PROCEDIMIENTO DE EVALUACION IN VIVO: EXTRACTION OF

MEDICAL PLASTICS

I. OBJETIVOS

 Determinar la respuesta biológica de animales a materiales

elastoméricos, plásticos y otros materiales poliméricos en contacto
directo o indirecto con el paciente o mediante la inyección de extractos
específicos preparados a partir del material de análisis.

II. REFERENCIAS

2.1 ASTM Standards:

 F 619 Practice for Extraction of Medical Plastics
 F 748 Practice for Selecting Generic Biological Test Methods for
Materials and Devices
 F 750 Standard Practice for Extraction of Medical Plastics

III. INFORMACION BASICA

a. Ensayos de reactividad biológica

Estos ensayos están diseñados para determinar la reactividad biológica

de materiales elastoméricos, plásticos y otros polímeros destinados a
estar en contacto directo o indirecto con pacientes. Pueden realizarse in
vitro o in vivo.
Para los objetivos establecidos en este capítulo se aplican las siguientes
definiciones:

 la muestra es el material o un extracto preparado a partir del

mismo
 el blanco consiste en la misma cantidad del mismo medio
empleado en la extracción de la muestra, tratado de la misma
forma que el medio que contiene la muestra a ensayar
 el control negativo es un material que produce una reactividad
reproducible y despreciable en las condiciones del ensayo
 el control positivo es un material que produce una reactividad
reproducible y de citotoxicidad moderada en las condiciones del
ensayo, como por ej., latex de goma.

1
 Los materiales poliméricos deben ensayarse en las condiciones en que
van a ser empleados. Si los materiales van a ser sometidos a
procedimientos de limpieza y/o esterilización, la muestra debe ser
preparada con material preacondicionado del mismo modo.

b. Ensayos de reactividad biológica in vivo

Estos ensayos evalúan la respuesta biológica de animales frente a

materiales elastoméricos, plásticos y otros polímeros o de extractos
específicos preparados a partir de los mismos.Se describen tres ensayos:

 El Ensayo de Inyección Sistémica y el Ensayo Intracutáneo se

emplean para evaluar la respuesta sistémica y local
respectivamente, luego de la inyección de una sola dosis de
extractos específicos del material a ensayar.
 El Ensayo de Implantación evalúa la reacción del tejido vivo
luego de la implantación del material como tal.

Estos tres ensayos se emplean también para evaluar materiales

destinados a la fabricación de envases y otros accesorios para uso en
preparaciones parenterales y para uso en dispositivos biomédicos e
implantes.

c. Ensayo de inyección sistémica

Este ensayo se emplea para evaluar la respuesta sistémica a los

extractos de los materiales bajo ensayo, luego de la inyección a ratones.

Animales - Emplear ratones albinos sanos, no empleados en ensayos

anteriores, que pesen entre 17 y 23 g. Para cada grupo emplear ratones
de un mismo origen. Proveer agua y alimento ad libitum.

IV. PARTE EXPERIMENTAL

a. Materiales y Reactivos

1. Materiales

 Guantes quirúrgicos
 Autoclave
 mufla

2
  Recipiente para baño maría capaz de soportar 37, 50,
70 °C
 8 envases de extracción con tapa rosca de vidrio Tipo I
 Balanza
 Micrómetros capaces de medir las dimensiones de la
muestras de prueba a 0.025 mm (0.001 in).
 4Jeringas-Estériles, no más de 3 mL en volumen, con
una precisión de 6 0.10 mL.
 Ratones albinos
 Bolsas para almacenar sangre
 Malla de pescar (Polipropileno)

2. Reactivos

 Solución fisiológica (SR) estéril.

 Solución de alcohol en Solución fisiológica (SR) estéril
(1 en 20).
 Polietilenglicol 400.
 Aceite Vegetal - Aceite de sésamo (preferentemente
recién refinado) u otro aceite vegetal apropiado.
 Agua para Inyectables.

b. Procedimiento

Parte 1: Preparación del Extracto

o muestra para la prueba

Esta práctica está diseñada principalmente para su aplicación

a materiales en la condición en que se usan. El material debe
estar expuesto a todas las condiciones y sustancias como
durante la producción, lavado, empaque y esterilización.
La extracción se puede hacer en el elemento de uso final, en
porciones de espécimenes de los mismos, o especímenes de
prueba representativos moldeado o extruidos del compuesto
formulado que están pre acondicionados por el mismo
procesamiento.

1. Tamaño de muestra: use un tamaño de muestra como se

describe en siguientes secciones. Los contenedores de
3
 tamaño adecuado permitirán una dosis de 20 ml del
vehículo de extracción para cada uno de los siguientes
especímenes. Tamaños:

 La superficie total de una muestra (ambos lados) es

equivalente a 120 cm2 (18.6 in.2) cuando el espesor
de la muestra es 0.50 mm (0.020 in.) o menos, o
equivalente a 60 cm2 (9.3 in.2) cuando el espesor es
mayor a 0.50 mm (0.020 in)
 Una alternativa para especímenes de geometría
intrincada o aquellas muestras con un grosor mayor
a 1.0 mm (0.039 in) es una muestra cuyo peso es 0,2
g / ml.
 Las muestras deben ser de tales dimensiones como
para convenientemente encajar dentro del
contenedor de extracción y su superficie total la zona
estará completamente cubierta por el vehículo de
extracción.

2. Número de porciones de muestra: en ambos

procedimientos establecidos adelante en la extracción de la
respuesta biológica, pruebe al menos tres porciones de
muestra con cada vehículo de extracción para dar cuenta
de la variabilidad

3. Extracción de respuesta biológica: seleccione y corte

para tamaño, como en el paso 1 y 2, al menos tres porciones
de muestra para cada vehículo de extracción para ser
utilizado. Deben tomarse precauciones asépticas si el
líquido extraído se va a utilizar en una prueba que requiera
una técnica o si el extracto se va a almacenar durante más
de unos pocos horas antes de su uso.

4
o Extracción de respuesta biológica

1. Prepare un conjunto de cuatro porciones de 20 ml de cada

vehículo de extracción. Coloque una porción de muestra
apropiada en cada uno de los tres contenedores; el vehículo
de extracción en el cuarto contenedor servirá como un
muestra en blanco. Asegure la tapa en cada contenedor.

2. Condiciones de extracción: emplee uno de los siguientes

condiciones de acuerdo con los requisitos especificados.
Se debe permitir un tiempo suficiente, además de lo
especificado para que el líquido alcance la temperatura de
extracción. Es recomendado que la extracción se realice a
la temperatura más alta el material resistirá Si el material se
disuelve a 37 ° C, entonces la solución debe usarse en las
pruebas.
La mezcla durante la extracción es preferible hacerse de tal
manera que el extracto se mezcle con el vehículo de
extracción, pero el (fluido /interfaz del espécimen) no se
altera y no se deben formar burbujas de aire. La mezcla o
agitación no se debe intentar en el autoclave
Temperatura Tiempo(h)
37° C (95 6 1.8 ° F) 120
50°C (122 6 3.6°F) 72
70°C (158 6 3.6°F) 24
121°C (250 6 3.6°F) 1
*Para algunos protocolos de prueba la
extracción a 37 ° C es durante 24 horas o
72 horas

5
 Al retirarlo de la fuente de calor, enfríe los contenedores a,
pero no debajo, 22 ° C (71.6 ° F). Cuando esté frío, agite los
envases vigorosamente por 30 segundos y decantar el
líquido extraído en un contenedor adecuado.

3. Almacene los líquidos de extracto entre 22 y 30 ° C (71.6 a

86 ° F).
Use los líquidos de extracto dentro de las 24 h.

4. Para minimizar el número de animales de prueba requeridos

para determinar una respuesta biológica, es permisible
agrupar
extraer líquidos de tres porciones de muestra.

Parte 2: Evaluación del extracto mediante inyección sistémica en

el
Ratón

o Muestra y Espécimen para la prueba

5. La muestra es el plástico u otro material expuesto al

procedimiento de extracción. Como resultado de la
extracción, para cada vehículo de extracción allí están
disponibles: (1) un líquido de extracción de muestra, y (2)
un líquido de extracción en blanco .Estos líquidos extraídos
deben inyectarse en el prueba animales dentro de las 24 h
después de acabar el procedimiento de extracción.

6. Generalmente hay dos líquidos de extracto preparados a

partir de vehículo de extracción disponible para prueba.
Muestras basadas en otros vehículos de extracción pueden
estar disponibles, como se describe en la preparación del
extracto , o según lo requerido por la norma para el
dispositivo médico.

7. Método B, Intraperitoneal: se prepara el líquido extraído

de un vehículo de extracción de aceite vegetal. La dosis del
extracto líquido es 50 ml / kg de peso corporal para cada
ratón.

o Metodo B:

El Método B se debe usar con aceite vegetal y similares

6
vehículos de extracción designados para inyección
intraperitoneal.

8. Agite cada extracto de líquido vigorosamente antes de

retirarlo de cada dosis de inyección, para garantizar la
distribución uniforme de materia extraída Si el extracto
líquido contiene partículas,registrar e informar
observaciones.

9. Para cada vehículo de extracción, use diez ratones, cinco

para el muestra de extracto líquido y cinco para el extracto
líquido en blanco.Pese todos los ratones y registre su peso.
Usa un sistema de marcado para identificar a cada ratón
individual dentro de cada grupo de cuatro.

10. Inyectar la cantidad predeterminada en el paso 7 del

extracto de muestra líquido por vía intraperitoneal en cada
uno de los cuatro ratones. Inyecte el extracto de líquido en
blanco de la misma manera en cinco otros ratones

11. Observar todos los animales inmediatamente después de la

inyección, de nuevo 4 h después de la inyección, y luego no
antes de 24, 48 y 72 horas respectivamente, después de la
inyección se observaran síntomas para saber si son leves,
moderados, o marcan toxicidad o muerte (Tabla 1). Registre
las observaciones. Mida y registre los pesos corporales de
todos los animales a los 24, 48,y 72 h después de la
inyección

7
 V. RESULTADOS

La muestra cumple con los requisitos del ensayo si, durante el período de
observación de 72 h, ninguno de los animales inoculados con la muestra
presenta un grado de reactividad biológica significativamente mayor que los
animales inoculados con el blanco. Si dos o más ratones mueren o presentan
un comportamiento anormal como convulsiones o postración; o si la pérdida
de peso es mayor de 2 g en tres o más ratones, la muestra no cumple con
los requisitos del ensayo.

Reacción: si dos o más animales muestran síntomas de toxicidad o muerte,

entonces la muestra no cumple con los requisitos de la prueba.

VI. CUESTIONARIO

¿Qué tipo de respuesta se obtuvo del ensayo in vivo realizado?

VII. CONCLUSIONES

VIII. BIBLIOGRAFIA

http://servicios.infoleg.gob.ar/infolegInternet/anexos/85000-
89999/86181/dto202-2003-45.htm