 D 193 + + coincide 7 D 1169 + + coincide 7 D 33 + + coincide

Análisis de Resultados Prueba Rosa de Bengala

1 A 16 - - coincide 1 A 455 - - coincide 1 A 1018 - - coincide

Resultado Satisfactorio No satisfactorio Resultado No satisfactorio

Análisis de Resultados Prueba Rosa de Bengala

Análisis de Resultados Prueba Rosa de Bengala

Análisis de Resultados Prueba Rosa de Bengala

1 A 75 - - coincide 1 A 513 - - coincide 1 A 126 - - coincide