UNIVERSIDAD DE LA SABANA

FACULTAD DE INGENIERÍA
LABORATORIO DE BIOTECNOLOGÍA

Observación e identificación de las células presentes en la bacteria Bacillus, la levadura, el hongo Penicillium
sp, la epidermis de la cebolla y en la mucosa bucal.
Ivonne Lorena Ramirez Parra Fecha de la práctica: 1 de Agosto del 2018
Maria Alejandra Franco Ospina Fecha de entrega : 15 de Agosto del 2018

1. Introducción
A lo largo de los años ha persistido la necesidad de estudiar las diferencias morfológicas de las células en los
diversos organismos, ya que el conocimiento de las diferentes estructuras como por ejemplo las bacterias han
permitido analizar cómo gran parte de estas se relacionan con el hombre debido a que pueden llegar a tener un
impacto positivo como uno negativo sobre nuestra salud , ya sea como integrantes de la flora normal o como
agresoras para el mismo, por ello es de vital importancia la identificación de sus estructuras bacterianas ya que
pueden llegar a ser inmunógenos muy importantes como los que han permitido el desarrollo de vacunas y han
aportado en el avance de la medicina en los últimos años, por tal razón la observación en el microscopio óptico
con el uso de distintas tinciones como la tinción de Gram tiene un rol importante en la identificación de las
bacterias y su ubicación taxonómica.

Por otra parte se tienen los hongos los cuales son microorganismos eucariotas de mayor tamaño que las bacterias
y según su morfología se pueden dividir en dos grupos, los mohos también llamados hongos filamentosos y las
levaduras que son unicelulares que generalmente presentan reproducción sexual por gemación las cuales son
importantes desde un punto de vista comercial debido a su característica de producir sustancias como etanol y el
dióxido de carbono, a su vez se pueden encontrar hongos como el Penicillium el cual presentan una estructura
vegetativa denominada micelio, el cual está formado por una serie de tubos rígidos ramificados, dentro de los
cuales se encuentra el citoplasma multinucleado. Estos tubos reciben el nombre de hifas. De esta forma a partir
de una espora en germinación se desarrolla una hifa, esta se ramifica y forma un micelio (Penicillium nd).

Finalmente se tiene las celulas eucariotas dentro de las cuales están la celula animal y la vegetal presentando
similitudes entre sí como lo son los ácidos nucleicos, proteínas, lípidos e hidratos de carbono, el mismo tipo de
reacciones químicas con el fin de almacenar energía y producir proteínas, teniendo como aspectos de diferencia
algunas partes de su estructura como la pared celular, las membranas celulares y la ausencia de orgánulos
(​Tortora, G., Funke, B. & Case, C, 2017)​. Por lo tanto, en el presente informe se verá reflejado el análisis
experimental en diferentes células dependiendo de la procedencia de las muestras o cultivos a trabajar.
 2. Objetivos
Objetivo General
Se busca observar e identificar las principales características y diferencias que se pueden llegar a presentar
entre las diferentes estructuras morfológicas de diferentes organismos como la bacteria Bacillus, la levadura,
el hongo Penicillium sp, la epidermis de la cebolla y en la mucosa bucal.
Objetivos específicos
● Observar por medio del microscopio las estructuras morfológicas de la bacteria Bacillus, la levadura, el
hongo Penicillium sp, la epidermis de la cebolla y la mucosa bucal.
● Diferenciar y reconocer las principales características de cada una de las estructuras de las diferentes
células
● Identificar los principales rasgos de cada una de las células, haciendo énfasis en sus partes más
significativas

3. Diagrama de flujo de la práctica

Figura 1. ​Diagrama de flujo general de la práctica de laboratorio

4. Resultados y discusión

A continuación se mostrará una serie de imágenes representativas a las diferentes tinciones trabajadas
experimentalmente en el laboratorio con: ​Bacillus​, ​S.cerevisiae​, ​Penicillium,​ células de epidermis y
epiteliales, con su respectivo análisis morfológico y microscópico:
 Figura 2.​ ​Bacillus​ observada en el laboratorio con aumento de 100x del objetivo del microscopio

En relación con la ​figura 2,​ se dice que hay presencia de bacterias ​Bacillus subtilis ​debido a la gran presencia
de las características morfológicas como lo son: cocobacilos, diplobacilos, estreptobacilos y empalizadas, es
decir bacilos de lado con lado o en figuras de X, V o Y, lográndose identificar mediante el uso de tinción ya
que estos permiten cambiar el color de las células de los microorganismos dado que las bacterias tienden a ser
casi incoloras, no presentan contraste alguno en el medio que se cultiva o que se encuentra y no son de
observación clara para su análisis (​Sambrosio, E, 2009)​.

Por otra parte, se confirmó tanto experimentalmente como en la literatura que dicha bacteria posee la
propiedad de teñirse mediante el respectivo procedimiento de tinción de gram arrojando color violeta en sus
resultados sin decolorarse a color rosa con la presencia de alcohol, debido a su menor contenido lipídico en su
pared celular y a su gruesa capa de peptidoglicano encontrada en su pared celular permitiendo que éste
retenga el color cristal violeta con ayuda de una superficie externa de proteínas y ácidos teicoicos
estabilizando la pared celular de la bacteria, lo cual indica que poseen células Gram positivas indicando que
es una bacteria formadora de endosporas ya que son aerobios estrictos siendo móviles mediante flagelos de
inserción peritrica (Mota, M).

Pese a que, según la figura mostrada anteriormente no solo se encuentran los diferentes tipos de bacilos sino
que también se encuentran áreas sin teñir o muy poco teñidas lo cual hacen referencia a endosporas y ovides
de posición subterminal, estos no se tiñen debido a que esta técnica utilizada es especializada para la tinción
de la bacteria a caracterizar (Macedo, M).
Levaduras

Figura 3. ​Saccharomyces cerevisiae observada en el laboratorio con un aumento de 40x del objetivo del
microscopio.

Con respecto a lo observado en el laboratorio, lo cual se ilustra en la figura 3 se observa que la levadura a
estudiar presenta las características morfológicas respectivas de este hongo unicelular dentro de los cuales se
observa que no presenta filamentos y que a su vez presenta una forma medianamente ovalada, a las cuales
según los principales tipos de morfológicos se denominan cocos, a su vez en la ​figura 3, es posible visualizar
la formación de unos brotes que parten según lo indicado por la teoría de la célula parental ya que se observa
cómo la célula perfectamente desarrollada forma una protuberancia lo cual sería la brotación que se observa
en su superficie externa (​Brock & Madigan, 2015).

A su vez se logra observar en alguna de estas células como después del formamiento de esta protuberancia,
esta trata de extenderse (alargarse), lo cual se debe a que el núcleo de la célula parental se divide al
presentarse esta extensión y un núcleo migra al interior del brote y consecuente a esto según la teoría, el
material de la pared celular se deposita entre el brote y la célula parental y como consecuencia se separa este
brote, fenómeno que se puede ilustrar en figura 3, Sin embargo en esta figura lo que más se ilustra son brotes
de la levadura que no lograron separarse y que su núcleo solo se quedó al interior del brote dando origen a
unas cadenas cortas entre las células, las cuales reciben el nombre de seudohifas ​(Tortora, Funke & Case,
2007).

Sin embargo es pertinente observar que en la figura 3, se ilustran unas células mucho más teñidas de azul que
otras esto es debido a que el azul de metileno utilizado para la tinción de este hongo genera que cuando se
tiene células vivas estas contienen enzimas que son capaces de reducir el azul de metileno a compuesto
incoloros, por ello al teñir la levadura con azul de metileno, este penetra dentro de las células y las enzimas de
las células vivas lo decoloran y debido a esto se observa que algunas células de la figura presentan un azul
claro o casi un color incoloro, sin embargo existen otras que se encuentran totalmente teñidas de azul esto
debido a que estas son células muertas las cuales no presentan enzimas vivas y esto genera que el tinte no
presente ninguna decoloración en la célula, adicionalmente esta tinción se pudo ver afectada por factores
como la fijación y los tiempos de tinción ("Microscopía Azul de metileno (C.I.52015)", 2017).
Hongos filamentosos

Figura 4. ​Penicillium sp​ observada en el laboratorio con un aumento de 40x del objetivo del microscopio.

A partir la figura 4, representativa del hongo filamentoso se dice que estos son microorganismos eucarióticos,
aerobios facultativos que se reproducen de manera natural por esporas, sexual o asexualmente, teniendo como
caracteristica principal la ausencia de clorofila, es decir, su nutricion debe ser a partir de materia organica ya
generada. Presentando con ella una estructura fúngica muy característica de los hongos filamentosos ya que
se constituye de hifas(​células de aspecto tubular, recubiertas de quitina, que forman en conjunto el micelio​) y
talo micelial (​Arias, L. and Piñeros, P. 2008)​.

En la figura 4 se puede observar casi perfectamente la estructura fúngica de los hongos y esto se debe al tipo
de tinción, ya que el azul de lactofenol utilizado experimentalmente trae cierto tipo de ventajas como lo es el
fenol que destruye toda la flora acompañante que no se requiere visualizar, el ácido láctico ayuda a proteger y
conservar las estructuras fundamentales del hongo, su fuerte acidez tomando un color azul claro de tinción
directa (​Castro, C. 2010)​.

Asociando los resultados con la estructura y la información pertinente dado el caso se puede decir que el resto
de la imagen pertenecen a una serie de esporas y/o conidios esféricos unicelulares pequeños ya que
posiblemente en esa parte de la muestra no se alcanzó a desarrollar la estructura fúngica completa del hongo o
no soy grandes y notables como las centrales debido a su desarrollo porque de no ser así la parte del fenol de
la tinción lo habría eliminado en su momento como algún tipo de flora extraña (​Castillo, L. 2018)​.
Células de epidermis

Figura 5. ​Células de epidermis (cebolla)​ observada en el laboratorio con un aumento de 40x del objetivo del
microscopio.

En la figura 5 se puede observar y distinguir las principales partes de la célula eucariota vegetal, por ejemplo
las líneas de forma hexagonal que limitan las zonas de la célula comúnmente llamada pared celular, los
circulos cafe intenso contenidos dentro de alguna zona de la célula es característico de los núcleos, las
manchas o círculos amarillo quemado puede representar parte del citoplasma o vacuolas (​Blanco, E. 2012)​.

La presencia u observación de las partes presentes en la células de esta muestra se debe al colorante utilizado,
en este caso el lugol compuesto por yodo molecular reaccionando con los azúcares que puede presentar la
estructura helicoidal presente posiblemente en la muestra y ayude a teñir el núcleo de las células y/o hacerlo
más visible para su análisis y posible distribución de partes presentadas en la muestra a partir de la tinción
(​Sánchez, M and Pinto, G. 2013)​.

Células epiteliales

Figura 6. ​Células epiteliales (mucosa bucal) observadas en el laboratorio con un aumento de 40x del
objetivo del microscopio
 En la figura 6 se observan las células epiteliales de la mucosa bucal obtenidas por medio de una frotis con un
palillo en la parte interna inferior del labio, allí se observan algunas células sueltas de forma irregular a su vez
se observan que presentan una forma plana, sin embargo solo en algunas es posible observar un poco el
núcleo, el cual se encuentra en el centro de la célula y de un color azul más oscuro, a su vez si se observa con
detallamiento la figura se puede ver la membrana celular y el citoplasma de la célula, sin embargo la
visualización no es muy clara o en muchas veces el color azul del azul de metileno está muy fuerte y no deja
observar una imagen clara y concisa de la célula en muchos casos, esto debido a que como el empleo de estos
colorantes pueden generan una gran ventaja para el análisis de la morfología de las células ya que en la
mayoría de los casos permite que esta sea identificada de una forma más clara, sin embargo en este caso las
altas concentraciones de colorante generaron que en algunas células no fuera posible identificar nada
(Gil-Loyzaga, 2011).

Por otra parte en la figura 6 posiblemente pudieron existir a parte de las células epiteliales de la mucosa
células descamativas debido a que la mucosa bucal cuenta con regeneración, lo cual significa que las células
se encuentran en las capas más profundas y siguen un ciclo vital hasta encontrarse en la capa superficial y
descamarse, y así sucesivamente, como también ocurre con la piel, donde el ciclo de regeneración celular se
lleva a cabo cada 30 días aproximadamente y es mucho más evidente (García Gil & Olmos Martínez, 2009)

Preguntas
¿Cual es el objetivo del aceite de inmersión?
Tiene como objetivo aumentar la resolución de un microscopio mediante la inmersión de la lente objetivo y el
espécimen en un aceite transparente de alto índice de refracción.
¿Cuales fueron los tipos de tinciones aplicados?
Se llevó a cabo la tinción simple, es decir utilizando un solo colorante en la gran mayoría de los procedimientos
experimentales, exceptuando la tinción de Gram que es perteneciente a las tinciones diferenciales para la
determinación de la bacteria ​Bacillus.

Conclusiones
● Las bacteria poseen ciertas diferencias estructurales con respecto a las células animales, en la práctica se
pudo evidenciar ya que en algunas observaciones se identificaban las partes claves y/o únicas de ese tipo
de célula, por ejemplo la pared celular en la cebolla.
● Con respecto a la levadura fue posible evidenciar casi por completo todas las características
morfológicas de este hongo y a su vez identificar qué efectos tiene sobre la célula el tinte azul de
metileno haciendo posible la identificación de los brotes dados en las células.
● Finalmente con respecto a las células epiteliales se tiene que su identificación fue un poco difícil por la
concentración de azul de metileno en la célula que dificulto la observación de las características
morfológicas de la célula, sin embargo fue posible determinar ciertas partes como el núcleo, el
citoplasma y la membrana celular.

Bibliografía
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Pearson Educación.
● García Gil, U., & Olmos Martinez, F. (2009). ​Atención Geriátrica (p. sección 9). España:
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