Introducción

La esterilización es uno de los mecanismos donde se eliminan o mueren los

microorganismos vivos de algún medio, muestra o en el material de trabajo a utilizar.
Dentro de los microrganismos vivos se encuentran las bacterias, protistas, hongos y
virus. Cuando el objeto esta esterilizado es libre de microrganismos conteniendo sus
formas de resistencia; la esterilización no es una desinfección ya que en esta no se
logran eliminar todos los microrganismos, sino aquellos que causan enfermedad o
efectos deletéreos sobre los productos donde se encuentran alimentos o cosméticos,
etc. Por lo tanto un material desinfectado no está estéril. (Leahy et al., 1999).

La esterilización se consigue por lo general por medios físicos y de manera excepcional

por la práctica de compuestos químicos. Entre los métodos físicos más usados tenemos
la aplicación de calor ya sea calor húmedo o calor seco, la filtraciones o radiaciones o
por incineración. (Moldenhauer, J. 2009).

Los medios de cultivos son una mezcla de nutrientes que en condiciones y

concentraciones adecuadas físicas optimas, dan paso al crecimiento de los
microorganismos. Los constituyentes de los medios de cultivo son: agar, extractos
peponas, fluidos corporales, sistemas amortiguadores, indicadores de pH, agentes
reductores y agentes selectivos. En la actualidad la mayor parte de los medios de cultivo
son comercializados comúnmente bajo la forma liofilizados a los que se los rehidrata.
Antes de esterilizar en los medios líquidos se distribuye en tubos o matraces y si es un
medio solido se reparte en los recipientes adecuados pero ates se funde el agar en baño
María. (Cano, 2006; García 2009).

Al sembrar nos referimos a colocar de forma artificial una muestra en un medio

adecuado para iniciar un cultivo microbiano, tanto para su desarrollo y multiplicación; ya
sembrado se lo incuba a una temperatura favorable para su crecimiento (Ortega, 2009).
La técnica de aislamiento dispone de la descendencia de un individuo inmóvil sobre la
superficie de un medio sólido y apartada de los demás individuos presentes en el cultivo
mixto (García, 2009).

Objetivos
Objetivo general

 Realizar la preparación de medios de cultivo conociendo las técnicas adecuadas

de siembra y aislamiento de microorganismos y los procedimientos para la
esterilización de materiales y medios de cultivo.
Objetivos específicos
MATERIALES Y MÉTODOS

1 Esterilización de materiales y medios de cultivo

 Medio de cultivo no estéril:

- Agar Métodos Estándar (PCA)
- Caldo glucosado
 Autoclave
 Esterilizador
 Incubadora a 30 - 35 °C
 Pipetas de 10 ml / 5 ml
 Placas de Petri
 Algodón
 Papel de aluminio
 Baño María a 50 °C

El procedimiento se realizó siguiendo la guía de laboratorio de alimentos, práctica 1. La

muestra utilizada en la prueba de esterilidad de medios de cultivo fue una placa Petri de
PCA

2 Preparación de medios de cultivo

 Medios de cultivo liofilizados:

- PCA
- TSI
- Caldo glucosado
 Agua destilada
 Espátula
 Vórtex
 Plato calentador con agitación
 Autoclave
 Baño María a 50 °C
 Balanza
 Matraz Erlenmeyer 500 ml
 Vasos de precipitado 500 ml
 Frascos de vidrio graduado de 500 ml
 Pipetas de 10 ml
 Tubos de ensayo con tapa rosca
 Placas de Petri
  Algodón
 Papel de aluminio
El procedimiento se realizó siguiendo la guía de laboratorio de alimentos, práctica 1.
No se realizó la preparación de medios de cultivo solido e plano inclinado (slant) ni
la preparación de sustancias termo-sensibles. La muestra utilizada en la preparación
de medios fue PCA, TSI y caldo glucosado.

3 Siembra y aislamiento de microorganismos

 Medios de cultivo:
- Caldo glucosado
- Agar Plate Count (PCA)
- Agar Triple Sugar Iron (TSI)
 Muestras en placas de Petri y en caldos
 Asa de siembra y de Drigalski
 Mechero Bunsen
 Pipetas de 5 ml Placas de Petri estériles
 Incubadora

El procedimiento se realizó siguiendo la guía de laboratorio de alimentos, práctica 1. La

muestra utilizada en la siembra y aislamiento de microorganismos fue caldo glucosado
y agar.

¿Cuál es el objetivo de la siembra en masa?

Que mientras se incuban las colonias crezcan en el interior de la masa del agar.

- ¿Cuál es el objetivo de la siembra por picadura?

Realizar un estudio de la movilidad de las bacterias.

- ¿Cómo crecen los microorganismos en el agar?

El material alimenticio en el que crecen es el medio de cultivo y el crecimiento de

microorganismos es el cultivo reuniendo las condiciones necesarias como temperatura que si es
óptima su crecimiento es rápido.

- ¿Qué tipo de siembra sería el adecuado para microorganismos aerobios? ¿Por qué?

- ¿Qué tipo de siembra sería el adecuado para microorganismos anaerobios facultativos? ¿Por
qué?