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(1)
Dos riñones - un par de órganos de color oscuro entre café y morado, situados debajo de
las costillas y hacia el medio de la espalda. Sus funciones son:
Eliminar los desechos líquidos de la sangre en forma de orina.
Mantener un equilibrio estable de sales y otras sustancias en la sangre.
Los riñones eliminan la urea de la sangre a través de unas unidades de filtración diminutas
llamadas nefronas. Cada nefrona consiste en una bola formada por pequeños capilares
sanguíneos llamados glomérulos y por un pequeño tubo llamado túbulo renal. La urea, junto con el
agua y otras sustancias de desecho, forma la orina al pasar a través de las nefronas y bajar a los
túbulos renales.
Nefrón o Nefrona:
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Dos uréteres - tubos estrechos que llevan la orina de los riñones a la vejiga. Los músculos
de las paredes de los uréteres se contraen y relajan continuamente para forzar la orina hacia abajo,
lejos de los riñones. Si la orina se acumula, o si se queda sin moverse, puede desarrollarse una
infección del riñón. Aproximadamente cada 10 ó 15 segundos, los uréteres vacían cantidades
pequeñas de orina en la vejiga.
Vejiga - órgano hueco de forma triangular, situado en el abdomen inferior. Está sostenida
por ligamentos unidos a otros órganos y a los huesos de la pelvis. Las paredes de la vejiga se
relajan y dilatan para acumular la orina, y se contraen y aplanan para vaciarla a través de la uretra.
La vejiga típica del adulto sano puede almacenar hasta dos tazas de orina en un período de dos a
cinco horas.
Dos músculos del esfínter - músculos circulares que ayudan a que la orina no gotee
cerrándose herméticamente como una cinta de goma alrededor del orificio de la vejiga.
Nervios de la vejiga - avisan a la persona cuando es hora de orinar o de vaciar la vejiga.
Uretra - tubo a través del cual pasa la orina desde la vejiga al exterior del cuerpo. El
cerebro envía señales a los músculos de la vejiga para que se contraigan y expulsen la orina. Al
mismo tiempo, el cerebro envía señales a los músculos del esfínter para que se relajen y permitan
la salida de orina de la vejiga a través de la uretra. Cuando todas las señales se suceden en el
orden correcto, ocurre la micción normal.(2)
¿Cómo funciona el aparato urinario?
Los desechos de la sangre se forman a partir de la descomposición normal de los tejidos
activos y de los alimentos consumidos. El cuerpo usa la comida como fuente de energía y para
¿Qué es la Orina?
La orina se define como el líquido excretado por los riñones, el cual, contiene sales y productos de
desecho del organismo.(3) Las muestras de orina son biopsias líquidas de los tejidos del tracto
urinario, recolectadas en forma indolora que permiten tener información rápida y económica.(4)
Funciones de la orina:
1. Eliminación de sustancias tóxicas producidas por el metabolismo celular o por la ingesta.
2. El control electrolítico, regulando la excreción de sodio y potasio principalmente.
3. Regulación hídrica o de la volemia, para el control de la tensión arterial.
4. Control del equilibrio ácido-base.
5. Comunicación olfatoria: En algunos animales.
Formación de la Orina:
Mediante la formación de la orina los riñones cumplen con su principal función de remover
de la sangre los productos potencialmente tóxicos (4)
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Cada día, los riñones filtran 180 litros de sangre y producen una media de 1500 mililitros
(1,5 litros) de orina. En cada glomérulo renal la sangre se filtra por un fenómeno de ósmosis: El
glomérulo se descarga de agua, de sustancias minerales y biológicas. Esta orina primaria circula
por un sistema de túbulos que componen la nefrona como el túbulo contorneado proximal, asa de
Henle, túbulo contorneado distal, donde la orina por un lado se enriquece sucesivamente de
diversas sustancias como urea, amonio, bicarbonato (excreción) y por otro se descarga de ciertos
compuestos recuperados por el organismo como el agua, glucosa y sales minerales (reabsorción).
Los fenómenos de excreción y de absorción son regulados por varias hormonas, como la hormona
antidiurética. La orina que circula por todos los túbulos contorneados distales es reunida en los
túbulos de Bellini, después éstos se unen en los cálices renales y en los uréteres que desembocan
en la vejiga urinaria. Una vez que el contenido vesical alcanza un nivel, el deseo de orinar se
transmite al cerebro para vaciar la vejiga durante la micción. (4)
Composición de la Orina:
La orina normal contiene un 96% de agua y un 4% de sólidos en solución. Cerca de la mitad
de los sólidos son urea, (el principal producto de degradación del metabolismo de las proteínas). El
resto incluye nitrógeno, cloruros, sodio, potasio, calcio, fósforo, amonio, creatinina, ácido úrico,
proteínas y bicarbonato (5)
Es de resaltar que por los métodos rutinarios para la determinación de proteínas (método de
Robert y tiras reactivas) las orinas dan resultados negativos si los valores de éstas son bajos, ya que
estos no son métodos muy sensibles. Esto se explica detalladamente en “CARACTERÍSTICAS
QUÍMICAS DE LA ORINA”, específicamente en lo que respecta a proteínas.
UROANÁLISIS
MUESTRA DE ORINA
La definiremos como a una porción o parte de orina, que se considera representativa en
primer lugar, de las condiciones en la que se encuentra el tracto urinario y en segundo lugar de las
condiciones metabólicas o sistémicas del organismo.
Para las determinaciones químicas cuantitativas como son, fósforo, urea, acido úrico,
creatinina, calcio etc…etc…etc… las orinas aisladas no se consideran representativas, por lo que se
recomienda la recolección de orina de 24 horas, esto se debe a que la excreción de estos elementos
no es constante y tiene variaciones durante el día e incluso presenta variaciones en la etapa de
actividad y en la etapa de descanso.
Al llegar la muestra de orina al Laboratorio, debemos proceder inmediatamente a
rotularla, bien sea con un numero, el nombre del paciente, ambos o de cualquier manera que permita
una fácil identificación. El rótulo debe estar colocado tanto en el envase como en la tapa del mismo.
En algunos casos el paciente debe estar en ayunas, como por ejemplo, para la determinación de la
Son aquellas muestras obtenidas durante una sola micción a cualquier hora del día. Este tipo de
muestra presenta múltiples variantes:
a.- 1era Orina de la mañana: el paciente al levantarse y después de lavar y secar bien los genitales,
especialmente alrededor de la uretra, descarta el primer chorro de orina y a partir del chorro del
medio, realiza la recolección, en un vaso recolector para orina, estéril, y preferiblemente transparente,
Aplicación: examen general de orina (sedimento urinario y análisis químico), análisis bacteriológicos
(cultivos), toxicológicos (drogas de abuso), otras pruebas especiales como: microalbuminuria,
proteínas de Bence-Jones, recuento diferencial, BK, GRAM etc.
b.- Muestra aislada a cualquier hora del día: como su nombre lo indica el paciente recoge la orina a
cualquier hora del día eliminando la primera porción (previo lavado y secado de los genitales) y
recogiendo a partir del chorro del medio, en un vaso recolector para orina, estéril, y preferiblemente
transparente Aplicación: exámenes de orina (ejem: en pacientes con cólicos nefríticos), exámenes
bacteriológicos (ejem: pacientes sugestivos de procesos infecciosos/inflamatorios), exámenes
toxicológicos (en pacientes que ingresan por emergencia con clínica de drogadicción). Podemos
observar con lo anteriormente expuesto, que esta toma de muestra es muy utilizada en los casos de
emergencia clínica. Si el paciente no presenta signos y/o síntomas clínicos bien definidos, es
preferible la 1era Orina de la mañana, ya que esta se encuentra mas concentrada y existe mayor
probabilidad de encontrar el agente causal, o el(los) indicador(es) del proceso patológico presentado,
el cual va a colaborar con el médico en la consecución de un diagnóstico correcto.
En pacientes que no controlen los esfínteres como los niños y lactantes, es necesario lavar
completamente el área alrededor de la uretra, abrir una bolsa recolectora de orina y luego colocarle la
bolsa al bebé.
A los niños se les puede introducir todo el pene dentro de la bolsa y se pega el adhesivo a la
piel; a las niñas se les adhiere la bolsa sobre los labios mayores. Se debe colocar el pañal bien
asegurado sobre la bolsa. Se recomienda revisar al bebé frecuentemente y retirar la bolsa después de
que éste haya orinado en ella. En los bebés activos, es posible que se tenga que repetir el
procedimiento, dado que la bolsa se puede mover, por lo que se dificulta la obtención de la muestra.
Las muestras de orina recolectadas en bolsas, generalmente no son ideales para cultivos de orina, ya
que con frecuencia están contaminadas.(6) Por este motivo no debe permanecer la bolsa mas de 30
minutos colocadas en los genitales, de suceder esto hay que limpiar la zona de nuevo y colocar una
nueva bolsa recolectora
c.- Orina parcial fraccionada o muestra de los tres vasos: el paciente al levantarse procede al
lavado y secado de los genitales sobre todo alrededor de la uretra, y recoge la 1era Orina de la
mañana, en tres fracciones, marcando tres recolectores para orina, estériles, preferiblemente
transparentes, antes de la toma de la muestra como F1, F2; F3; 1,2,3 ; A,B,C o de cualquier manera
que permita diferenciar las tres porciones de orina. F1 (o similar), corresponde al primer chorro, F2 (o
similar), al chorro del medio y F3 (o similar) a la última porción de orina. Aplicación: Este examen se
emplea principalmente para tratar de ubicar el origen de la hematuria. Si sólo se presenta sangrado en
la F1 indica sangrado a nivel uretral, si es en el F2, el sangrado es a nivel vesical y si se observa en el
F3 el sangrado es a nivel renal. En hemorragias graves a nivel renal o vesical, pueden observarse las
tres fracciones hematúricas. Esta prueba es aplicable sólo a los pacientes que controlen los esfínteres
d.- 2da Orina de la mañana: el paciente al levantarse descarta la 1era orina, deja transcurrir aprox. 2
horas y recoge la nueva orina formada, en un vaso recolector para orina, estéril, y preferiblemente
transparente, lavando y secando previamente los genitales. Aplicación: Relación Calcio/Creatinina,
El recuento minutado es una prueba que se realiza con la 2da orina de la mañana. Se le
recomienda al paciente que orine aprox a las 5 am , descartando esa orina y anotando la hora, debe
volver a acostarse y a las 2 o 3 horas exactas, recoger la orina en el recolector para orina, estéril, y
preferiblemente transparente volviendo a anotar la hora, ya que esta prueba se basa en elementos
contados (células, hematíes, leucocitos, cilindros) por minuto de orina formada.
Si el paciente tiene indicado realizarse alguna depuración se le notifica que debe llegar al
laboratorio en ayunas, debido a que se le debe extraer sangre en esas condiciones y si el laboratorio
no tiene instrumentos para medir el peso y la talla del paciente, este debe ser informado de que debe
traer estos datos al laboratorio. Durante el período de recolección, la ingesta de líquidos y alimentos
sólidos debe ser normal, a menos que el médico indique otra cosa, también se debe tener en cuenta
las interferencias de ciertos alimentos y medicamentos en los diferentes análisis, el Laboratorio
Alteraciones de la micción
Para la determinación de calcio, fósforo, acido úrico (estos elementos tienen la tendencia a
formar cristales) se le agregaba al recipiente aproximadamente de 1 - 2 ml de ácido clorhídrico
concentrado (HCl) con la finalidad de impedir la formación de cristales, pero se corría el riesgo de que
el paciente sufriera quemaduras. En la actualidad, el HCL se agrega en el laboratorio. Al llegar la
muestra de orina la mezclamos bien y en caso de que sea de 12 o 24 horas, procedemos a medir el
volumen y separamos una alícuota (7-10 ml) en un tubo de ensayo, a la cual le agregamos una gota
(50 landas – 0,05 ml) de HCl concentrado, tapamos el tubo de ensayo, preferiblemente con papel
parafilm®; mezclamos por inversión y colocamos en baño de maría entre 56 y 60 ºC durante 10 min.,
todo este proceso se realiza para disolver los cristales que pudieran encontrarse en la muestra. Otra
ventaja de agregar el HCl en el laboratorio es que no todas las pruebas a determinar, pueden llevar
HCL ya que podría haber interferencias analíticas en su determinación, como por ejemplo al
determinar cloruros, oxalato, etc., o al medir el pH urinario. Debemos tener en cuenta, que para la
determinación de los analitos aquí mencionados, no debemos trabajar con orina centrifugada, ya que
vamos a reportar subvalores de los mismos.
Obtención y preparación de la muestra de orina
Para poder efectuar un análisis representativo, es necesario tener en cuenta ciertos aspectos
de importancia:
- La muestra de orina se recogerá siempre en un recipiente limpio y se examinara dentro de
los 45 minutos de emitida.
- La orina se debe agitar antes de extraer la muestra para estudiar el sedimento.
- La orina podrá ser recolectada por micción espontánea, micción espontánea con técnica del
chorro medio, cateterismo vesical estéril o punción percutánea suprapúbica de la vejiga.(20)
Método de centrifugación
Es necesario estandarizar el método para poder obtener resultados comparables.
Con el uso de centrífuga, centrifugamos 8 ml de orina durante unos 5 minutos a una velocidad
de 2500 rpm. Descartamos el sobrenadante en otro tubo de ensayo, en caso de que se necesite para
realizar otras determinaciones como por ejemplo: proteínas por el método de Robert, sales biliares por
el método de Hay etc.etc. etc. y se resuspende bien el sedimento. Con el uso de una pipeta
automática, agregamos 25 λ de este sedimento sobre un portaobjetos, y le colocamos una lámina
cubreobjetos. Otro método alternativo y que facilita la estandarización, es colocar en la apertura del
1.- Volumen:
Es un parámetro que por lo general sólo lo tomamos en cuenta para las muestras de orinas
de 24 horas, la cual en condiciones normales, oscila entre los 1.000 y los 1.500 ml.
Este volumen puede variar, aumentando cuando se ingieren muchos líquidos, si hace frío, por
emociones, entre otras. Puede disminuir cuando se beben pocos líquidos o cuando se pierde mucho
líquido por otras vías: transpiración abundante, diarrea, vómitos, etc. Ciertas enfermedades pueden
aumentar la cantidad de orina: diabetes sacarina, diabetes insípida, incapacidad del riñón para
producir una orina concentrada, etc. Puede disminuir la orina en los momentos en que se retienen
líquidos en el organismo en la nefrosis, las glomerulonefritis agudas, ciertas nefritis crónicas y también
las enfermedades infecciosas cuando no se da al paciente suficiente cantidad de líquidos.(1)
Poliuria: eliminación de mas de 2 litros de orina al día (ejem: diabetes mellitus, diabetes
insípida, glomerulonefritis crónica, píelonefritis y otras enfermedades.
Oliguria: eliminación de 400 ml o menos de orina en 24 horas ejem: nefrosis, glomerulonefritis
aguda
Anuria: eliminación de 100 ml o menos de orina en 24 horas ejem: obstrucción de las vías
urinarias o a una severa glomerulonefritis
2.- Color:
Podemos encontrar orinas incoloras, en pacientes con ingesta hídrica elevada y en pacientes
poliúricos (diabetes insípida, diabetes mellitus)
Va a estar dado por el grado de turbidez de la orina Como actualmente los recolectores para
orina no vienen completamente transparentes, es recomendable que tanto el aspecto como el color
sean observados en el tubo de ensayo (vidrio), para de esta forma eliminar “ruidos visuales”
El aspecto está relacionado directamente con la turbidez de la orina y por lo tanto se debe
relacionar directamente con el sedimento urinario. Ejem: no podemos tener una orina límpida con un
sedimento rico en elementos, o una turbia con un sedimento con escasos elementos. El aspecto
puede ser clasificado como: límpido, ligeramente turbio, turbio, algunos autores reportan
hemorrágico. Un aspecto límpido ,es cuando no presenta turbidez y puede verse a través del tubo de
ensayo sin dificultad, es ligeramente turbio, cuando se dificulta un poco la visibilidad a través del tubo
de ensayo y es turbio cuando es imposible observar lo que se encuentre detrás del tubo de ensayo.
La turbidez está asociada a la presencia de células, bacterias, leucocitos, hematíes,
precipitación de cristales, etc.. Entre los factores que interfieren en la turbidez están el tiempo
transcurrido desde la de recolección de la orina, hasta la llegada al laboratorio (o hasta el
procesamiento de la muestra) y la temperatura (al emitirse la orina puede ser límpida pero al enfriarse,
comienzan a precipitar los cristales tornándola turbia). Si la orina recién emitida es turbia, indica que
existe un proceso patológico.
El aspecto puede verse afectado por:
Turbio Fosfatos, Carbonatos, Uratos, Ac. Úrico,
4.- Olor: Aunque el análisis de orina es una prueba muy antigua, todavía no se ha podido
estandarizar este parámetro. Actualmente muchos laboratorios no lo reportan. Otros optan por
colocarle el termino “suigeneris”, que significa característico, generado por si mismo, propio. Muchos
autores dicen que el olor a frutas (dulzón) se encuentra en orinas con cuerpos cetónicos, no he corrido
con la suerte de comprobarlo, siempre lo he identificado como orina. La presencia de nitritos, si le da
un olor característico a “baño de carretera”.
5.- Densidad, peso específico o gravedad específica :
Es la relación o cociente entre el peso de un volumen de orina y el peso del mismo volumen
de agua destilada medidos a una temperatura constante. Constituye un índice de la concentración del
material disuelto en la orina; sin embargo, no sólo depende del número de partículas, sino también del
peso de éstas en la solución.(11)
La densidad se define como el cociente entre la masa de un cuerpo y el volumen que ocupa.
Así, como en el S.I. la masa se mide en kilogramos (kg) y el volumen en metros cúbicos (m3) la
densidad se medirá en kilogramos por metro cúbico (kg/m3). La mayoría de las sustancias tienen
densidades similares a las del agua por lo que, de usar esta unidad, se estarían usando siempre
números muy grandes. Para evitarlo, se suele emplear otra unidad de medida el gramo por centímetro
cúbico (gr./c.c.), para pasar de una unidad a otra basta con multiplicar o dividir por mil (12)
Agua 1000 1
2.- REFRACTÓMETRO
El medidor de sólidos totales (ST) es un refractómetro específicamente ideado para medir
sólidos totales de una solución. El refractómetro en realidad mide el índice de refracción de la
La densidad (en la tira reactiva) puede verse afectada por sustancias como glucosa o urea en
concentraciones mayores de 1%, ya que dan valores bajos, mientras que cantidades superiores de
proteínas pueden determinar lecturas elevadas. Las orinas muy alcalinas determinan también lecturas
de valor inferior, por eso se sugiere que debe sumarse 0,005 a los valores de densidad con orinas de
pH mayor o igual de 6 ,5.(9)
Características Químicas de la muestra de orina:
Entre las características químicas que rutinariamente realizamos a las muestras de orina de
orina en el laboratorio clínico tenemos: pH, proteínas, glucosa, urobilinógeno, bilirrubina, cuerpos
cetónicos, nitritos, densidad, sangre (hematíes/hemoglobina). En los inicios del laboratorio clínico
todas estas pruebas necesitaban métodos engorrosos y laboriosos para su determinación, pero en la
actualidad contamos con las TIRAS REACTIVAS, las cuales son un recurso muy valioso, por ser
prácticas y de fácil y rápida ejecución.
Las tiras reactivas son cintas plásticas con cojinetes absorbentes impregnados con diferentes
productos químicos que, al tomar contacto con orina, producen reacciones químicas que generan
cambios de color del cojinete. De esta manera, se obtienen resultados cualitativos y semi-cuantitativos
dentro de segundos a minutos mediante simple pero cuidadosa observación.(10)
Un requerimiento crítico es que las reacciones de las tiras sean leídas en el momento prescrito
después de haber sido sumergidas en la muestra, luego deben ser comparadas cuidadosamente con
la carta de colores proporcionada por el fabricante. Con el objeto de obtener resultados exactos y
confiables con las tiras reactivas, deben tomarse ciertas precauciones para ayudar a mantener la
reactividad de los reactivos. Las tiras no deben estar expuestas en medios húmedos, a la luz directa
del sol, al calor ni a sustancias volátiles, debiendo ser almacenadas en su envase original. Dicho
envase no debe ser guardado en el refrigerador no ser expuestos a temperaturas superiores a 30ºC.
Estos envases contienen un desecante, pero aun así las tiras no deben quedar expuestas a la
humedad. Sacar sólo la cantidad de tiras necesarias por vez y luego cerrar herméticamente el envase.
Si los bloques de color de la tira no se parecen a los bloques "negativos" de la carta de colores, si ha
Leucocitos:
Fundamento: Las esterasa de los leucocitos (íntegros o lisados) desdoblan el indol a indoxilo,
que reacciona con una sal de diazonio, oxidándose, formando una coloración violeta. (Otras células
presentes en la orina no contienen esterasas) (14) (9)
Los nitritos se deben analizar en orinas recién emitidas para que su valor tenga algún
significado clínico. (15)
El Proteus reduce los nitratos a nitritos, alcaliniza mas la orina que otra bacteria y produce
peroxidasa.
Proteínas:
Fundamento: El test se basa en el principio de error proteico de los indicadores de pH (14)
(es decir, el indicador cambia de color en presencia de proteínas a un PH constante)
El papel reactivo para la determinación de proteínas contiene una mezcla de tetrabromofenol o
tetrabromofenoftaleína que en presencia de proteínas muestra un viraje de color de amarillo a verde (o
azul).(9) (14) (reacciona de manera especialmente sensible a la albúmina). (3)
Por lo general el indicador cambia del amarillo al azul (o verde) entre pH 3 y pH 4, pero en
presencia de proteína el cambio de color se produce entre el pH 2 y el pH 3. en consecuencia, en
presencia de proteína se produce un "error" en el comportamiento del indicador. El indicador que se
utiliza en el Multistix es el azul de tetrabromofenol 3’, 3’’, 5’, 5’’-tetrabromofenolsulfonftaleína, y el
indicador del Combur-10 es el 3’, 3’’, 5’ 5’’-tetraclorofenol-3, 4, 5, 6-tetrabromofenolsulfonftaleína.
En el área reactiva se agrega un amortiguador ácido para mantener un pH constante de 3, que en
ausencia de proteinuria de un color amarillo. La aparición de color verde o azul indica la presencia de
proteína con el Multistix; en el Combur-10, el color cambia al verde, la intensidad del color es
proporcional a la cantidad de proteína presente. Los resultados por lo general pueden informarse
como negativos, trazas, 1+,2+, 3+ o 4+.
Las dos marcas de tiras reactivas poseen diferentes áreas blanco, de modo que no son clínicamente
intercambiables. Los valores de las diferentes lecturas se muestran en la tabla 2.
Tabla 2. Valores de proteínas en diferentes tiras reactivas
Multistix Combur-10
1+ 30 mg/dL 30 mg/dL
El ácido clorhídrico resultante es más fuerte que el ácido sulfúrico, obteniendo una
mejor precipitación proteica. El reactivo de Robert, se puede comprar listo para usar, pero les
recomiendo que le agreguen sal común, hasta obtener una densidad de aprox. 1060 Kg/M 3.;
por dos razones:
1.- Mientras mas sal, el medio se tornará mas ácido y por lo tanto, aumentará ña
sensibilidad de la prueba.
2.- Al tener un Robert muchos mas denso, hay menor probabilidad que se mezcle con
la orina y se visualizará mejor la zona de contacto.
Procedimiento para la técnica de Robert:
A.- En un tubo de ensayo agregamos aprox 1 – 2 ml de orina y con una pipeta que se
introduce hasta el fondo del tubo, colocamos aprox. 1 ml del reactivo de Robert. Produciendo una
zona de contacto sin que lleguen a mezclarse.
B.- En un tubo de ensayo agregamos aprox. 1-2 ml de reactivo de Robert y con una
pipeta o gotero se deja caer suavemente por las paredes del tubo, aprox. 1 ml de orina. Produciendo
una zona de contacto sin que lleguen a mezclarse.
Glucosa:
Fundamento: La detección de la glucosa se efectúa según el método glucosa-oxidasa-
peroxidasa.(14)
Falsos positivos: Por ser una reacción enzimática, no presenta falsos positivos, es
específica para glucosa.
Fundamentos: (para los dos métodos). Las sustancias reductoras contenidas en la orina en
medio alcalino y en presencia de calor, reaccionan con el sulfato de cobre del reactivo (o pastilla),
reduciéndolo a óxido cuproso
Método de Clinitest:
1.- En un tubo de ensayo agregamos 0,3 ml de orina (aprox. 5 gotas) y 0,6 ml de agua
destilada (aprox. 10 gotas)
Por ambos métodos la positividad se determina por el viraje de color azul (negativo) a verde o
ladrillo (positivo) el color resultante de la reacción lo comparamos con la escala de colores que trae el
instructivo.
Cuerpos cetónicos:
Fundamento: El test se fundamenta en el principio de la prueba de Legal, en el cual los
cuerpos cetónicos reaccionan con el nitroprusiato de sodio y la glicina, produciendo una coloración
morada.
Entre los cuerpos cetónicos tenemos al ácido betahidroxibutírico, la acetona y el ácido
acetoacético (diacético). Normalmente estos no deben estar presentes en la orina. La tira reactiva
reacciona mas intensamente con el ácido acetoacético que con la acetona, no reacciona con el ácido
betahidroxibutírico. Estos cuerpos cetónicos son productos del metabolismo de los ácidos grasos y se
en encuentran en procesos acidósicos, por lo tanto deben cursar con orinas ácidas, cualquier
positividad en orinas alcalinas descarta su presencia, y nos indica que estamos en presencia de un
falso positivo.
Falsos positivos: Las reacciones de color que pueden ser interpretados como “positivos”
pueden ser obtenidos con muestras de orina que contengan Captopril,
MESNA (mercapto-2-etanolsulfonato de sodio) o grandes cantidades de
fenilcetonas o metabolitos L-dopa.3 (17 ) (sustancias que contienen grupos
sulfihidrilos). Las fenilcetonas y los compuestos de ftaleínas crean en la
zona reactiva matices de color rojo, que sin embargo se diferencian
manifiestamente de los colores violetas producidos por cuerpos cetónicos.
Falsos negativos: ácido betahidroxibutírico.
Resultados: reportamos los resultados en cruces, aunque también podemos reportar si están
presentes o no, (lo importante es que su presencia indica un estado cetoacidósico).
Existen diversos métodos para confirmar la presencia de cuerpos cetónicos. Método de Imbert
y Bonnamour, de Rothera, de Gunning, de Deniges etc. Nosotros vamos a utilizar el método de
Gerhardt ya que es muy sencillo de realizar y el reactivo es fácil de conseguir:
Método de Gerhardt:
Fundamento: El ácido acetoacético en presencia del cloruro férrico al 10% da lugar a un color
carmelita oscuro.
Materiales y Reactivos: Tubos de ensayo, Cloruro férrico al 10%, pipeta o gotero, mechero o
encendedor.
Procedimiento:
1.-En 2 tubos de ensayo, agregamos aprox. 5ml de orina a cada uno.
2.- Calentamos uno de estos tubos hasta hervir.
3.- A cada tubo se le agrega entre 5 – 10 gotas de cloruro férrico (gota a gota).
Resultados: En los casos positivos, aparece en la orina NO calentada, una coloración
carmelita oscura. Si esta aparece en ambos tubos, es debido a la presencia de salicilatos, antipirina y
sulfas. (18)
Método de Schelesinger:
Fundamento: Esta prueba se basa en la fluorescencia verde que produce la urobilina con el
acetato de zinc en solución alcohólica.
Procedimiento:
1.- En un tubo de ensayo, agregamos aprox. 3 ml de orina
2.- Añadimos 2 o 3 gotas de lugol y aprox. 3ml de la solución alcohólica de acetato de Zn.
3.- Tapamos el tubo preferiblemente con papel Parafilm®, agitamos y filtramos o
centrifugamos.
4.- El filtrado (o el tubo centrifugado) lo colocamos a trasluz y preferiblemente en fondo negro.
Si la muestra contiene urobilina, el filtrado mostrará fluorescencia verde
El lugol se agrega para transformar el urobilinógeno presente en urobilina.
Bilirrubina:
Fundamento: El test se basa en el acoplamiento de la bilirrubina con una sal diazonio en
medio ácido para formar una coloración que va a depender de la sal diazonio utilizada. El Multistix
contiene la sal 2, 4-dicloro-anilina diazonio y el color varía del ocre a diferentes tonos de canela
(tostado) o púrpura. El Combur-10 contiene 2,6-dicloro-benceno-diazonio-tetrafluorborato y el color
cambia del rosado al rojo-violeta según la concentración de bilirrubina. (11, 14)
Falsos negativos: Vitamina C (no en el combur test 10®)). Muestras de orina con mucho
tiempo de exposición a la luz. (La exposición a la luz puede degradar esta
sustancia y hacerla indetectable.10)
Resultados: Los resultados con ambos tipos de tiras pueden informarse como 1+, 2+, 3+ o
cantidad pequeña (débil), moderada o grande (fuerte). (11)
Falsos positivos: esta prueba presenta muchos falsos positivos, entre los cuales tenemos:
coloraciones intensas, medicamentos etc..
Sales biliares:
Aunque las sales biliares no se determinan por la tira reactiva y siempre las relacionamos con
los pigmentos biliares, es necesario explicar su determinación. El método que vamos a aplicar, es el
método de Hay, el cual se fundamenta en la propiedad que tienen las sales biliares de disminuir la
tensión superficial de la orina. No es un método específico y las reacciones negativas hay que
aceptarlas con reserva, ya que pueden producirse en casos de ictericia evidente. La urobilina puede
producir falsos positivos (18)
Procedimiento:
1.- En un tubo de ensayo agregamos aprox. 7 ml de orina centrifugada.
2.- Se le agrega una pequeña cantidad de azufre. Se le da un golpecito muy ligero al tubo.
3. Procedemos a observar, en fondo oscuro.
4.- si el azufre desciende la prueba es positiva.
Falsos positivos: presencia de otras peroxidasas, como por ejemplo las producidas por
enterococos, tricomonas etc., hipoclorito y otros agentes oxidantes. Sangre
proveniente de la menstruación.
Falsos negativos: Vitamina C (no en el combur test 10®), densidad elevada, no mezclar bien
la muestra , ya que los hematíes se depositan en el fondo del recolector.
Materiales y reactivos: Tubo de ensayo, centrífuga, ácido acético al 20%, cromógeno, agua
oxigenada.
Procedimiento:
2. Descartamos el sobrenadante.
4.- Colocamos 3 gotas del cromógeno. Mezclamos. (se forma un complejo hemoglobina-
cromógeno)
5.- Añadimos 3 gotas de agua oxigenada. Mezclamos y procedemos a la lectura. (en este paso, la
hemoglobina (peroxidasa) actúa sobre el agua oxigenada oxidando al cromógeno y produciendo una
coloración)
Este método tiene la ventaja, de no ser muy sensible y por lo tanto la peroxidasa bacteriana no
interfiere en la prueba, produciendo falsos positivos.
Cuando en un análisis, la tira reactiva marca sangre positiva y el sedimento muestra hematíes
escasos o ausencia de éstos, debemos diferenciar si estamos en presencia de hemoglobina o
mioglobina, actualmente existen en el mercado reactivos específicos para su determinación, con la
limitante de ser costosos. Pero nosotros podemos realizar una prueba que utiliza sulfato de amonio.
La cual se fundamenta en que la diferencia de solubilidad de la hemoglobina y la mioglobina (la
hemoglobina por ser una molécula más pesada que la mioglobina, precipita en el tubo de ensayo
unido al exceso de Sulfato de amonio presente en el tubo).
Materiales y reactivos: Tubo de ensayo, Sulfato de amonio, centrífuga.
Técnica del Sulfato de Amonio
1.- Saturar la orina al 80% con sulfato de amonio en un tubo de ensayo (2.8 g + 5 mL de orina).
2.-Mezclar y centrifugar a 3 000 rpm. X 5 min. para separar la hemoglobina que precipita, de la
mioglobina que queda en solución.
3.- Proceder a la lectura de la prueba. (19)
SEDIMENTO URINARIO:
Para la preparación del sedimento urinario, el Asistente de laboratorio debe seguir ciertas
normas y procedimientos que le permitan estandarizar el proceso, deben tener presente, que el logro
de un buen análisis depende en gran parte de ustedes; por lo tanto, la comunicación sincera y
oportuna debe prevalecer siempre entre Bioanalista y Asistente. Obligatoriamente hay que formar un
buen equipo. (Esto no es únicamente con la preparación del sedimento, es con todo lo relacionado al
laboratorio de Bioanálisis). El Asistente y el Bioanalista deben ponerse de acuerdo en qué y cómo van
a realizar las cosas.
Nota: No siempre se descarta el sobrenadante, se puede utilizar para la realización de otras pruebas.
El hecho de que la observación microscópica sea exclusiva del Bioanalista, no es motivo para
que el Asistente desconozca, ignore o se desentienda de lo que se puede encontrar en un análisis
microscópico de orina. Un Asistente de laboratorio debe ser completo. Debe tener destreza en la
práctica y muy buena base teórica, porque conociendo la teoría se minimizan los errores en la
práctica. En lo particular, estoy seguro lo beneficioso que le resulta al Bioanalista contar con un
Asistente que posea estos atributos. ¿Quién no se siente mejor a medida que va adquiriendo
conocimientos? ¡No debemos estancarnos!.. A continuación encontraran una descripción lo más
básica posible del sedimento urinario.
En el sedimento urinario podemos encontrar: células epiteliales, leucocitos, hematíes,
bacterias, fibras mucoides (mucina), cilindros, cristales, hongos, parásitos.
Células epiteliales:
Las células epiteliales planas (también denominadas bajas o escamosas) nos indican si hubo
una buena recolección de orina. Si están en cantidades abundantes debemos sugerirle al paciente de
la necesidad de repetir la recolección y la forma correcta de lograrla.
Cilindros: Son estructuras cilíndricas que representan moldes del lumen tubular renal, y son
los únicos elementos del sedimento urinario que provienen exclusivamente del riñón.Están
constituidos por una matriz de proteína tubular (tam-harsalff). Esta proteína no se detecta ni por la tira
reactiva, ni por el método de Robert.
Cilindros hialinos: Pueden aparecer en pequeñas cantidades en orinas normales. (No
indican patología alguna y pueden aparecer en el ejercicio intenso)
Cilindros eritrocitarios (cilindros hemáticos): Su presencia da el diagnóstico de
Glomerulonefritis.
Cilindros leucocitarios: Se observan en infección renal (pielonefritis) y en procesos
inflamatorios de causa no infecciosa.
Cilindros de células epiteliales (cilindros epiteliales): indican enfermedad renal activa y de
rápida evolución.
Bacterias y Hongos:
Las bacterias tienen importancia en el sedimento urinario, solo si se ha realizado una correcta
recolección y se ha procesado en el tiempo correcto.
Parásitos :
En la orina podemos encontrar elementos parasitarios (huevos, larvas, adultos, trofozoitos)
debido a la contaminación fecal (huevos de áscaris, trichuris etc.), a la contaminación del ambiente
(ácaros), y a la presencia de estos en uretra y vías urinarias (Trichomonas, Schistosoma)
Otras células:
También se pueden encontrar espermatozoides, células tumorales, histiocitos.
En estas condiciones la orina está lista para la determinación de Calcio, Magnesio y ácido
úrico. Pero para el Fósforo hay que preparar además una dilución 1/10 con agua destilada.
Nota: Se preparan diluciones 1/10 para aquellos analitos que normalmente se encuentran en
grandes cantidades en la orina.
Una tinción de Gram es un método para teñir microorganismos (bacterias) utilizando una serie
especial de colorantes. En la práctica esta coloración ha permitido la separación de los
microorganismos en dos grandes grupos de acuerdo con su comportamiento respecto a los
colorantes que en ella intervienen , designándose Gram positivos a los que retienen la Violeta de
Genciana (color morado) y como Gram negativos a los que se colorean con la Safranina o colorante
de contraste (color rosado).
Este examen se puede realizar para tratar de diagnosticar una infección bacteriana del tracto
urinario; y dependiendo si es Gram positivo o negativo, el médico administrará el antibiótico adecuado
Para este examen, se centrifuga la muestra de orina, se descarta el sobrenadante y del
sedimento se realiza un frotis , el cual se colorea y luego se examina bajo el microscopio. Este método
se puede aplicar a casi cualquier muestra clínica y es una de las técnicas más comúnmente utilizadas
para el diagnóstico rápido de infecciones bacterianas.
Materiales requerido:
A.- Láminas portaobjetos.
B.- Kit de coloración de Gram.
C.- Suero, plasma Solución albuminosa diluida (opcional)
Técnica:
1.- Mezclamos bien el recolector con la orina y en un tubo de ensayo agregamos aprox. 8
ml de la misma, centrifugamos y descartamos el sobrenadante.
2.- Colocamos 25 λ del sedimento en el centro de una lámina portaobjeto, limpia y
desgrasada y la mezclamos (no es obligatorio) con 25 λ de plasma, suero o solución
albuminosa (estériles).
3.- Realizamos un frotis circular (como para realizar un frotis de secreción uretral o una
gota gruesa). Esperamos que se seque o calentamos ligeramente para que se fije la
preparación..
3.- Cubrimos la preparación con Violeta de genciana, durante 1min.
4.- Lavamos con agua.
5.- Agregamos el Lugol x 1min.
6.- Lavamos con agua.
7.- Decoloramos con el Alcohol-Acetona (No debemos estipular un tiempo de
decoloración, sino mas bien observar hasta que la preparación pierda la mayor cantidad
de colorante posible).
8.- Lavamos con agua.
9.- Agregamos la Safranina muy diluida x 30min.
10.- Esperamos que se seque y lista para observar.
BK de sedimento urinario:
Un BK en orina se realiza, en caso de que el personal médico sospeche de TBC renal (miliar),
Podemos realizar esta prueba, por medio de dos tipos de coloraciones:
A.- Coloración en caliente: Ziehl-Nielsen.
B.- Coloración en frío: Kinyoun.
En ambas coloraciones, el bacilo tuberculoso por ser ácido alcohol resistente se colorea de
rosados.
Fuscina básica 1 Gr
Ácido Fénico (fenol) 5 Gr
Alcohol absoluto al 95% 10 ml
Agua destilada csp.100 ml
HCl 3 ml
Alcohol absoluto al 95% 97 ml
Fuscina básica 4 Gr
Ácido Fénico (fenol) 8 Gr
Alcohol absoluto al 95% 20 ml
Agua destilada csp.100 ml
HCl 3 ml
Alcohol absoluto al 95% 97 ml
El Asistente de Laboratorio debe buscar siempre la forma de minimizar los errores; no debe
descansar en esta tarea, por lo tanto les sugiero que memoricen bien, los posibles falsos positivos y
negativos de las diferentes técnicas. Les recomiendo que lean y “relean” los factores más comunes que
pueden afectar el análisis de orina y las acciones correctivas para los resultados inaceptables, que a
continuación les anexo, los cuales deben captar e internalizar. Recuerden que todo aprendizaje
conlleva a un cambio de conducta.
CRITERIOS Y PROCEDIMIENTOS DE CONTROL QUE DEFINEN RESULTADOS
INACEPTABLES
El análisis de la muestra de orina se ve afectado por algunos factores como:
Limpieza del recipiente de recolección de la muestra (afecta la calidad de la muestra en
cuanto a contaminación).
Tiempo transcurrido entre la recolección de la muestra y su análisis (influye en el cambio de
las estructuras y cambio en los componentes y metabolitos).
Momento de obtención de la muestra (dilución o concentración de la orina).
Este manual esta sujeto a errores, críticas y sugerencias. Todas las observaciones o
recomendaciones que sirvan para reestructurar y mejorar el contenido del mismo, pueden hacerse
llegar por la dirección electrónica:
pedringohb@hotmail.com
pedringohb@movistar.com.ve
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16.- INSTRUCTIVO DE TABLETAS REACTIVAS PARA LA DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE AZÚCARES
REDUCTORES EN ORINA. Clinitest.Laboratorios Bayer.
17.- TIRAS REACTIVAS PARA GLUCOSA, BILIRRUBINA, CETONA, DENSIDAD, SANGRE, PH, PROTEÍNAS,
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18.- LABORATORIO CLÍNICO. TÉCNICAS E INTERPRETACIONES. Anido Fraguio. Cultural. S.A. 1era ed. 1943 1570 pp.