UNIVERSIDAD NACIONAL JORGE BASADRE GROHMANN

FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AMBIENTAL

DOCENTE : CESAR CÁCEDA QUIROZ

CURSO : MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

TEMA : ORGANISMOS UTILIZADOS EN LA BIORREMEDIACION ,

FITORREMEDIACION , LA RELACION DEL CIANURO Y LOS
MICROORGANISMOS

AÑO : 3ERO – 5 TO CICLO

ALUMNO : ELITAMAR QUISPE LAURENTE

CODIGO : 2016-178006

TACNA – PERU

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ORGANISMOS UTILIZADOS EN LA BIORREMEDIACIÓN

En las últimas décadas, entre las técnicas empleadas para contrarrestar los efectos
de los contaminantes, se comenzó a utilizar una práctica llamada biorremediación.
El término biorremediación fue acuñado a principios de la década de los ‘80, y
proviene del concepto de remediación, que hace referencia a la aplicación de
estrategias físico-químicas para evitar el daño y la contaminación en suelos. Los
científicos se dieron cuenta que era posible aplicar estrategias de remediación que
fuesen biológicas, basadas esencialmente en la observación de la capacidad de los
microorganismos de degradar en forma natural ciertos compuestos contaminantes.
Entonces, la biorremediación surge como una rama de la biotecnología que busca
resolver los problemas de contaminación mediante el uso de seres vivos
(microorganismos y plantas) capaces de degradar compuestos que provocan
desequilibrio en el medio ambiente, ya sea suelo, sedimento, fango o mar.

1.1. TIPOS DE BIORREMEDIACIÓN

En los procesos de biorremediación generalmente se emplean mezclas de
ciertos microorganismos o plantas capaces de degradar o acumular
sustancias contaminantes tales como metales pesados y compuestos
orgánicos derivados de petróleo o sintéticos. Básicamente, los procesos de
biorremediación pueden ser de tres tipos:

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1.1.1. DEGRADACIÓN ENZIMÁTICA

Este tipo de degradación consiste en el empleo de enzimas en el sitio

contaminado con el fin de degradar las sustancias nocivas. Estas enzimas
se obtienen en cantidades industriales por bacterias que las producen
naturalmente, o por bacterias modificadas genéticamente que son
comercializadas por las empresas biotecnológicas. Por ejemplo, existe un
amplio número de industrias de procesamiento de alimentos que
producen residuos que necesariamente deben ser posteriormente
tratados. En estos casos, se aplican grupos de enzimas que hidrolizar
(rompen) polímeros complejos para luego terminar de degradarlos con el
uso de microorganismos .Un ejemplo lo constituyen las enzimas lipasas
(que degradan lípidos) que se usan junto a cultivos bacterianos para
eliminar los depósitos de grasa procedentes de las paredes de las
tuberías que transportan los efluentes. Otras enzimas que rompen
polímeros utilizados de forma similar son las celulosas, proteinasas y
amilasas, que degradan celulosa, proteínas y almidón, respectivamente.
Además de hidrolizar estos polímeros, existen enzimas capaces de
degradar compuestos altamente tóxicos. Estas enzimas son utilizadas en
tratamientos en donde los microorganismos no pueden desarrollarse
debido a la alta toxicidad de los contaminantes. Por ejemplo, se emplea
la enzima peroxidasa para iniciar la degradación de fenoles y aminas
aromáticas presentes en aguas residuales de muchas industrias.

1.1.2. REMEDIACIÓN MICROBIANA

En este tipo de remediación se usan microorganismos directamente en el
foco de la contaminación. los microorganismos utilizados en
biorremediación pueden ser los ya existentes (autóctonos) en el sitio
contaminado o pueden provenir de otros ecosistemas, en cuyo caso
deben ser agregados o inoculados.

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La gran diversidad de microorganismos existente ofrece muchos recursos

para limpiar el medio ambiente y, en la actualidad, esta área está siendo
objeto de intensa investigación. Existen, por ejemplo, bacterias y hongos
que pueden degradar con relativa facilidad petróleo y sus derivados,
benceno, tolueno, acetona, pesticidas, herbicidas, éteres, alcoholes
simples, entre otros. Los metales pesados como uranio, cadmio y
mercurio no son biodegradables, pero las bacterias pueden concentrarlos
de tal manera de aislarlos para que sean eliminados más fácilmente. Las
actividades microbianas en el proceso de biorremediación se pueden
resumir en el siguiente esquema:

1.1.3. REMEDIACIÓN CON PLANTAS (FITORREMEDIACIÓN)

La fitorremediación es el uso de plantas para limpiar ambientes
contaminados. Aunque se encuentra en desarrollo, constituye una
estrategia muy interesante, debido a la capacidad que tienen algunas
especies vegetales de absorber, acumular y/o tolerar altas
concentraciones de contaminantes como metales pesados, compuestos
orgánicos y radioactivos. La fitorremediación ofrece algunas ventajas y
desventajas frente a los otros tipos de biorremediación:

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.Las plantas pueden ser utilizadas como bombas extractoras de bajo costo
para depurar suelos y aguas contaminadas.
.Algunos procesos degradativos ocurren en forma más rápida con plantas
que con microorganismos.
.Es un método apropiado para descontaminar superficies grandes o para
finalizar la descontaminación de áreas restringidas en plazos largos.

Las plantas pueden incorporar las sustancias contaminantes mediante

distintos procesos que se representan en la siguiente ilustración y se explican
en la tabla que continúa:

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1.1.4. USO DE ORGANISMOS MODIFICADOS GENÉTICAMENTE EN

BIORREMEDIACIÓN

En los últimos años, los avances en ingeniería genética han permitido el

desarrollo de organismos transgénicos. Y la biorremediación hace uso de
esta nueva tecnología para resolver varios problemas de contaminación.
El futuro promete aún más. Muchos grupos de investigación están
desarrollando en el laboratorio, plantas y microorganismos genéticamente
modificados para ser mejores agentes de biorremediación, es decir que
degraden mejor o más eficientemente a los agentes contaminantes. Por
ejemplo, se puede utilizar material genético de bacterias resistentes a
metales para insertarlo en el genoma de una planta que, entonces,
adquiriría esta nueva característica. Un grupo de investigación utilizó un
gen llamado merA, que codifica para la enzima reductasa del ion
mercúrico, altamente tóxico, que cataliza su reducción hasta la forma
volátil y poco tóxica de mercurio elemental, gaseoso en condiciones de
temperatura no muy elevadas. Estos investigadores, consiguieron la
transferencia del gen bacteriano merA a cultivos de Liriodendro tulipifera
(álamo amarillo). El gen se expresó adecuadamente en ese material
vegetal, de modo que las plántulas regeneradas germinaron y crecieron
vigorosamente en los medios de cultivo, que contenían niveles de iones
mercurio que son normalmente tóxicos, siendo capaces de captarlo en su
forma iónica y de reducirlo en el interior de la planta, tras lo cual era
liberado en la forma gaseosa no tóxica. Esta investigación ha abierto el
camino para que en el futuro sea posible realizar plantaciones arbóreas
transgénicas que, mediante este proceso de fitovolatilización u otros
parecidos, sean capaces de descontaminar terrenos con altos niveles de
contaminantes. Se están perfeccionando nuevos métodos de
biotecnología para el tratamiento del agua, que eliminarán los
compuestos que contengan fósforo, nitrógeno y azufre.
La biorremediación mediante bacterias ofrece grandes posibilidades de
limpiar y descontaminar sistemas complejos y gracias a sus ventajas
económicas y ambientales será una de las tecnologías más desarrolladas
durante este siglo. Se están utilizando cepas especializadas de
microorganismos de alta actividad para tratar agentes contaminantes en
diferentes sectores, como las industrias que utilizan catalizadores, las
textiles, las curtiembres, el procesamiento de celulosa y almidón, la
galvanoplastia, la minería, el desengrasado y recubrimiento de superficies
y la impresión.

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LA RELACION DE LOS MICROORGANISMOS

Y EL CIANURO

Se han evaluado estrategias para minimizar los impactos generados por el cianuro,
el método más usado es mediante procesos físicos de exclusión, adsorción con
carbón activado, tratamiento químico y recuperación de cianuro, o por el
mantenimiento de los niveles disociables de ácido débil (WAD) de cianuro por
debajo de 50 mg L -1 (Gurbuz et al., 2004, Novak et al., 2013). Existen sitios en todo
el mundo como es el caso de Dakota del sur en Estados Unidos, Columbia Británica
en Canadá que están contaminados con cianuro como resultado de la actividad
industrial del pasado y derrames accidentales (Akcil y Mudder, 2003; Huertas et al.,
2010; Novak et al., 2013).

Los tratamientos biológicos son alternativas factibles puesto que un amplio rango
de microorganismos puede metabolizar el cianuro. La bioadsorción es
generalmente usada para el tratamiento de metales pesados en desechos, y podría
ser empleada para el tratamiento de efluentes que contienen iones metálicos
complejos (Aksu et al., 1999). Un ejemplo de adsorción es la pared celular del hongo
Rhizopus arrhizus, posee esencialmente varios compuestos orgánicos que incluyen
quitina, polisacáridos ácidos, lípidos, aminoácidos y otros compuestos celulares que
podrían generar una superficie para la adsorción complejos iónicos de cianuro y
hierro (Aksu et al., 1999).

1. DEGRADACION BIOLOGICA
Estas metodologías se han empleado con éxito en el tratamiento de
diferentes residuos líquidos industriales (Kuyucak y Akcil, 2013), las bacterias
son las principales responsables de la degradación biológica (Akcil et al.,

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2003), exhiben una amplia gama de funciones metabólicas y son capaces de

degradar estructuras químicas como el cianuro (Botz, 2001).

La degradación biológica o biodegradación de cianuro se da por la capacidad

de ciertos grupos de microorganismos (en su mayoría bacterias) para utilizar
compuestos cianurados como fuente de carbono y nitrógeno (Oudjehani et
al., 2002; Trapp et al., 2003), este tipo de estrategia biológica se puede
aplicar in situ, en medios aeróbicos y anaeróbicos, crecimientos en
suspensión de forma activa y pasiva. Las especies microbianas pueden
crecer en múltiples entornos que permitan la captación, el tratamiento, la
adsorción y precipitación de cianuro, sus compuestos y metales (Akcil, 2002;
Akcil et al., 2003; Oudjehani et al., 2002; Trapp et al., 2003; Kuyucak y Akcil,
2013). Se sabe que la toxicidad del cianuro en altas concentraciones puede
limitar la capacidad de los microorganismos para utilizarlo como sustrato para
su crecimiento (Patil y Paknikar, 1999. Los microorganismos involucrados en
la degradación de efluentes de minería, poseen varios sistemas enzimáticos
específicos que les permite adaptarse en ambientes con alta concentración
de cianuro. Entre los microorganismos más conocidos están los hongos del
género Fusarium, Hasenula, y las bacterias de los géneros E.coli,
Pseudomonas fluorescens, Citrobacter, Bacillus subtilis, quienes asimilan el
cianuro usándolo como fuente de nitrógeno y/o carbono, con un 18
Microorganismos potenciales degradadores de cianuro en residuos de
minería de oro intermediario como es el NH (Akcil y Mudder, 2003; Botz et
al., 2005; Novak et al., 2013; Kebeish et al., 2015).

Algunos microorganismos tienen la capacidad de asimilar el mineral y

eliminar el cianuro o llevarlo a amoniaco, fumarato y otros compuestos menos
peligrosos ambientalmente, como es el caso de Ferrobacillus ferroxidans,
Acidithiobacillus ferrooxidans, Leptospirillum ferrooxidans y Acidithiobacillus
thiooxidans; Pseudomonas putida y Pseudomonas fluorescens
Pseudomonas aeruginosa también lo elimina con niveles adecuados de
aireación entre 100 y 120 rpm Pseudomonas paucimobilis emplea

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moderadamente fuertes complejos metálicos de cianuro como el [K, Ni (CN)]

para transformar este químico en sustancias menos contaminantes (Barclay
et al., 1998).

Algunos hongos reportados en la literatura como degradadores de cianuro

son; Gloeocerocospora sorghi (Fry y Munch, 1975; Wang et al., 1992),
Fusarium lateritum y Stemphylium loti (Fry y Millar, 1972). En el caso de
Fusarium solani ha sido demostrada su habilidad de utilizar el cianuro como
nutriente para su crecimiento. Para Fusarium oxysporum se ha reportado
tolerancia al KCN transformándolo en formamida (Barclay et al., 1998). En el
caso de Fusarium lateritium este presenta tolerancia al cianuro por la
inducción de la enzima cianuro hidratasa (Barclay et al., 1998). Otras
especies de hongos como es Trichoderma spp, también ha sido reportada,
encontrando que una variedad de cepas de Trichoderma harzianum actúan
en la descomposición del cianuro (Ezzi y Lynch, 2005). Existen estudios
relacionados a la desintoxicación de cianuro por algas como es el caso de
Arthrospira maxima, Chlorella sp. y Scenedesmus obliquus en aguas
contaminadas obteniendo un porcentaje entre el 86 al 90% de remoción del
cianuro (Gurbuz, 2004).

2. AISLAMIENTO Y LA EVALUACIÓN DE MICROORGANISMOS

BIODEGRADADORES DE CIANURO

La ruta de asimilación de cianuro en P. pseudoalcaligenes CECT5344

transcurre a través de un nitrilo formado por la reacción química del cianuro
con el oxalacetato, siendo este último acumulado como consecuencia de la
acción conjunta de una malato:quinona oxidoreductasa (MQO) y la oxidasa
terminal resistente a cianuro (CioAB) (Luque-Almagro et al., 2011b). Los
nitrilos pueden ser convertidos en amonio por la acción de una nitrilasa o un
sistema nitrilo hidratasa/amidasa. Con el objetivo de elucidar la ruta de
asimilación de cianuro en P. pseudoalcalígenes CECT5344, se ha analizado

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el proteoma de este microorganismo en condiciones cianotróficas frente a

nitrato como fuente de nitrógeno como control.
En este estudio se identificaron proteínas relacionadas con la ruta de
asimilación de cianuro en la estirpe CECT5344, que aparecían inducidas por
cianuro, como NitB y NitG, cuyos genes se encuentran localizados en la
agrupación génica nit1C. Además de NitB y NitG, de función desconocida, la
agrupación génica nit1C codifica un regulador transcripcional del tipo Fis
dependiente de σ54 (NitA), una nitrilasa (NitC), una proteína que pertenece
a la superfamilia S-adenosilmetionina (NitD), un miembro de la superfamilia
N-aciltransferasa (NitE), un polipéptido de la familia AIRS/GARS (NitF) y una
oxidorreductasa dependiente de NADH (NitH). Un análisis transcripcional
mediante RT-PCR determinó que los genes nitBCDEFGH se cotranscriben,
mientras que el gen regulador nitA se transcribe de forma divergente.
Además, resultados obtenidos por RT-PCR confirman que la expresión de
los genes nitBCDEFGH está inducida por cianuro y reprimida por amonio. La
relación entre el cianuro y el grupo de genes nit1C queda patente por el
fenotipo de los mutantes deficientes nitA, nitB y nitC, incapaces de usar
complejos cianuro-metálicos o 2-hidroxinitrilos como única fuente de
nitrógeno. Todos estos datos indican que la nitrilasa NitC, junto con la
proteína NitB, utilizan de forma específica determinados nitrilos alifáticos
como sustrato, entre los que se encuentran el formado durante la asimilación
de cianuro (Estepa et al., 2012). Además, entre las proteínas inducidas por
cianuro se identificaron una dihidropicolinato sintasa (DapA), una fosfoserina
transaminasa (SerC) y una proteína de función desconocida (Orf1), las tres
codificadas por genes del operón cio, una cianasa (CynS), la proteína S6 de
la subunidad ribosomal 30S (RpsF), una superóxido dismutasa (SodB), la
ferritina (Dps), una oxidorreductasa (Fpr) y un factor de elongación P (EF-P).
Una vez identificadas, estas proteínas se han analizado funcionalmente y se
han localizado en el genoma de P. pseudoalcaligenes CECT5344 los genes
correspondientes, así como los genes adyacentes. La inducción de estas
proteínas en condiciones cianotróficas sugiere que el metabolismo del

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cianuro incluye, además de la resistencia y asimilación de este tóxico, otros

procesos biológicos relacionados con el metabolismo del cianato y de
algunos aminoácidos, el estrés oxidativo y la homeostasis de hierro, entre
otros. Por otra parte, el conocimiento en profundidad y la interpretación de la
secuencia génica de P. pseudoalcaligenes CECT5344, así como el análisis
comparativo frente a organismos no cianotrofos ha permitido entender
algunos de los mecanismos implicados en la resistencia y asimilación de
cianuro, lo que permitiría conducir a la posterior mejora del proceso de
biodegradación de cianuro. Además, el estudio del genoma de la estirpe
CECT5344 permitirá explorar la capacidad de este organismo para ser
utilizado en procesos de biorremediación de residuos cianurados en los que
se encuentran metales y otros tóxicos (Luque-Almagro et al., 2013; Wibberg
et al., 2014). En este trabajo se muestran y discuten los resultados de la
secuenciación del genoma de P. pseudoalcaligenes, así como el estudio del
análisis filogenético y evolutivo de la cepa, estableciéndose de esta manera
relaciones con otras especies en base a los genomas secuenciados de las
mismas, entre las que destaca P. mendocina ymp relacionada con P.
pseudoalcaligenes CECT5344. El estudio de las características del genoma
de P. pseudoalcaligenes CECT5344 ha sido completado con un análisis
comparativo frente a los genomas de otras especies de Pseudomonas,
encontrándose así semejanzas y diferencias en cuanto a la distribución
génica funcional. Por último, se muestra un análisis del genoma de P.
pseudoalcaligenes CECT5344 en relación con los genes implicados
probablemente en los procesos de asimilación de cianuro y residuos
cianurados, tales como los codificantes de nitrilasas y aquellos implicados en
la resistencia a cianuro como los constituyentes del operón cio que codifican
la oxidasa terminal insensible a cianuro. Finalmente, se discute la presencia
de genes implicados posiblemente en otros procesos con una alto potencial
biotecnológico, tales como la producción de bioplásticos y la biodegradación
de diversos contaminantes.

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