AÑO DEL DIÁLOGO Y LA

RECONCILIACIÓN NACIONAL

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO

FACULTAD:
Ciencias agrarias

ESCUELA PROFESIONAL:
Ing. Agroindustrial

ASIGNATURA:
Microbiología

INFORME:
Preparación de medios de cultivo, plaqueo y entubado de medios de cultivo, métodos de
siembra y aislamiento de los microorganismos.

INTEGRANTES:
CABRERA MAMANI leydy yasmin
CANAZA MIRANDA salome
LLICA QUISPE Yuli Vanesa
MAMANI VILLENA Kathia Evelin
MAYTA MACHACA lizberth

DOCENTE:
Ing. Juan Quispe Ccama

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 I. RESUMEN

La presente práctica se realizó en el laboratorio de microbiología. Cuyo objetivo fue la

preparación del medio del cultivo y esterilización de materiales para el uso de preparación
de los cultivos. Para lo cual se utilizó matraz de Erlenmeyer, probetas graduadas, tubos
de ensayo, y la autoclave, estufa. para esterilizar los materiales, por último, se dejó enfriar
el medio de cultivo y se vacío a las placas Petri, los cuales fueron guardados en el
refrigerador, después de 24 horas hicimos el conteo de microorganismos en el equipo de
conteo de colonias.

II. INTRODUCCION

Los medios de cultivo son fuentes nutritivas, naturales o sintéticas que semejan el nicho
ecológico de los microorganismos. Permiten el crecimiento de los microorganismos.
Estos medios son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en
su fabricación, preparación, conservación y uso. (gutirrez, 2001)

uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio.(Medium,2018)

III. OBJETIVOS
Poder conocer los mecanismos para homogenizar
Preparar diluciones de muestra de agar
Sembrar las muestras de alimentos sólidos y líquidos
IV. FUNDAMENTO TEÓRICO

Son soluciones estériles que tienen macronutrientes y micronutrientes, son sustancias que
permiten el crecimiento de organismos. Un medio de cultivo es un sustrato o una solución
de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En las condiciones de
laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las
muestras en las que los microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias.
(geronimo, 25 de sept. de 2013)

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LOS MICROORGANISMOS:

Son los seres más abundantes de la tierra, pueden vivir en condiciones extremas de pH,
temperatura y tensión de oxígeno, colonizando una amplia diversidad de nichos
ecológicos. Entre los requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono,
el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. (geronimo, 25 de sept. de 2013)

CULTIVO

Es el producto del crecimiento de organismos, establecidos con fines experimentales o

industriales. (geronimo, 25 de sept. de 2013)

CULTIVO PURO

Es la presencia de una sola especie de microrganismo libre de todo contaminante, a esto

que también se le denomina AXENICO. (geronimo, 25 de sept. de 2013)

PREPARACIÓN DE UN MEDIO DE CULTIVO

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el
laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de
Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de
oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de
cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar
exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas
requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del
cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos
de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El Agar es un elemento
solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo (delgado, jose,
Publicado el 14 de nov. de 2010)

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros

componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los
microorganismos. La diversidad metabólica de estos es tan grande que la variedad de

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medios de cultivo es enorme, no existiendo un medio de cultivo universal adecuado para
todos ellos, ni siquiera refiriéndonos a las bacterias con exclusividad. (gutirrez, 2001)

CONSTITUYENTES HABITUALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS

A continuación, se da una idea general sobre alguno de los constituyentes habituales de

los medios de cultivo.

AGAR: Se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los medios de cultivo. En el
agar bacteriológico el componente dominante es un polisacárido que se obtiene de ciertas
algas marinas y que presenta la indudable ventaja de que a excepción de algunos
microorganismos marinos, no es utilizado como nutriente. (gutirrez, 2001).
PROPIEDADES

 indica las propiedades del agar agar:

 Se derrite a 80 -100 ºC. Tolera altas temperaturas de esterilización sin
descomponerse.
 Se solidifica a 35 – 50 ºC.
 Adquiere firmeza en medios de cultivos a concentraciones de 1,5 a 2,0 %.
 Se hidroliza a pH de 2 y pH 9. Su valor nutritivo es casi nulo y contiene algunos
factores de crecimiento. . (gutirrez, 2001)

TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVO

Por su origen:

 Artificiales siendo trasformado por medios mecánicos o químicos

Sintéticos (Medios deshidratados)
Los medios de cultivo comerciales deshidratados son productos a los cuales se le
ha eliminado el agua y todas las interferencias de tipo químico, con un pH
ajustado, que se han controlado física, química y bacteriológicamente. Es decir es
un producto estandarizado. (Wikilibros, 2004)

EJEMPLO:

-MacConkey-agar

-Plate-count-agar

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 Por su consistencia:

 Solido: También sostiene que el uso de principal en medios solidos es para el

aislamiento de hongos y bacterias, y para su mantenimiento. Se prepara en placas
Petri.

Solido: es el componente principal (agar nutritivo)

MacCONKEY-agar

Plate-count-agar

V. MATERIALES Y METODOS

-matraz de Erlenmeyer -probeta

-balanza -medio de cultivo

-mechero bunsen -agua destilada

-autoclave -estufa

-papel aluminio y Graf -pabilo

-pipeta -tubo de ensayo

VI. PROCEDIMIENTO

primeramente, se hizo el esterilizado de materiales que son:4 placas Petri, 4 tubos de

ensayo y 2 matraces de Erlenmeyer juntamente con los medos de cultivo. Para
posteriormente poder seguir con el procedimiento.

Se utilizó una balanza para poder pesar los medios de cultivo macconkey y plate-count

Se utilizó dos medios de cultivo que son:

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Agar macconkey: sirve para determinar los coliformes.

Agar plate-count: sirve para determinar los mesófilos y aerobios.

si 50 gr. de agar macconkey es para 1000ml de agua destilada. Entonces

Realizamos el cálculo de la proporción para 30 ml de agua destilada.
50gr 1000ml
X 30ml
30x50
𝑥= = 1.5𝑔𝑟
1000
Se necesita 1.5𝑔𝑟 de agar macconkey para 35ml de agua destilada.

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 si 25gr de agar plate-count es para cada 1000ml de agua destilada. entonces
realizamos el cálculo de la proporción para 35ml de agua destilada
25gr 1000ml
X 30ml
25grx30ml
𝑥= = 0.675𝑔𝑟
1000ml

Se necesita 0.675𝑔𝑟 de agar plate-count para 35ml de agua destilada.

Esterilizar la disolución para que así pueda evitarse el crecimiento de otros microorganismos.

Luego se colocan en el autoclave para poder esterilizarlos como placas Petri, tubo de ensayo y
matraz junto no la muestra de agar.

A una temperatura de 121o 15 c a una presión de 15 libras por 15 minutos.

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 Al transcurrir los 15 minutos. Dejar a que la presión descienda a 0.

Luego abrimos cuidadosamente el autoclave para poder sacar los medios de cultivo ya
esterilizados.

Dejar enfriar al medio, hasta una temperatura en la que el matraz caliente no queme la
piel, y vertimos suavemente a las placas Petri el medio de cultivo.

VII. CONCLUSION

En conclusión, se puedo conocer los diferentes medios de cultivos para poder sembrar
microrganismos.

Se aprendió de forma correcta los pasos para elaborar un medio de cultivo, sus cálculos
respectivos de las cantidades necesarias para su preparación

VIII. BILIOGRAFIA
delgado, jose. (Publicado el 14 de nov. de 2010). medio de cultivo.
geronimo, a. w. (25 de sept. de 2013). MEDIOS DE CULTIVOS: METODOLOGÍA Y
USOS. huanuco .
gutirrez, s. (16 de 10 de 2001). preparacion de medios de cultivo . Obtenido de
preparacion de medios de cultivo :
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_P
reparaci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf
Growth Medium 2018

Wikilibros. (2004). microbiologia medio de cultivo . Wikilibros.

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 PLAQUEO DE MEDIOS DE CULTIVOS

I. INTRODUCCIÓN
Existen tipos de medios de cultivos sólidos como el agar plate- cont, y agar macConkey
que nos permite identificar los microorganismos aerobios, mesofilos y coliformen para
ello se utilizó placas Petri. (geronimo, 25 de sept. de 2013)

II. OBJETIVOS
Conocer las operaciones que se utilizara en la ejecución de plaqueos de medios
de cultivo. (Wikilibros, 2004)
Contaje de colonias para contar el número de colonias por ml. Se coloca en la placa
número 1ml de la muestra problema. Luego de 10 ml.

III. FUNDAMENTO TEÓRICO

Plaqueo: consiste en el reparto de los medios de cultivo especialmente de consistencia

sólida, utilizando para este fin placas Petri, para cumplir los siguientes objetivos.
(delgado, jose, Publicado el 14 de nov. de 2010)
Consideraciones previas: se debe tener el ambiente limpio y desinfectado y también el
material de vidrio que se utilizara tiene que estar estéril. (gutirrez, 2001)

IV. MATERIALES Y MÉTODOS

Placas Petri
Mechero a alcohol
Matraz erlynmeyer
Tubos de ensayo
algodón

V. PROCEDIMIENTO

Una vez que se tienen los medios de cultivo esterilizados se sigue el siguiente
procedimiento
 Desenvolver la placa Petri quitándoles los papeles y el pabilo.
 Alzar la placa, con la mano izquierda.
 Abrir lentamente la placa formando un Angulo de 45, y siempre mantener al
lado del mechero.

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  Con la mano derecha coger el frasco que contiene el cultivo y agitar
suavemente y verter a la placa una cantidad de 15 ml que es un aprox.
 Ya terminadas todo el envase ponerlos sus respectivos nombres para luego no
ser confundidos.
 Esperar que enfrié hasta coagularse el medio de cultivo.

 Agregar las soluciones que se preparó en la práctica que es reparto de medios de cultivo
en tubos haciendo lo siguiente.

AGAR PLATE-
AGAR MACCONKEY COUNT
Agregamos 1ml De la
Agregamos 1ml De solución
la solución
Ala 10-3
-3
Ala 10

Aerobios y
Coliformes mesofilos

AGAR MACCONKEY AGAR PLATE-

Agregamos 1ml de COUNT
la solución Agregamos 1ml de la
solución
Ala 10-4 Ala 10-4

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PREPARACION DE LAS MUESTRAS SUSESIVAS

Tomamos 1 ml de muestra de yogurt y lo llevamos a un tubo de ensayo al 10-2 que

contiene 9 ml de agua destilada.

Utilizaremos 3 tubos de ensayo para agregar yogurt, en cada tubo se le coloca una
cantidad de 9ml de agua destilada. El primer tubo de ensayo es 10-2 el 2do 10-3 y el 3ro
10-4.

Teniendo en
cuenta que los
recipientes
tienen la solución
ya lista
sacaremos el
papel crep con
que estaba
tapado

Se abre el frasco tomando con la mano derecha y con la izquierda se quita la tapa.

Este proceso se hace

con la mano izquierda
y con la mano derecha
agregar agua con la
probeta.

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  Se da vueltas la boca del frasco y se mantiene en posición semi inclinado y siempre
estar cerca del mechero.
 Empezamos a verter agua destilada de 9ml con la probeta a cada uno de los tubos de
ensayo.

 Invertimos en la solución al primer tubo y de ahí agitaremos y sacaremos 1 ml de la

nueva solución y nuevamente introducir lo extraído al segundo tubo y agitarle y sacarle
1 ml de la segunda solución.

Extraer 1ml extraer 1ml

9ml 9ml 9ml

Agua destilada Agua destilada Agua destilada

10-2 10-3 10-4

Se rotula los tubos y se colocan en la gradilla.

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VI. CONCLUSIÓN

Como estudiantes de ing. agroindustrial gracias a la práctica en el laboratorio de

microbiología desarrollamos nuestros conocimientos en lo que respecta a medios de
cultivo y así poder aplicar en nuestra vida profesional.

En esta práctica se aprendió a plaquear los medios de cultivo adecuadamente y realizar

una muestra biológica.

VII. BIBLIOGRAFÍA

berrios, h. (2010). metodos de siembra.

delgado, jose. (Publicado el 14 de nov. de 2010). medio de cultivo.

geronimo, a. w. (25 de sept. de 2013). MEDIOS DE CULTIVOS: METODOLOGÍA Y USOS. huanuco

.

gutirrez, s. (16 de 10 de 2001). preparacion de medios de cultivo . Obtenido de preparacion de

medios de cultivo :
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Prepa
raci%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf

https://www.blogger.com/profile/08985975979996526844. (2011/09). metodos de siembra.

http://metodosdsiembras.blogspot.com/2011/09/v-behaviorurldefaultvmlo.html.

Wikilibros. (2004). microbiologia medio de cultivo . Wikilibros.

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 MÉTODOS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS

I. INTRODUCCION

En esta práctica se da a conocer los métodos de siembra que es un procedimiento

que consiste en acondicionar el micoorganismo en un medio de cultivo para que
así pueda desarrollarse en temperaturas optimas y tiempo de incubación.

II. OBJETIVOS
Conocer las técnicas de siembra para el recuento de microorganismos
Realizar un correcto aislamiento de microorganismos
Conocer los métodos de siembra

III. FUNDAMENTO TEORICO

Siembra: Es el acto de colocar el material bacteriológico en el medio de cultivo para

promover su crecimiento y desarrollo, y subsiguiente multiplicación.
El resultado de una siembra se llama: Cultivo
Las siembras pueden ser:
- Primarias: cuando el material es inoculado en los medios por primera vez
- Secundarias: cuando el material a inocular procede de una siembra primaria (metodos
de siembra, 2011/09)
MODALIDADES DE SIEMBRAS:

Para la diseminación de los microorganismos es necesaria una amplia superficie de

medo nutritivo, esta se logra en las placas Petri y en menor media en el agar inclinado.
La técnica de la siembra en si consiste en pasar sobre toda la superficie del medio, el
instrumento portador del inoculo; en esta modalidad es recomendada evitar dañar la
superficie del medio.
En las placas Petri es donde se hará la siembra, luego marcar con un rotulador poniendo
el nombre u otro dato importante.
Se tiene que trabajar cerca del mechero para flamear la boca de la placa Petri con el
medio, antes y después de sembrar para evitar contaminaciones. (berrios, 2010)

INCUBACION
Después de la siembra, las placas Petri deben quedar en la incubadora con la tapa hacia
abajo, para que el agua de condensación no malogre la siembra. (berrios, 2010)

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 LECTURA DE SIEMBRA
Esta se realiza entre las 24 horas tiempo en que aparecen por lo común las primeras
colonias.
Es cuando empieza las observaciones del cultivo. (berrios, 2010)

IV. MATERIALES Y METODOS

Placas Petri con medios de cultivo

Mechero
Pipeta
Incubadora
Algodón
Tubo de ensayo con muestras

V. PROCEDIMIENTO
 Se tiene que pipetear en placas Petri 1 ml. De la dilución efectuada.
 Invertir en las placas inoculadas 10 a 15 ml. De agar estándar y fundido y templado a
45°c.

 Mezclar el inoculo de siembra con el medio de cultivo.

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  Una vez solidificado el agar invertir las placas en la incubadora a 35°c durante 24
horas.
 Utilizar el contador de colonias para poder contar la cantidad de colonias en las placas.

VI. RESULTADOS
En este caso los resultados fueron negativos por que no se obtuvo ni un
microorganismo al momento de contar las colonias.
Esto sucedió por que se utilizó un yogurt que está hecho para uso comestible y no
para el uso en el laboratorio.

VII. CONCLUSIONES

En conclusión, aprendimos que al momento de hacer la siembra debemos trabajar

de forma cuidadosa caso contrario las muestras pueden ser contaminadas.
Se tiene que trabajar con una muestra que ya este degradado para así poder tener
mayores resultados al momento de contar las colonias.

VIII. BIBLIOGRAFIA
berrios, h. (2010). metodos de siembra.

(metodos de siembra, 2011/09) https://www.blogger.com/profile/08985975979996526844.

(2011/09). metodos de siembra.

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