Espectofotometría

Alcance: La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite

determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las moléculas
absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la cantidad de luz absorbida
depende de forma lineal de la concentración, el espectrofotómetro es un instrumento con
el que se apoya la espectrofotometría para medir la cantidad de intensidad de luz
absorbida después de pasar a través de una solución muestra. Este instrumento tiene la
capacidad de proyectar un haz de luz monocromática a través de una muestra y medir la
cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra.

Definiciones:
Procedimiento:
1. Conectar el cable de alimentación del espectrofotómetro UV GENESYS 20 a un
contacto debidamente polarizado.
2. Encender el aparato con el apagador que se encuentra en la parte posterior del
espectrofotómetro, oprimiéndolo del lado de la línea horizontal) y esperar a que
la pantalla marque unos números.
3. Presionar el botón A/T/C para ajustar el tipo de variable que se va a medir. Para
transmitancia la pantalla debe marcar %T, para absorbancia debe indicar A y
finalmente para concentración debe seleccionarse C.
4. Ajustar la longitud de onda a la que se van a leer las muestras, presionando los
botones que se muestran en la Fig. 3. Con la flecha hacia arriba se aumentan los
nanómetros (nm) y con la flecha hacia abajo se disminuyen. El intervalo de
operación del equipo va de los 325 a los 1100 nm.
5. Tomar una celda, sujetándola con los dedos únicamente por la parte opaca o
rallada, por la cual no pasará el haz de luz. 6.1.6 Añadir el blanco a la celda,
llenándola hasta ¾ partes de su altura.
6. Levantar la tapa del espectrofotómetro e insertar la celda con los lados
transparentes hacia el frente y hacia atrás
7. Bajar la tapa del espectrofotómetro y presionar el botón para llevar a ceros la
pantalla,
8. Levantar la tapa del espectrofotómetro y retirar la celda de la lámpara.
9. Repetir los pasos 5 a 9 con las muestras a analizar, sin olvidar siempre cerrar la
tapa para leer y registrar las absorbancias.
10. Al terminar de leer las muestras, apagar el espectrofotómetro, regresando el
apagador al lado del círculo, desconectar el cable de alimentación y colocar la
funda de protección sobre el equipo.

Limpieza del equipo

 Enjuagar suficientemente las celdas con el disolvente con el que se efectuaron las
mezclas y secarlas con papel toalla.
 Limpiar la superficie exterior con un trapo seco, a fin de retirar el polvo que pueda
acumularse ahí.
 Cubrir el espectrofotómetro con su funda de plástico.
Precauciones
a) Coloque el instrumento en un lugar en donde no esté sujeto a vibraciones, calor
excesivo, humedad o luz directa.
b) Proteja el instrumento del polvo. Nunca toque las superficies ópticas tales como
lentes y filtros. Siga las instrucciones que da el fabricante para la limpieza de tales
componentes.
c) Permita que el instrumento se caliente antes de hacer algún procedimiento.
d) Se debe hacer un chequeo periódico (cada semana) de la calibración de la longitud
de onda, cuando se sospeche que ha variado, con el Tubo de Didimium.
e) Verifique el 0 y el 100% T cada vez que se vaya a hacer lecturas y cuando varíe
la longitud de onda.
f) Asegúrese de que las cubetas estén limpias y libres de ralladuras y huellas
digitales.

Procedimientos Normalizados de Trabajo

El espectrofotometro se lo puede utilizar para determinar las reacciones enzima-
catalizadores, examinar la sangre o los tejidos para el diagnóstico clínico es decir permite
el estudio a nivel bioquímico de cualquier biomolécula presentes en soluciones o en
muestras biológicas, la posibilidad de realizar medidas directas de muestras sin importar
el estado en el que se encuentre (sólido o líquido) con mínima o nula manipulación de la
misma para un análisis químico, de la misma manera pudiendo controlar los procesos de
producción de los diferentes fármacos como también de las diversas formas farmacéuticas
que puedan adoptar.