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ACTIVIDAD ENZIMATICA
Practica N°03-Laboratorio de bioquímica
INTRODUCCIÓN
Las enzimas son compuestos de naturaleza proteica que tienen la propiedad de acelerar
las reacciones químicas sin modificar la constante de equilibrio del sistema. Su actividad
es afectada por diversos factores:
Concentración de sustrato
PH
Concentración de enzima
Temperatura
Inhibidores
Fuerza iónica, constante dieléctrica, etc.
Las enzimas son sumamente específicas en las reacciones que catalizan y en los
compuestos (llamados sustratos) sobre los que actúan.
Las mediciones de la cinética proporcionan una herramienta bioquímica muy útil para
calcular la concentración de una enzima en una muestra biológica y comparar su
actividad catalítica con la de otras enzimas.
La velocidad a la que procede una reacción enzimática está controlada en parte por las
concentraciones de la enzima y el sustrato.
La relación entre Vo y [S] para una reacción enzimáticas fue descrita por Leonor
Michaelis y Maude Menten en 1913 dando la ecuación de Michael-Menten.
La principal desventaja de este modelo es que este modelo no cumple para todas
las enzimas.
Las enzimas son proteínas que catalizan todas las reacciones bioquímicas. Además de
su importancia como catalizadores biológicos, tienen muchos usos médicos y
comerciales.
4) Influencia de la temperatura
Las Enzimas no son inactivadas por la congelación; las reacciones que producen tienen
a lugar muy lentamente a temperaturas bajas, o se detienen, pero la actividad catalítica
reaparece si la temperatura vuelve a su estado normal
TIPOS DE INHIBIDORES
Inhibidor Reversible
Este tipo de inhibidor se puede superar con concentraciones suficientes altas del
sustrato, es decir dejando afuera el inhibidor.
Inhibición Mixta
El sustrato en el inhibidor afecta la unión del sustito y viceversa; este tipo de inhibidor
se puede reducir pero no se puede superar al aumentar la concentración del sustrato
aunque si se dan las cosas que se unan el sitio activo.
Aunque es posible que los inhibidores de tipo mixta se unen al sitio activo (efecto
alosterico)
Donde el inhibidor se une a otro sitio activo que no es el sitio activo de la enzima todo
esto es un sitio alosterico cambia con la formación da la afinidad del sustrato por el sitito
activo reducido.
Inhibición No Competitiva
Es una forma de una inhibición mixta donde la unión del inhibidor con la enzima reduce
su actividad pero no acepta la unión del sustrato. El grado de inhibición depende de su
concentración.
Inhibidor Irreversible:
Los inhibidores irreversibles dan lugar a una inhibición dependiente del tiempo y por ello
su potencia no puede ser caracterizada mediante la determinación del valor. Esto se
debe a la cantidad de enzima activa a la concentración dada de inhibidor irreversible
será diferente dependiendo del tiempo de pre incubación del inhibidor con la enzima.
8) La diferencia de las absorbancia entre los tubos nos indicará la actividad enzimática
para cada tubo.
9) Graficar en papel milimetrado: Actividad enzimática en el eje Y vs concentración de
la enzima [E] en el eje X.
EXPERIMENTO B
2) Mezclar bien los tubos. Hacer un control con la solución yodada con todos los cinco
tubos de la misma manera que se hizo en el experimento anterior y leer las
absorbancia de dichos controles a 650 nm. Dichas absorbancia se tomarán como
lecturas iniciales.
3) Luego añadir 1 ml de solución de enzima a cada tubo y colocarlos en el baño de
agua a 37°C por 20 minutos.
4) Sacar los tubos y hacer un control con solución yodada de cada uno. Las lecturas
de absorbancia se tomarán ahora como lecturas finales.
5) Hacer la diferencia:
Las enzimas son los catalizadores biológicos muy importantes ya que casi todos los
procesos en las células los necesitan para que ocurran a unas tasas significativas.
Las enzimas suelen ser tan específicas que son incapaces de actuar sobre las
sustancias estrechamente relacionadas.
Las enzimas vienen a ser las proteínas catalíticas que aceleran la velocidad de las
reacciones celulares al bajar la energía de activación y estabilizar las
intermediaciones del estado de transición.
El sitio activo de la enzima comprende dos partes adicionales una región de unión
de sustrato y la otra catalítica.
BIBLIOGRAFIA
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