OBJETIVO
 Aislar microrganismos con actividades específicas con base en criterios de
selección de fuentes naturales
DISCUSION
Las levaduras constituyen la causa
más común de alteración de frutas y
jugos, pues tienen azúcares
fermentables y elevada acidez1. Las
muestras presentadas al laboratorio
para estos aislamientos son frutas
cuyas características comunes son la
presencia moderada equitativa de
azucares así como los niveles de
acidez; Para su crecimiento el medio
SDA (Sabourand Dextrose Agar) es
escogido como una medida de presión
de selección debido a que favorece el
crecimiento de hongos/levaduras por
sobre el de las bacterias debido a su
alto contenido de glucosa (4% o 40g/L)
y un medio ligeramente acido (pH 5.5)
esto es debido a que los
microorganismos (en su mayoría) en
presencia de ácidos orgánicos,
empiezan a inhibir su transporte
celular y actividad enzimática,
deteniendo su crecimiento y ayuda a
la proliferación de los hongos2. Una
vez obtenidos las cepas y que sean capaces de empelar este
comprobado que estas cepas sean
levaduras con ayuda de la tinción de
azul de algodón, se resiembran en un
medio más selectivo como el PDA
(Potato Dextrose Agar) debido a que
la infusión de papa favorece el
desarrollo exuberante de hongos y
levaduras, mientras que el desarrollo
bacteriano es inhibido con el agregado
de ácido tartárico3.
Nuestras muestras de Manzana,
Tuna, Papaya & Melón fueron las que
pudieron pasar nuestros criterios de
selección primaria con el crecimiento
de levaduras viables en ambos
medios (SDA & PDA).
El almidón es la fuente de carbono
idónea en las fermentaciones
industriales. En la mayoría de los
casos y dadas las propiedades físico-
químicas de esta molécula, para que
pueda ser utilizada se requiere su
hidrólisis previa o simultánea. Las
amilasas son enzimas que hidrolizan
moléculas de almidón dando diversos
productos incluyendo dextrinas y
progresivamente pequeños polímeros
compuestos por unidades de glucosa.
Las amilasas pueden ser sintetizadas
de diversas fuentes incluyendo
plantas, animales y microorganismos.4
El medio C-AL (Castañeda-Almidón)
es un medio que proporciona una
selectividad por la fuente de carbono
utilizado que es el almidón, las cepas
medio generaran un halo de hidrolisis,
estos microorganismos son capaces
de producir amilasas produciendo
dextrinas y unidades de glucosa, estas
moléculas pueden emplearse para su
propia fuente de energía o de otros
microorganismos con los que forme
consorcios. La muestras a trabajar
fueron arroz y papa, la primera
selección entre ambos es un método
visual en donde, en donde el medio
que fueron cultivados ambos presento
turbidez, la muestra con mayor Sin embargo hay microrganismos que
turbidez se asocia con la que presenta pueden también se clasificados como
un mayor crecimiento y en la práctica halófilos débiles (2-5% de NaCl) y los
fue la muestra de arroz, el cual fue halo tolerantes, que habitualmente
transferido en al medio solido C-AL en viven mejor sin sal.5
donde se presentaron 4 colonias
Para el desarrollo experimental se
diferentes, una de ellas fue la aislada
debían aislar microrganismo
presentada en el reporte, una segunda
amiloliticos halófilos y proteolíticos
cepa (Bacillos) no presentaba
halófilos; Lamentablemente las
actividad amilo lítica, pero presento
muestras de jamón, papa, tortilla,
crecimiento, esto puede ser explicado
cecina, carne y arroz traídas para
por la degradación del almidón de
ambos tipos de microrganismos no
otras cepas permitiendo su
presentaron la cantidad suficiente de
crecimiento, la tercera y cuarta cepas
sal para el desarrollo de estos tipos de
(Bacilos & Cocos) estaban en
microrganismos, y por lo tanto al
consorcio, debido a que no se
sembrar estas muestras en medios
pudieron purificar y determinar cuál
salinos con una concentración de 8% ,
cepa era la que presentaba la
no pudieron crecer debido a que no
actividad (o si ambas presentaban
eran halo tolerantes ni halofilicos.
actividad enzimática) no serán
presentadas en la entrega de aislados. Una propuesta para este tipo de
microrganismos pudo ser aguas
La sal común en elevada
saladas (tales como agua de mar, y
concentración es considerada
arena de playa) así como muestras de
generalmente como un inhibidor del
camarón, crustáceos, peces marinos,
crecimiento microbiano. Sin embargo,
etc. Donde las concentraciones
existe una gran cantidad de
salinas son más altas., otra alternativa
microorganismos, llamados halófilos,
que se pudo haber empleado seria
que son capaces de vivir en presencia
cultivar el agua residual traída para
de altas concentraciones de sal.
microrganismos degradadores de
No todos los microorganismos fenol, sembrar y observar si había
halofilicos tienen los mismos algún microrganismos halófilo.
requerimientos de sal, por lo que se
El criterio de selección para estos
pueden clasificar en 2 tipos de
medios es el crecimiento en
halófilos propiamiente dichos.
concentraciones moderadas de sal.
 Halófilos moderados:
Siendo un hidrocarburo aromático el
Crecimiento optimo en medios
fenol (en términos de
entre 5 y 20% de NaCl
biorremediación), el fenol se deriva de
 Halófilos extremos:
compuestos como el hidroperóxido de
Crecimiento optimo en medios
cumeno, acido benzoico y cloro
entre 20-30% de NaCl
benceno. De masa cristalina incolora o
ligeramente amarilla rosada, de fuerte
olor característico, cáustico y toxico.
Soluble en agua y en solventes
orgánicos como éter, alcohol y
acetona. Tanto en su producción, y en
su uso como materia prima en
diferentes procesos productivos
(refinería de petróleo, resinas
sintéticas, manufactura de
explosivos), es vertido en aguas
residuales, lo que implica hacer
medidas preventivas en su descarga a
alcantarillados, como a cuerpos de
agua.7
Las aguas residuales de diferentes
procesos industriales pueden variar
entre 10mg/L y 3000mg/L, incluso
hasta 4000mg/L. Se logró el
aislamiento de un consorcio de
microorganismos degradadores de
fenol en un medio liquido mineralizado
con una concentración de 4000mg/L.
lo cual nos indica según lo descrito
anteriormente que se trata de
microorganismos con alta
degradación de este compuesto lo que
los hace muy eficientes y útiles para
procesos de biorremediación.
Microorganismos productores de
ácidos orgánicos.
No se logró el aislamiento de este tipo
de microorganismos en las muestras
presentadas (tortilla, tomate, papa),
atribuimos esto que tal vez la tortilla no
se incubo de manera adecuada para
permitir la propagación de hongos
tales como Aspergillus el cuál tiene
como característica la producción de
ácidos orgánicos.
Se observó el crecimiento de dos
hongos procedentes del tomate y
manzana en el medio Foster, también
se observó el viré de color en el medio
debido a una acidificación, lo cual nos
indica un positivo o un falso positivo a
producción de ácidos orgánicos. Al
resembrar en medio Foster más
carbonatos para la confirmación de
que son productores de ácidos
orgánicos observamos que estos
hongos no fueron capases de
solubilizar al carbonato; por lo cual se
atribuye el vire del indicador en el
medio Foster a una carboxización del
sustrato.
Recordemos que le medio Foster es
selectivo para la detección de mohos
y levaduras su contenido elevado de
nutrientes y dextrosa ayudan a la
proliferación de este tipo de
microorganismos y el bajo pH evita el
crecimiento de bacterias [8] además la
presencia de fosfatos obliga a que los
hongos produzcan ácidos orgánicos
para la solubilización de estos. [9]
Se logró el aislamiento de un
microorganismo proteolítico de cecina.
Basándonos en que la carne es rica en
proteínas y en este caso se trata de
carne con una concentración alta de
sales se pretendía el aislamiento de
microorganismos proteolíticos
halofílicos.
El medio en el que se sembró es rico
en caseína lo cual nos da una buena
fuente de nitrógeno además de ser un
cultivo enriquecido debido a la adición
de extracto de levaduras.
En este medio se observó un halo de
hidrolisis, lo que revela que el
microrganismo es capaz de producir
proteasas que catalizan la hidrólisis de
los enlaces peptídicos de la caseína.
Las proteasas neutras muestran
actividad optima en pH cercanos a la
neutralidad, tal como el que ofrece el
medio de 7.2.
CONCLUSION:
 Para aislar microorganismos es
necesario un medio selectivo.
 Los criterios de selección primaria
se basan en análisis cualitativos
(Crecimiento microbiano).
BIBLIOGRAFIA:
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Alimentos, Capitulo 4, pág. 40-
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http://www.britanialab.com.ar/e
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las 16:30hrs
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(En línea) Disponible:
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07/09/16 a las 18:30hrs.
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http://www.dibico.com/fichast/1
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10. Aislamiento y caracterización
de microorganismos
termofílicos anaerobios,
lipolíticos, proteolíticos y
amilolíticos de manantiales
termominerales de Paipa e Iza
.http://javeriana.edu.co/biblos/t
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consultado 06/09/16 20:00hrs