Protocolo para la determinación de especificidad en el método de valoración

para la materia prima “A”.

Método analítico

1.Pesar con exactitud 100 mg de “A”.

2.Colocar la muestra en un matraz volumétrico de 100 mL.
3.Adicionar 20 mL de NaOH 0.05 M.
4.Agitar hasta disolución total.
5.Llevar al aforo con NaOH 0.05 M (solución 1).
6.Tomar una alícuota de 10 mL de la solución 1.
7.Vaciar la alícuota de la solución 1 en un matraz volumétrico de 50 mL.
8.Llevar al aforo con agua destilada (solución 2).
9.Colocar en una celda de cuarzo la cantidad necesaria de solución 2.
10.Leer absorbancia a 228 nm.

Fundamento de la técnica

Sustancias que tengan dobles enlaces en su estructura, lo que permite que la

radiación ultravioleta excite los electrones pi de la molécula llevándolos a un
estado de menor a uno de mayor energía.

Fundamento del método

Espectrofotometría ultravioleta.

Materiales

Dos matraces volumétricos de 100 mL

Seis matraces volumétricos de 25 mL
Seis pipetas volumétricas de 10 mL
Dos celdas de cuarzo

Equipo e instrumentos

Balanza analítica OHAUS Pioneer Analytical.

Espectrofotómetro ultravioleta Mettler Toledo.
Reactivos
Materia prima “A”
NaOH 0.05 M
Sustancia relacionada para “A” (sustancia “B”)

Metodología para la determinación de reproducibilidad

1.Pesar 20 mg de sustancia A
2.Colocar en un matraz volumétrico de 100 mL
3.Disolver con NaOH 0.05 M
4.Aforar con NaOH 0.05 M (solución 5).
5.Tomar 6 alícuotas de 10 mL con pipetas volumétricas de 10 mL de la solución 5.
6.Colocar cada alícuota en 1 matraz volumétrico de 25mL diferente
7.Aforar los 6 matraces volumétricos de 25 mL con NaOH 0.05 M
8.Leer absorbancia 238 nm de los 6 matraces aforados.
*Nota: Repetir todos los pasos en el segundo laboratorio bajo las mismas
condiciones.

Resultados de Reproducibilidad de la sustancia A, por Espectrofotometría UV

Tratamiento de los resultados

Modelo estadístico para establecer los resultados analíticos obtenidos del método
analítico que dependen de la variación del laboratorio:
yij=+Li+ej(i)
Dónde:
yij= j-ésima observación obtenida en el i-esimo laboratorio.
= Media poblacional de las observaciones obtenidas aplicando el método
analítico.
Li= Efecto del i-esimo laboratorio en el resultado analítico
La hipótesis nula que se desea probar para demostrar que el Método Analítico
presenta reproducibilidad, si se realiza el método en dos laboratorios (L1 y L2) es:
H0: L1=L2
H1: L1≠L2
Para el análisis de datos se construye la tabla de ANDEVA para el modelo de
efectos fijos:
 Fte. De Grados de Suma de Media de F F tablas
variación libertad cuadrados cuadrados calculada
(g.L)
Laboratorio (i-1) SCL MCl=SCL/g.LL MCL/MCe (F(/2g.l.L.g.le)
- F(1-
/2g.l.L.g.le))
Error (j-1)(i) SCe MCe=SCe/g.Le

i= Número de laboratorios.
j= Número de réplicas en cada laboratorio se fija comúnmente con un valor de
0.05.
SCL= (∑𝑛𝑖=1 𝑦 2 𝑖/𝑗)(𝑦 2 …/𝑖𝑗)
Donde:
∑𝑛𝑖=1 𝑦 2 𝑗 = Sumatoria elevada al cuadrado de los datos obtenidos para cada
laboratorio sin importar día o réplica.
Y2…= Cuadrado de la sumatoria de todos los valores obtenidos.
∑𝑛𝑖=1 𝑦𝑖 2
SCe= ∑𝑛𝑖=1 ∑𝑛𝑗=1 𝑦𝑖𝑗
2
− ⁄𝑗

Donde:
∑𝑛𝑖=1 ∑𝑛𝑗=1 𝑦𝑖𝑗
2
= Sumatoria del cuadrado del valor de cada resultado analítico.

Demostración de Reproducibilidad del método analítico realizado en 2 laboratorios

por sextuplicado.

LABORATORIO RESULTADOS (absorbancias) CV(%)

1 1) 4) -
2) 5)
3) 6)

2 1) 4) -
2) 5)
3) 6)
Criterio de aceptación

Si el valor de Fcalculada para el factor de laboratorio se encuentra comprendido en la

región de no rechazo al 95 % de confianza, se puede concluir que el Método
Analítico es reproducible entre el laboratorio 1 y el laboratorio 2.