UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

INGENIERÍA AMBIENTAL Y DE RECURSOS

NATURALES

“COLORACION DIFERENCIAL: TINCION GRAM”

CURSO:
Laboratorio 90 G-microbiología
ESTUDIANTE
FERNANDES PICOY JOSE
PROFESOR:
CANALES CUADROS HARRY

2018
Contenido

INTRODUCCIÓN .......................................................................................................................3

MARCO TEÓRICO.....................................................................................................................3

RESULTADOS ............................................................................................................................ 6

OTROS RESULTADOS .............................................................................................................................. 7

DISCUSION .................................................................................................................................8

CONCLUSION ............................................................................................................................. 8

BIBLIOGRAFIA ......................................................................................................................... 8
INTRODUCCIÓN

El tamaño de la mayoría de las células bacterianas resultan ser difíciles de ver en el

microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el
medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de
colorantes.
Si se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía, son
suficientes los procedimientos que usan un solo colorante llamado de tinción simple.
Sin embargo, a menudo se utilizan métodos que no tiñen de igual modo todas las
células, es el proceso denominado tinción diferencial. Uno muy usado en microbiología
es la tinción Gram. Basándose en su reacción a la tinción Gram, las bacterias pueden
dividirse en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. Esta tinción tiene gran
importancia en taxonomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la
pared celular de las distintas bacterias.

MARCO TEÓRICO
TINCION GRAM

La tinción de Gram es una técnica diferencial comúnmente

empleada en el diagnóstico microbiológico, fue descubierta por
Hans Christian Gram en 1884. La mayor parte de las muestras
sometidas a examen cuando se sospecha infección bacteriana
deben ser extendidas en frotis sobre laminillas de vidrio, teñidas
y examinadas en el microscopio. Los reactivos empleados en la
tinción de Gram son el cristal violeta (colorante básico), lugol
(mordiente), alcohol cetona (decolorante) y safranina (colorante
de contraste).

El cristal violeta sirve como colorante

básico uniéndose a la pared celular
bacteriana, con ayuda del mordiente
(lugol) que refuerza la unión del colorante. Las bacterias Gram
positivas, debido a la estructura y composición bioquímica de su
pared celular retienen el complejo cristal violeta-lugol y aun
después del tratamiento con el decolorante conserva el colorante
básico, por lo que se observan de color púrpura o violeta al
microscopio.

Las bacterias Gram negativas pierden el colorante básico cuando

son tratadas con el decolorante debido a que el alcohol disuelve el contenido lipídico de la
pared celular (lo que aumenta la permeabilidad celular), dando como resultado la pérdida del
complejo cristal violeta-lugol. Las bacterias decoloradas captan entonces el colorante de
contraste, razón por la cual estas bacterias se observan de color rojo al microscopio.
Productos que
se utilizan Reacción y coloración de las bacterias

GRAM + GRAM -
1) Cristal Células color violeta Células color violeta
violeta
2) Lugol Se forma el complejo CV-I. Las Se forma el complejo CV-I. Las
solución células continúan teñidas de color células continúan teñidas de color
iodada violeta. violeta.
3) Alcohol Se deshidratan las paredes Eliminación por extracción de
celulares. Se contraen los poros. grasas de las paredes celulares.
Disminuye la permeabilidad. El Aumenta la porosidad. El complejo
complejo CV-I no sale de las células CV-I se separa de la célula.
que continúan teñidas de color
violeta.
4) Safranina Células no decoloradas; quedan Células decoloradas; se tiñen de
teñidas de color violeta. color rosado.

En microbiología, se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que NO

se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado
tenue: de ahí el nombre de "Gram-negativas" o también "Gram negativas". Esta
característica está íntimamente ligada a la estructura didérmica dada por la envoltura
celular, pues presenta doble membrana celular (una externa y la otra citoplasmática),
lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana.
Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se
localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-
positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptidoglicano es mucho
más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.
ESTRUCTURA
La envoltura celular de las bacterias Gram-negativas está compuesta por una
membrana citoplasmática (membrana interna), una pared celular delgada de
peptidoglicano, que rodea a la anterior, y una membrana externa que recubre la pared
celular de estas bacterias.4 Entre la membrana citoplasmática interna y la membrana
externa se localiza el espacio periplásmico relleno de una sustancia denominada
periplasma, la cual contiene enzimas importantes para la nutrición en estas bacterias.
Retienen la safranina.
La membrana externa contiene diversas proteínas, siendo una de ellas las porinas o
canales proteícos que permiten el paso de ciertas sustancias. También presenta unas
estructuras llamadas lipopolisacáridos (LPS), formadas por tres regiones: el
polisacárido O (antígeno O), una estructura polisacárida central (KDO) y el lípido A
(endotoxina).
Las bacterias Gram-negativas pueden presentar una capa S que se apoya directamente
sobre la membrana externa, en lugar de sobre la pared de peptidoglicano como
sucede en las Gram-positivas. Si presentan flagelos, estos tienen cuatro anillos de
apoyo en lugar de los dos de las bacterias Gram-positivas porque tienen dos
membranas. No presentan ácidos teicoicos niácidos lipoteicoicos, típicos de las
bacterias Gram-
positivas. Las
lipoproteínas se unen al
núcleo de polisacáridos,
mientras que en las
bacterias Gram-positivas
estos no presentan
lipoproteínas. La
mayoría no forma
endosporas (Coxiella
burnetti, que produce
estructuras similares a
las endosporas, es una
notable excepción).
¿Por qué la Gram+ se tiñe de azul/violeta? Grampositivas: • Resistencia a la
decoloración • Capas péptidoglicano gruesa • Compuesto CV-I demasiado grande para
escapar
¿Por qué la Gram- se tiñe de rojo/rosa? Gramnegativas: • Membrana soluble solventes
orgánicos, lipopolisacáridos • Capas peptidoglicano fina • Retiene safranina

RESULTADOS
Poner sarro dental en la lámina
y esparcir

Para hacer la diferenciación se requiere un colorante de contraste que en esta ocasión

fue la safranina tiñendo esta solo al microorganismo Gram negativa de un color rojo-
naranja dándonos así por concluido el procedimiento para diferenciar las bacterias en
Gram negativa (roja) y Gram positiva (azul).
Para una mejor visualización en el microscopio se utilizó el aceite de inmersión

OTROS RESULTADOS

1. Cushuro

Se visualizan cianobacterias

HETEROCISTO
Fijan nitrógeno

2. Fruta podrido +lactofenol+ laminilla Hongo RHIZOPUS

DISCUSION
 En ésta práctica nuestro mayor problema fue el no poder aislar los
microorganismos correctamente, por esta razón tuvimos que repetir el
aislamiento para así poder tomar una muestra de nuestras colonias ya aisladas
y por ende obtener un buen frotis.
 Con respecto a la tinción, es muy importante seguir las indicaciones al pie de la
letra, ya que de no hacerlo así podríamos tener un resultado alterado, por decir
algo, podríamos dejar el alcohol – acetona un poco más de tiempo y esto haría
que nuestra tinción se vuelva más rosada que morada, afectando nuestro
criterio.

CONCLUSION
1. La tinción Gram es una prueba potente y rápida que nos permite diferenciar
dos clases de bacterias estas son: Bacterias Gram positivas y las Gram
negativas.
2. Las Gram positivas se tiñen de morado ya que el colorante se queda atrapad en
la capa gruesa de peptidoglicano que rodea a la célula.
3. Las Gram negativas tienen una capa de peptidoglicano mucho más delgada es
por ello que no retiene el violeta cristal y por esto las células se tiñen con
safranina y las observamos rojas.
4. Se concluye también que las Gram positivas retienen la tinción azul y Las Gram
negativas quedan decoloradas

BIBLIOGRAFIA
D.Male, Brostoff, J., Broth, D., & Roitt., I. (s.f.). Inmunología. España: Séptima edición.

Patrick R. Murray, K. S. (6ta Edicion 2009 ). Microbiologia Medica. Elsevier España.