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ESCUELA DE MEDICINA
ASIGNATURA: BIOQUÍMICA II
Integrantes:
Mary Belén Bohórquez Calva.
Nathalie Doménica Borbor León.
Cristina Beatriz Cedillo Zambrano.
Kathia Izamar Gaibor Armijo.
Melany Carolina Mena León.
Fanny Maylin Soria Monroy.
Sebastián Patricio Torres Vásquez.
Jennifer Paola Uzhca Landi.
Mariuxi Alexandra Valverde Meregildo.
Walter Enrique Zambrano Benítez.
GRUPO: 6
UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL BIOQUÍMICA II
RESUMEN
La determinación del perfil lipídico resulta de vital importancia debido al impacto o repercusión que
tienen las grasas sobre nuestra salud. Este examen se realiza a través del análisis de sangre, donde
se medirán las concentraciones de diferentes lipoproteínas como: Lipoproteína de alta densidad o HDL,
lipoproteína de baja densidad o LDL, triglicéridos (TG) y colesterol total.
Valores anormalmente altos en las concentraciones de dichas lipoproteínas, son factores de riesgo
para el desarrollo de enfermedades cardiovasculares. Generalmente las personas con sobrepeso u
obesidad pueden tener un perfil lipídico alterado por sobre los parámetros considerados normales.
Esto lleva a una reflexión en la persona que las padece sobre los alimentos ricos en grasa y de bajo
valor nutricional que consume.
Mediante la determinación del número acídico y reacciones coloreadas de colesterol se puede analizar
la calidad de las grasas que se consumen, ya que una mayor cantidad de ácidos grasos libres
determina acidez, por lo tanto, perdida de la calidad de las grasas.
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INTRODUCCIÓN
El colesterol es un alcohol esteroide insaturado muy soluble en grasas, pero poco hidrosoluble. El
colesterol presente en el organismo tiene un doble origen:
El que procede de la dieta - exógeno - se encuentra en su mayor parte en forma libre – no esterificado
-. El colesterol esterificado es hidrolizado por la colesterol esterasa pancreática dando colesterol libre
y ácidos grasos.
El colesterol endógeno – aunque puede ser potencialmente sintetizado por todas las células - se forma
fundamentalmente a nivel hepático e intestinal y es eliminado por el hígado – con la bilis - o utiliza do
para la síntesis de ácidos biliares. El colesterol circula en sangre unido a las lipoproteínas: Las LDL
transportan el 70% del colesterol, las HDL del 15 al 20%, el resto, circula unido a las VLDL y a los
quiliomicrones. El aumento de la concentración plasmática de colesterol, se asocia a un incremento
del riesgo de sufrir enfermedades cardiovasculares, por lo que su regulación tiene un alto interés
epidemiológico.
Por otro lado, los triglicéridos son ésteres de glicerol con tres ácidos grasos (saturados o insaturados)
de distinta longitud. Al igual que el colesterol, debido a su escasa solubilidad en agua, son
transportados en el plasma unidos a apolipoproteínas.
Las lipoproteínas ricas en triglicéridos son los quilomicrones (trigliceridos exógenos derivados de la
dieta) y las lipoproteínas de muy baja densidad VLDL (de síntesis hepática).
Los triglicéridos forman la mayor parte del peso seco del tejido adiposo, constituyendo, por lo tanto,
una potente forma de almacenamiento de energía.
El movimiento de ácidos grasos entre los distintos compartimentos del organismo se produce con gran
rapidez en respuesta a diversos estímulos (dieta, actividad física, estrés, edad). Los triglicéridos (uno
de los más importantes vehículos para el transporte de ácidos grasos) varían también su concentración
en respuesta a estos factores fisiológicos.
Los ácidos grasos de cadena larga aparecen en el conducto torácico transportados como triglicéridos
en los quilomicrones, mientras que los ácidos grasos de cadena corta y media se transportan fijados a
la albúmina en la circulación portal.
La circulación sanguínea transporta quilomicrones y VLDL a todos los tejidos del organismo, incluyendo
tejido adiposo, principal sitio de incorporación. Los quilomicrones son eliminados (hidrolizados) más
rápidamente que los VLDL.
Este punto de vista está sustentado por el hecho que gran porcentaje de pacientes con infarto de
miocardio exhiben hipertrigliceridemia.
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El método se basa en la neutralización de los ácidos grasos libres presentes en el aceite o grasa con
solución etanólica de hidróxido de potasio en presencia de fenolftaleína como indicador. El índice de
acidez se expresa en mg de Hidróxido de Potasio necesarios para neutralizar un gramo de grasa.
También puede expresarse en porcentaje de Ácido Oleico (2).
MATERIALES
Aceite de girasol.
Hidróxido de Potasio 0.1 N.
Mezcla neutralizante-Alcohol 90% Éter 1:2.
Fenolftaleína 1%.
Tubos de ensayo.
Pipetas.
Goteros.
(Imagen 1)
PROCEDIMIENTO
1. A un tubo de ensayo se le agregan: 1ml de aceite de girasol (Imagen 2), 10 ml de alcohol éter
(Imagen 3) y 10 gotas de fenolftaleína (Imagen 4)
2. Se coloca gota a gota hidróxido de potasio (KOH) hasta que esta mezcla cambie, tornándose
a un color transparente-rosa (Imagen 5)
3. Se volvió a realizar el mismo procedimiento, pero con una muestra diferente
RESULTADOS
X es el número acídico en mg
1. Con la muestra de aceite de girasol, se utilizó 3 gotas del reactivo valorante KOH, lo que
equivale a 0,15 ml. Al transformar el 1 ml de la muestra de aceite de girasol a gramos, utilizando
la densidad promedio del aceite nos da: 0,95 gr aproximadamente. Remplazando en la formula
obtenemos: 0,088
0,15 ∗ 5,6 ∗ 0,1
𝑋= = 0,088
0,95
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2. Con la muestra de aceite saturado, se utilizó 4 gotas del reactivo valorante KOH, lo que
equivale a 0,2 ml. Al transformar el 1 ml de la muestra de aceite saturado a gramos, utilizando
una densidad promedio del aceite nos da: 0,95 gr aproximadamente. Remplazando en la
formula obtenemos: 0,117
0,2 ∗ 5,6 ∗ 0,1
𝑋= = 0,117
0,95
CONCLUSIONES
El número acídico representa la presencia natural de los ácidos grasos libres en grasa.
Al realizar la mezcla de los compuestos un indicador principal de la presencia de ácidos grasos
es el cambio de coloración que presenta la reacción química de transparente a rosa.
Cada reactivo posee su propiedad por lo que se debe seguir correctamente los valores
requeridos para una prueba eficaz y óptima.
Si se da la coloración deseada, se procede a calcular el número acídico en los cuales existen
parámetros para su valoración y exactitud.
Los valores varían según el estado del aceite, los cuales dan indicadores diferentes para
determinar su respectivo número acídico, que se relaciona con su KOH gastado.
Se planteó la misma fórmula con la diferencia única de la cantidad de gotas de KOH en los
diferentes estados del aceite y se observó una elevación del número de acidéz en el aceite
saturado.
Como es evidente el número acídico aumentó con el aceite saturado, lo cual indica que si se
usa nuevamente su número de acidez será mayor y así determinará una pérdida de la calidad
propia.
ANEXOS
Imagen 1: Materiales
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2. Proseguimos a colocar 1ml de ácido sulfúrico, esto debemos hacerlo con precaución
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Resultados
Como resultado obtenemos una reacción positiva ya que gracias a la escala colorimétrica podemos
observar dos fases la fase inorgánica formada por el ácido sulfúrico y una fase
orgánica formada por el cloroformo con el colesterol, además de la interfase en la cual tenemos
como resultado la formación de un anillo de color rojo intenso el cual nos permite determinar la
presencia o ausencia de colesterol.
Materiales
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Triglicéridos
El método está basado en la hidrólisis enzimática de los triglicéridos sérico a glicerol y ácidos grasos
libres (FFA) por acción de la lipoprotein lipasa (LPL). El glicerol es fosforilado por el adenosin trifosfato
(ATP) en presencia de glicerolquinasa (GK) para formar glicerol-3-fosfato (G-3-P) y adenosin difosfato
(ADP). El G-3-P es oxidado por la glicerolfosfato oxidasa (GPO) en dihidroxiacetona fosfato (DHAP) y
peróxido de hidrogeno.
En presencia de peroxidasa (POD) el fenol y la 4-aminoantipirina (4-AA) se condensan por acción del
peróxido de hidrogeno (𝐻2 𝑂2 ) formándose un cromógeno rojo proporcional a la concentración de
triglicéridos presentes en la muestra.
LPL
Triglicéridos + 3 𝐻2 O → Glicerol + 3FFA
GK
Glicerol + ATP → Glicerol 3-P + ADP
GPO
Glicerol-3-P + 𝑂2 → DHAP + (𝐻2 𝑂2 )
𝐻2 𝑂2
4-AA + 4 Fenol → Quinonalmina + 𝐻2 O
POD
Composición de los reactivos
R1.- Monoreactivo. Tampón PIPES 50 mmol/L pH, 6,8, LPL> 12 KU/L, GK> 1 KU/L, GPO>10 KU/L,
ATP 2,0 mmol/L Mg 40 mmol/L POD > 2,5 KU/L, 4-AA 0,5 mmol/L, fenol 3 mmol/L. lansioactivos no-
iónicos 2 g/L (p/v), Biocidas.
CAL.- patrón de Triglicéridos, Glicerol 2,26 mmol/L equivalente a 200 mg/dL de glicerol trioleato. Patrón
secundario. El valor de concentración es trazable al Material de Referencia Certificado 909b.
Muestras
Suero, plasma heparinizado u obtenido con EDTA libre de hemolisis. Separar las células dentro de las
2 horas siguientes a la venipuntura. Analizar las muestras de inmediato o refrigerarlas. Estables 1
semana a 4-8℃.
Interferencias
Equipo adicional
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Técnica
Cálculos
𝐴 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
x C Patrón= mg/dL triglicéridos
𝐴 𝑃𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛
Muestras con concentraciones superiores a 500 mg/dL deben diluirse 1:2 con solución salina y repetir
el ensayo. Multiplicar los resultados por 2.
Mg/dL x 0,0113=mmol/L
Valores de referencia
Valores clínicos actualizados de triglicéridos empleados para clasificar los grupos de riesgo.
Triglicéridos Clasificación
<150 mg/dL (<1,70 mmol/L) Normal
150-199 mg/dL (1,70-2,25 mmol/L) Medio/Alto
200-499 mg/dL (2,26-6,63 mmol/L) Alto
>500 mg/dL (>5,65 mmol/L) Muy alto
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango de referencia.
Control de calidad
El empleo de un calibrador para calcular los resultados permite obtener una exactitud independiente
del sistema o instrumento empleado.
Para un control de calidad adecuado, se incluirán en cada serie controles valorados (normales y
elevados) que se tratarán como muestras problema.
Si los resultados obtenidos se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los
reactivos y la técnica usada. Cada laboratorio debe establecer su propio control de calidad y sus
medidas correctoras cuando los controles no cumplan con las tolerancias exigidas.
Notas
1. Este ensayo permite ser adaptado a distintos instrumentos automáticos. Cualquier adaptación
a un instrumento deberá ser validado con el fin de demostrar que se cumplen las
características analíticas del método. Se recomienda validar periódicamente el instrumento.
Consultar con su distribuidor para cualquier dificultad en la adaptación del método.
2. El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los resultados de un único ensayo,
sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clínicos del paciente. (5)
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Colesterol
Este método para la determinación de colesterol total en suero se basa en el uso de tres enzimas:
colesterol esterasa (CE), colesterol oxidasa (CO) y peroxidasa (POD). En presencia de este ultimo la
muestra de fenol y 4-aminoantipirina (4-AA) se condensan por acción de peróxido de hidrogeno,
formando una quinonalmina condensada proporcional a la concentración de colesterol en la muestra.
CE
Colesterol esterificado → Colesterol – ácidos grasos
CO
Colesterol - 𝑂2 → Colestenona - 𝐼2 𝑂2
𝐻2 𝑂2
4-AA + Fenol → Quinonalmina + 4𝐻2 O
POD
R1.- Monoreactivo PIPES 200 mmol/L pH 7.0 colatos acidicos 1 mmol/L colesterol esterasa>250 U/L
colesterol oxidasa >250 U/L peroxidasa> 1 KU/L 4-aminoantipirina 0,22 mmol/L fenol 4 mmol/L
lansioactivos no-ionicos 2 g/L (p/v), Biocidas.
CAL.- Patrón de colesterol. Colesterol 200 mg/dL 0,12 mmol/L. Patrón primario de matriz orgánica. El
valor de concentración es trazable al Material de Referencia Certificado 909b.
Muestras
El colesterol en suero o plasma es estable unos 2 días a 2-3 ℃ y unos 6 meses a -20℃.
Interferencias
Equipo adicional
Técnica
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Cálculos
𝐴 𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
x C Patrón= mg/dL colesterol total.
𝐴 𝑃𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛
Muestras con concentraciones superiores a 500 mg/dL deben diluirse 1:2 con solución salina y repetir
el ensayo. Multiplicar los resultados por 2.
Mg/dL x 0,0259=mmol/L
Valores de referencia
Valores clínicos actualizados de triglicéridos empleados para clasificar los grupos de riesgo.
El empleo de un calibrador para calcular los resultados permite obtener una exactitud independiente
del sistema o instrumento empleado.
Para un control de calidad adecuado, se incluirán en cada serie controles valorados (normales y
elevados) que se tratarán como muestras problema.
Si los resultados obtenidos se encuentran fuera del rango de tolerancia, revisar el instrumento, los
reactivos y la técnica usada. Cada laboratorio debe establecer su propio control de calidad y sus
medidas correctoras cuando los controles no cumplan con las tolerancias exigidas.
Notas
1. Este ensayo permite ser adaptado a distintos instrumentos automáticos. Cualquier adaptación
a un instrumento deberá ser validado con el fin de demostrar que se cumplen las
características analíticas del método. Se recomienda validar periódicamente el instrumento.
Consultar con su distribuidor para cualquier dificultad en la adaptación del método.
2. El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los resultados de un único ensayo,
sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clínicos del paciente. (6)
RESULTADOS
Medidas antropométricas
A. MUESTRA
A. PATRON 200
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A. MUESTRA
B. PATRON 200
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En la estudiante Nathaly Borbor se obtuvo un valor de 190,69mg/dl, que está dentro del rango
medio/alto. Al ser una persona con IMC e ICC normal, se puede pensar que tiene una alimentación
rica en grasas o un estilo de vida sedentaria y por eso el resultado.
En el estudiante Sebastián Torres se obtuvo un valor de 202,32mg/dl, que está dentro del rango alto.
Por ser una persona joven con IMC e ICC normal, el resultado es llamativo. Las razones pueden ser
varias, como por ejemplo una cirrosis, dieta baja en baja en proteínas y alta en carbohidratos, síndrome
nefrótico, entre otros. (7)
En la estudiante Melany Mena se obtuvo un valor de 193,02mg/dl, que está dentro del rango medio/alto.
También posee un IMC e ICC normal.
Puede existir un margen de error debido a un mal pipeteo o un mal tiempo para hacer la lectura. Los
niveles de triglicéridos varían con la edad y del tiempo que tenga el paciente de haber ingerido
alimentos.
Colesterol
En esta práctica se determinó el colesterol. El colesterol es el principal esterol del organismo humano
y precursor de todos los demás esteroides corporales. Se encuentra formando parte de membrana
celulares, lipoproteínas, ácidos biliares y hormonas esteroideas.
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En la estudiante Nathaly Borbor se obtuvo un valor de 182,22mg/dl, que está dentro del rango
deseable.
En el estudiante Sebastián Torres se obtuvo un valor de 186,66mg/dl, que también está dentro del
rango deseable.
En la estudiante Melany Mena se obtuvo un valor de 211,11mg/dl, que está dentro del rango normal
alto. A pesar de no ser un mal resultado, y por tener un IMC e ICC normal, se podría pensar que la
razón de estos valores es por una alimentación rica en grasas o por falta de ejercicio y llevar un estilo
de vida inactivo. (8)
Puede existir un margen de error debido a un mal pipeteo o un mal tiempo para hacer la lectura.
CONCLUSIÓN
La prueba de triglicéridos es un análisis que se utiliza para determinar el nivel de estos en la sangre,
así como también para evaluar la función hepática y un posible riesgo cardiovascular. Los triglicéridos
son transportados a todo el organismo para dar energía o bien para ser almacenados como grasa.
ANEXOS
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AGRADECIMIENTO:
Agradecemos profundamente a nuestro docente Ing. William Muñoz que con paciencia y
responsabilidad nos sigue llenando de conocimientos con cada clase impartida. A cada uno de
nuestros compañeros del grupo, por estar atentos a cada explicación y ayudarnos mutuamente para
la elaboración del presente trabajo, y por haber formado conjuntamente un gran equipo, en el que sin
duda alguna hubo muestras de respeto, compromiso y compañerismo los unos con los otros.
BIBLIOGRAFÍA:
2. Determinación del índice de acidez en aceites y grasas comestibles [Internet]. [citado 30 de julio
de 2018]. Disponible en: https://es.scribd.com/doc/97574878/Determinacion-del-indice-de-acidez-
en-aceites-y-grasas-comestibles
4. Gavilanes Jonathan, Fuentes Cinthya. Ailasmiento del colesterol (Sitio de Internet). Universidad
Tecnica de Ambato. Scribd. https://es.scribd.com/doc/196512141/Colesterol Noviembre 2014
5. 74_1155005C.pdf [Internet]. [citado 29 de julio de 2018]. Disponible en:
http://www.linear.es/ficheros/archivos/74_1155005C.pdf
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7. Madrid CD. Nivel de triglicéridos [Internet]. Clínica DAM. 2018 [citado 29 de julio de 2018].
Disponible en: https://www.clinicadam.com/salud/5/003493.html
8. Madrid CD. Niveles altos de colesterol en sangre [Internet]. Clínica DAM. 2018 [citado 29 de julio
de 2018]. Disponible en: https://www.clinicadam.com/salud/5/000403.html
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