Universidad Nacional Autónoma de México.

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.

Química Farmacéutica Biológica.

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA GENERAL I.

Grupo: 2652.

Equipo: 9.

INTEGRANTE FIRMA
Benítez García Gabriela Sugey. Gabriela Sugey
Benitez García

Informe de la práctica:

PATOGENICIDAD Y VIRULENCIA

Fecha de entrega: lunes 13 de marzo de 2017.

 PATOGENICIDAD Y VIRULANCIA.
Objetivos:

Comprender y observar los mecanismos de patogenicidad y virulencia de un

grupo de microorganismos.

Diagramas de flujo:

 Catalasa
Sobre un portaobjetos
Sobre la muestra adicionar
Inicio (limpio) se colocar (en
condiciones estériles) una una gota de peróxido de
muestra de la cepa problema. hidrogeno.

Cepas:
S. aureus Se coloca una muestra
S. pyogenes de cada una de las cepas.
K. pneumoniae
Observar si
E. coli existe
P. aeruginasa reacción.
M. lisodeikticus  Reactivos :
P. vulgaris Peróxido de hidrogeno.
B. subtilis  Material:
C. equi Portaobjetos.
S. typhi Asa bacteriológica.
M. Phlen

 Coagulasa
Previo a la práctica, se realizó extracción sanguínea
a una persona (voluntario). Y se separo el plasma.

Catalasa libre y ligada: agregar 0.5 En condiciones asépticas, con el

Inicio mL de plasma en un tubo de asa bacteriológica tomar una
ensaye. muestra de la cepa S. aureus y
suspender en el plasma.
Catalasa ligada: colocar una gota de plasma
Cepa: en un portaobjetos y en condiciones asépticas
S. aureus agregar una azada de S. aureus y se mezclar.

Mezclar un poco e incubar a

Material: 37ºC por 2 horas.
Observar si existe
Tubo de ensaye. suspensión o no en la
Cubreobjetos. prueba.
Asa bacteriológica.
  Hemolisinas

Previo a la práctica se
preparo y se incubó una
placa de agar sangre.

Una placa de agar sangre, En su respectivo

dividir por la mitad (línea cuadrante, sembrar por
Inicio
imaginaria). estría las cepas S.
pyogenes y S. aureus.

Cepas:
S. pyogenes Leer el tipo de hemolisis. Incubar a 37º C por 24
S. aureus horas.

Material:
Placa de agar sangre.
Asa bacteriológica.

Resultados:

Se realizaron pruebas que revelaron algunas cualidades que tienen ciertos

microorganismos para producir patogenicidad y virulencia.

Tabla 1. Resultados de las pruebas realizadas a cada cepa.

Nombre de microorganismo / Prueba Catalasa Coagulasa Hemolisis Capsula
Escherichia coli Positiva ------------* -------------* -------------*
Streptococcus pyogenes Negativa ------------* β-hemolisis -------------*
Staphylococcus aureus Positiva positiva No-hemolisis -------------*
Pseudomonas aeruginosa Positiva ------------* -------------* -------------*
Micrococcus lysodeikticus Positiva ------------* -------------* -------------*
Klebsiella pneumoniae Positiva ------------* -------------* Positiva
Proteus vulgaris Positiva ------------* -------------* -------------*
Bacillus subtilis Positiva ------------* -------------* -------------*
Corynebacterium equi Positiva ------------* -------------* -------------*
Salmonella typhi Positiva ------------* -------------* -------------*
Mycobacterium phlen Positiva ------------* -------------* -------------*
Los datos reportados con asterisco (---*) indican que la prueba no se realizó a la cepa correspondiente de
dicha fila.
Cuadro 1. Resultados en imágenes: prueba de catalasa.
Imagen 1. Prueba de catalasa: Escherichia coli. Imagen 2. Prueba de catalasa: S. pyogenes

Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una reacción Reacción negativa de Streptococcus pyogenes con
positiva de E. coli con peróxido de hidrogeno. peróxido de hidrogeno. No se observa efervescencia.

Imagen 3. Prueba de catalasa: S. aureus Imagen 4. Prueba de catalasa: P. aeruginosa.

Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una reacción Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una
positiva de Staphylococcus aureus con peróxido de reacción positiva de Pseudomonas aeruginosa con
hidrogeno. peróxido de hidrogeno.

Imagen 5. Prueba de catalasa: M. lysodeikticus. Imagen 6. Prueba de catalasa: K. pneumoniae.

Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una reacción

Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una
positiva de Micrococcus lysodeikticus con peróxido de reacción positiva de Klebsiella pneumoniae con
hidrogeno. peróxido de hidrogeno.

Imagen 7. Prueba de catalasa: P. vulgaris. Imagen 8. Prueba de catalasa: B. subtilis.

Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una reacción

positiva de Proteus vulgaris con peróxido de hidrogeno. Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una
reacción positiva de Bacillus subtilis con peróxido de
hidrogeno.

Imagen 9. Prueba de catalasa: C. equi. Imagen 10. Prueba de catalasa: S. typhi.

Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una reacción

positiva de Corynebacterium equi con peróxido de Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una
hidrogeno. reacción positiva de Salmonella typhi con peróxido de
hidrogeno.

Imagen 11. Prueba de catalasa: M. phlei. Presento burbujeó por lo que se le atribuye a una reacción positiva
de Mycobacterium phlei con peróxido de hidrogeno.
Cuadro 2. Imágenes: prueba de hemolisis.
Cepas problema.
Imagen 12. Streptococcus pyogenes : Imagen 13. Staphylococcus aureus: Cultivo
Cultivo de S. pyogenes en Agar sangre. de S. aureus en Agar sangre.

Producción de β hemólisis dentro de las 24 horas de No se observo hemolisis dentro de las 24 horas de
incubación en medio de Agar sangre. incubación en medio de Agar sangre.

Cuadro 3. Imágenes: prueba de cuagulasa.

Cuagulasa ligada (prueba en placa). Cuagulasa libre y ligada (prueba en tubo).
Imagen 14. Staphylococcus aureus: Imagen 15. Staphylococcus aureus:
contenido en placa de S. aureus con plasma. contenido en tubo de S. aureus con plasma.

Prueba positiva, debido a la precipitación de la Prueba positiva, debido a la precipitación de cuagulasa

cuagulasa ligada. libre y cuagulasa ligada.

Cuadro 4. Tinción de capsula.

Imagen 16. Klebsiella pneumoniae: tincion
de capsula por tecnica de rojo congo.

En una tinción de Rojo Congó el género Klebsiella se observa

de la siguiente manera: Bacilos cortos sin agrupación definida,
con cápsula de color rojo.
Análisis de resultados:

Las estructuras celulares así como la variedad de sustancias que producen los
microorganismos, les permite evadir algunos mecanismos de defensa del
huésped. Es por ello que en la presente practica se realizaron pruebas para la
identificación de sustancias que confieren los mecanismos de patogenicidad y
virulencia.

 Catalasa.

La prueba de catalasa se realizo para cada una de las cepas que se encuentran
descritas en la tabla 1. Se reporto que la prueba es positiva o negativa con base
en la reacción que se genero al agregar peróxido de hidrogeno a la muestra de
cepa contenida en el portaobjetos, es decir, si al agregar peróxido de hidrogeno
se observo burbujeo o efervescencia se estableció como prueba positiva. Y si
por el contrario esta no presento dicha característica se reporto como prueba
negativa (las reacciones de cada cepa, se pueden observar en el cuadro 1).

Como se describe en la tabla 1 la cepa de Streptococcus pyogenes dio resultado

negativo a la prueba de catalasa, este dictamen puede atribuirse a la nula
producción de la enzima catalasa como mecanismo de defensa de dicha
bacteria. Esto no hace referencia a que la bacteria se encuentre desprotegida o
no genere mecanismos de defensa que le den un grado de patogenicidad y
virulencia, si no que produce otras enzimas que le confieran dichas
características, tal como la hialuronidasa.

En el caso de las bacterias que dieron como resultado catalasa positiva, el

burbujeo que presento al realizase la prueba, indica que utiliza dicha enzima
para desechar el peróxido de hidrogeno que es toxico para la bacteria,
descomponiéndolo en agua y oxigeno.

 Cuagulasa.

Se realizo prueba de cuagulasa (libre y ligada) con Staphylococcus aureus. Se

llevo a cabo de dos maneras diferentes; en tubo (para determinar ambas
cuagulasas) y en placa ( para determinar cuagulasa ligada).

La determinación de cuagulasa libre y ligada se evidencio mediante la aparición

de un coágulo en el substrato empleado para la identificación (Se puede observar
en el cuadro 3. Imagen 15.) que consistió en plasma humano.

En cuanto a la determinación en placa de la cuagulasa ligada, constituyo una

forma rápida de identificación del S. aureus, puesto que se observo aglutinación
en el sustrato( se puede observar en el cuadro 3. Imagen 14.). A pesar de ser
más rápida, presenta inconvenientes como: dar un resultado falso negativo o
aparecer resultados falsos positivos por no leerse rápidamente.

 Hemolisis.

La prueba de hemolisis, se realizo con la finalidad de identificar en

Streptococcus pyogenes y Staphylococcus aureus la producción de hemolisina,
enzima que lisa a los eritrocitos. Por esta razón se utilizo una placa de Agar
sangre.

Para ambos microorganismos se esperaba una β-hemolisis, esto debido a que

ambas bacterias se caracterizan por la producción de hemolisina. Mas sin
embargo solo se observo β-hemolisis en Streptococcus pyogenes. El resultado
obtenido no rechaza que S. aureus produzca hemolisina, puesto que como se
observa en el cuadro 2. imagen 13, no se logro aislar de manera correcta dicho
microorganismo. Otra de las variables que posiblemente afecto la prueba puede
deberse a que no se punciono correctamente en una parte del sembrado, por lo
que no se observo hemolisis de ningún tipo.

 Capsula.

Dicho método no se realizo el día que se llevo a cabo esta práctica, puesto que
se realizo con anterioridad. Se reporta en el presente trabajo, debido a que la
presencia de capsula en las bacterias, como es en el caso de Klebsiella
pneumoniae les confiere protección para no ser fagocitadas, aportándoles de
esta manera mecanismos de patogenicidad y virulencia.

En la imagen 16 se puede observar una tinción por el método de Rojo Congo de

Klebsiella pneumoniae (que se realizo en la práctica de tinciones), en la cual se
distinguen Capsulas de dicha bacteria. aunque la definición no es muy buena,
la tonalidad roja es lo que confiere de la capsula.

Conclusiones:

Las principales propiedades que tienen los microorganismos para sobrevivir y

multiplicarse es la producción de enzimas que actúan extracelularmente,
permitiéndoles de esta manera que se establezcan dentro del huésped con
relativa facilidad.

La presencia de estructuras capsulares permite a los microorganismos evitar la

fagocitosis, facilitando de esta manera la diseminación de los microorganismos
patógenos en el tejido.
Referencias:
 Murray. Microbiología medica. HARCOURT BRACE. Barcelona. 1997.
 Levinson. Microbiología e inmunología medicas. Editorial El manual moderno, S.A. de C.V. México
D.F. 1992.
 Koneman, E. W. Diagnostico Microbiologico. 5° ed. México. Editorial Panamericana.
1999.