BIOTECNOLOGIA

Presentado por:
Yudy Viviana Morales
Código: 37.086.500
Emil Deiby Diaz
Código:1085905827
Richard Harvey Cuaran Salazar
Codigo.1085290763
Ruben Dario Paredes
Cod.1085278427

Universidad Nacional Abierta y a Distancia – UNAD

Escuela De Ciencias Básicas, Tecnología E Ingeniería
CEAD Pasto
Octubre de 2018
 PRACTICA No. 3 CUANTIFICACION DE AZUCARES

OBJETIVO:
Establecer los métodos para cuantificar el consumo de diferentes tipos de sustrato por
diferentes microorganismos

Fundamentación Teórica
Los microorganismos consumen diferentes tipos de sustratos, pero poseen preferencia
por un tipo particular de sustrato y algunos resultan no consumibles para algunas
cepas de una especie en particular. Cuando dos o más sustratos están
presentes en el medio de cultivo, los microorganismos no los consumen por
igual, sino que consumen preferencialmente uno de ellos hasta agotarlo. Solo en
este punto inician el consumo del siguiente sustrato preferido.
Este fenómeno se conoce como diauxia.Esa preferencia por un sustrato en particular es
diferente para cada una de las cepas de un organismo, y puede ser medida
como la variación en la velocidad de crecimiento, consumo de sustrato o
generación de producto.

Procedimiento:
Curva patrón (Concentración de azucares totales)
A partir de caldo estéril (5 g/l = 5000 mg/l = 5.000.000 ug/l) obtenga una solución de
150 ug/l (solución estándar)
A partir de la solución estándar prepare diluciones de 100 ug/l, 70 ug/l, 50 ug/l, 25 ug/l,
10 ug/l, y 5ug/l.
En un erlenmeyer de 50 ml y se le añade 1 ml de solución de fenol al 5 %,
mezclándolos bien.
Se añade entonces 5 ml de ácido sulfúrico al 95% se esperan 30 minutos y se lee la
absorbancia a 489 nm.
 PROCEDIMIENTO PRACTICA 3

➢ Del frasco de levadura se saque 10ml de la solución y se le agrega a la pectona

que está en 80% para trabajar al 90%.
➢ Agregar a la solución madre 10 ml con lactosa mono hidrató
➢ De la solución madre sacamos; 70 ul a los 90ml de pectona
➢ De la solución madre sacamos 50 ul a los 90 de la pectona
➢ De la solución madre sacamos 25 ul a los 90 de la pectona
➢ De la solución madre sacamos 10 ul a los 90 de la pectona
➢ De la solución madre sacamos 10 UL a los 90 de la pectona.
➢ El procedimiento para determinar la absorbancia. “50 mm de fenol”.
La medición de absorbancia de la fenolftaleína + ácido sulfúrico (H2SO4) 489.0
nm.
= solución (H2SO4) agrega 1 ml a cada tuvo de lactosa.

Con las siguientes lecturas:

 Se realiza la medición en el espectrómetro y se deja en la incubadora a 37°C,
para tomar datos en los tiempos requeridos.

Tiempo Solución madre 75µm/ Solución Solución Solución

(min) Absorvancia madre 50µm madre 25µm madre 5µm

0 0,012 0,013 0,007 0,005

30 0,017 0,014 0,008 0,005
60 0,022 0,016 0,010 0,005
90 0,024 0,021 0,014 0,006
120 0,027 0,025 0,018 0,007

Compañeros le agregó más datos para poder hacer la curva de crecimiento

Ahora toca hacer el análisis de acuerdo a la tabla y grafica

Análisis de grafica

Los valores obtenidos de esta grafica se evidencia que la solución que contiene más
absorbancia es la Solución madre con concentración 75µm.y la que se obtuvo una
menor absorbancia es la solución a concentración de 5µm. con esto se concluye que la
solución en concentración 75µm. es la óptima y con los mejores resultados que
evidencia que la lactosa es un azúcar que fácilmente se absorbe

Conclusiones:
A través de la técnica empleada con el espectrofotómetro que es un instrumento que
analiza el tipo de espectro. Estos espectros, de emisión o de absorción son como una
huella digital de las sustancias que forman nuestra naturaleza. Nos permitió a través de
la absorbancia de azúcar lactosa observar la cantidad de azúcar que absorbe como
fuente de energía
Además nos permitió en forma somera conocer el funcionamiento del espectrofotómetro
en la forma de manipular y establecer la cantidad de azúcar absorbida por cada
muestra para su posterior análisis.